MCF10A ve MDA-MB-231 hücre hatlarında HN1 ifadesinin proteozom'a etkısının incelenmesi
Investigation of the effect of HN1 expression on the proteasome in MCF10A MDA-MB-231 cell lines
- Tez No: 940066
- Danışmanlar: PROF. DR. KEMAL SAMİ KORKMAZ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biyomühendislik, Biology, Bioengineering
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 80
Özet
Önceki yapılan çalışmalarda bildirildiği üzere HN1 (Hematolojik ve Nörolojik ifade edilen dizi 1), normal hücrelere oranla tümör örneklerinde ve tümör hücre hatlarında yüksek düzeyde ifade edilmektedir. Mayalar hariç, ökaryotik tüm hücrelerde übikütöz olarak ifade edilen bu genin hücrelerdeki işlevlerine ilişkin bilgilerimiz halen sınırlıdır. Bu çalışmada, normal epitel meme dokusundan elde edilmiş olan MCF10A ve meme kanseri hücre hattı olan MDA-MB231 hücreleri kullanılarak, HN1'in konvansiyonel hücre kültür ortamında endozomal ve sentrozomal yerleşimini araştırmak amaçlanmıştır. Çalışmada, uygun kültür koşullarında sürekli olarak bakımı yapılan MCF10A ve MDA-MB231 hücreleri lentiviruslarla transgenik hale getirilmiştir. Hücrelerde HN1 ifadesi pCW57.1-HM-HN1 vektörü ile arttırılmış ve ayrıca shHN1vektörü kullanılarak ifadesi baskılanmıştır. Değiştirilmiş HN1 ifadesi durumunda sentrozomal proteinlerin hücre içi yerleşimleri ve ifade seviyeleri immünoflöresan mikroskopi ve immünoblotlama (western blot) yöntemleriyle incelenmiştir. Transgenik MCF10A ve MDA-MB231 hücrelerinde artan ve azalan HN1'in etkisiyle, ökaryotik hücrelerde ana mikrotübül organize edici merkezler olarak tanımlanan (MTOC) sentrozomlarda fosfo-PLK1 lokalizasyonlarında yapısal ve sentrozomların sayılarında önemli değişiklikler saptanmıştır. Ayrıca ana mikrotübül sentezinin merkezleri olan sentrozomlardan yayılan iğ ipliklerinin görünümlerinde de değişiklikler olduğu, B-tübülin ifadelerinin değiştiği gözlenmiştir. HN1 ifadesindeki değişikliklerin ökaryotik hücrelerde önemli bir bölünme bileşeni olduğu, sentrozomların yapısal kararlılığı için gerekli olduğu, yokluğu ya da azlığı koşullarında mikrotübül dinamiğinin etkilendiği, ayrıca hücre döngüsü sürelerinin değiştiği bu durumun mikrotübül ağının yapılanması ile ilgili olabileceği ileri sürülmüştür. Araştırma, ökaryotik hücrelerde HN1'in sentrozomun bir bileşeni olarak hücre bölünmesinde gerekli olduğunu ortaya koyması açısından bilimsel özgünlükte veriler sunmakta olup, ilerideki araştırmalara ışık tutacak niteliktedir.
Özet (Çeviri)
As reported in previous studies, HN1 (Hematological and Neurological Expressed Sequence 1) is expressed at higher levels in tumor samples and tumor cell lines compared to normal cells. The function of this gene, which is ubiquitously expressed in all eukaryotic cells except yeast, has not yet been fully elucidated. In this study, the aim was to investigate the endosomal and centrosomal localization of HN1 in MCF10A cells, derived from normal epithelial breast tissue, and in MDA-MB231 cells, a breast cancer cell line, under conventional cell culture conditions. MCF10A and MDA-MB231 cells, maintained in suitable culture conditions, were transduced with lentiviruses to become transgenic. In these cells, HN1 expression was upregulated with the pCW57.1-HM-HN1 vector and suppressed using the shHN1 vector. Under conditions of altered HN1 expression, the localization and expression levels of centrosomal proteins were examined. The effects of HN1 in this study were tested using immunofluorescence microscopy and immunoblotting (western blot) techniques. With the effect of increasing and decreasing HN1 in transgenic MCF10A and MDA-MB-231 cells, significant changes were detected in the structural and number of centrosomes in phospho-PLK1 localizations in centrosomes, which are defined as the main microtubule organizing centers (MTOC) in eukaryotic cells. It was also observed that there were changes in the appearance of spindle fibers emanating from centrosomes, which are the main centers of microtubule synthesis, and that B-tubulin expressions changed. It was suggested that changes in HN1 expression are essential for the structural stability of centrosomes, an important component of cell division in eukaryotic cells, and that its absence or reduction affects microtubule dynamics, possibly influencing cell cycle durations related to microtubule network organization. This research holds scientific originality by revealing the role of HN1 as a component of the centrosome necessary for cell division in eukaryotic cells, thereby providing insight for future studies.
Benzer Tezler
- Meme epiteli ve meme kanseri hücre hatlarında sinarin bileşiğinin apoptoz üzerine olan etkilerinin araştırılması
Investigation the apoptotic effects of sinarin compound on breast epithelium and cancer cells
BERNA ÖZDEM
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
Genetikİnönü ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İBRAHİM TEKEDERELİ
- Meme kanserinde CLDN10'un hücre döngüsü, hücre proliferasyonu ve hücre ölümü üzerindeki etkilerinin incelenmesi
Examination of the effects of CLDN10 on cell cycle, cell proliferation and cell death in breast cancer
AYTEN KILINÇLI ÇETİN
Doktora
Türkçe
2024
Tıbbi Biyolojiİnönü ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ELİF YEŞİLADA
- Meme kanserinde DHRS2 geninin rol oynadığı moleküler mekanizmaların incelenmesi
Investigation of molecular mechanisms involved by DHRS2 gene in breast cancer
BURCU SALMAN YAYLAZ
- Yeni bir tedavi olarak in vitro ve farede in vivo metastatik meme kanseri modellerinde nav1.5 kanalının hedeflenmesi
Targeting of nav1.5 channel in metastatic breast cancer models in vitro and in vivo mice as A novel therapy
MÜMİN ALPER ERDOĞAN
- Bazı probiyotik mikroorganizmaların farklı kanser hücre hatlarına sitotoksik etkisinin belirlenmesi
Determination of the cytotoxic effects of some probiotic microorganisms on different cancer cell lines
SEDA YALÇINKAYA
Doktora
Türkçe
2022
Gıda MühendisliğiSüleyman Demirel ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYNUR GÜL KARAHAN ÇAKMAKÇI
PROF. DR. SERAP YALÇIN AZARKAN