Geri Dön

Amfiregülinin melanom gelişimindeki rolü

The role of amphiregulin in progression of melanoma

PDF İndir

  1. Tez No: 941355
  2. Yazar: DİLARA KAMER ÇOLAK
  3. Danışmanlar: PROF. DR. HALİDE SEMA BOLKENT
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Genetik, Moleküler Tıp, Tıbbi Biyoloji, Genetics, Molecular Medicine, Medical Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2025
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa
  10. Enstitü: Lisansüstü Eğitim Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 128

Özet

Melanom, iklim değişikliği ile birlikte insidansı hızla artan en agresif deri kanseri türüdür. Mevcut tedavi stratejilerine karşı direnç geliştirmesi nedeniyle melanomun gelişim mekanizmasını açıklamak ve alternatif moleküler hedefler bulmak önemlidir. EGFR ligandlarından biri olan amfiregülin (AREG)'in birçok kanser türünde onkogenik bir aktivite gösterdiği tespit edilmiştir. Bununla birlikte AREG'in melanom gelişim mekanizmasına etkisi henüz detaylandırılmamıştır. Bu nedenle çalışmada, AREG'in canlılık, çoğalma, inflamasyon, hücre hareketliliği ve hücre ölümü üzerindeki etkilerinin CRISPR-Cas9 metodu ile AREG proteini baskılanmış B16F10 ve normal B16F10 hücrelerinde araştırılması amaçlandı. Bu hücrelere canlılık analizi ve akridin oranj/etidyum bromür boyaması yapıldı, hücre çoğalması ise tripan mavisi ile analiz edildi. İnvazyon için Boyden chamber ve hücre göçü için yara iyileşmesi deneyi yapıldı. CRISPR-Cas9 ile AREG geninde meydana getirilen nükleotit değişiklikleri SANGER dizileme ile incelendi ve AREG gen ifadesi kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (qRT-PZR), protein ifadesi ise immünositokimya yöntemi ile değerlendirildi. Apoptoz; kaspaz-3,-8,-9 ile, inflamasyon; interlökin 6 (IL-6), tümör nekroz faktör-alfa (TNF-α) ve nuklear faktör kappa B ile; hücre hareketliliği, matriks metalloproteinaz (MMP) -2 ve -9 ile qRT-PZR yöntemi kullanılarak değerlendirildi. Ayrıca MMP-2 ve MMP-9 enzim aktiviteleri jelatin yıkım analizi ile incelendi. Bulgularımız, CRISPR-Cas9'un nükleotit değişikliklerine neden olarak AREG'in gen ve protein ifadesini baskıladığını gösterdi. AREG'in baskılanması melanom invazyonunda ve göçünde rol alan MMP-2 ve -9, inflamasyonunda rol alan TNF-α ve IL-6'yı azalttı. Ayrıca, kaspaz-3, -8 ve -9 gen ifadelerinin artması apoptoz ile hücre ölümünü destekledi. Sonuç olarak melanom hücrelerinde CRISPR-Cas9 ile AREG'in baskılanması canlılığı, çoğalmayı, inflamasyonu ve hücre hareketliliğini azaltıcı, apoptozu ise artırıcı etki göstermiştir. Bu nedenle AREG'in melanom tedavisinde etkili bir terapötik hedef olarak değerlendirilebileceği öngörülmektedir.

Özet (Çeviri)

Melanoma is the most aggressive type of skin cancer, and its incidence has been rising rapidly in parallel with climate change. It is important to elucidate the mechanism of melanoma progression and to identify alternative molecular targets as it develops resistance to current treatment strategies. Amphiregulin (AREG), one of the EGFR ligands, has demonstrated oncogenic activity in various cancer types. However, the effect of AREG on the mechanisms underlying melanoma development has not yet been detailed. Therefore this study aimed to investigate the impact of AREG on cell viability, proliferation, inflammation, cell motility, and death on B16F10 cells with AREG protein suppressed by the CRISPR-Cas9 method and normal B16F10 cells. Viability analyses and acridine orange/ethidium bromide staining were performed on these cells, while cell proliferation was assessed using trypan blue. Boyden chamber for invasion and wound healing assay for cell migration were performed. CRISPR-induced nucleotide alterations in the AREG gene were validated by Sanger sequencing, AREG gene expression was assessed by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR), and protein expression by immunocytochemistry. Apoptosis by caspase-3, -8, -9, inflammation by interleukin 6 (IL-6), tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), and nuclear factor kappa B were assessed. Cell motility-related genes matrix metalloproteinase (MMP)-2 and -9 were assessed by qRT-PCR, and their enzymatic activities were evaluated via gelatin degradation assay. The results showed that CRISPR-Cas9 suppressed gene and protein expression of AREG by inducing nucleotide changes. The suppression of AREG reduced MMP-2 and -9, which are involved in melanoma invasion and migration, and TNF-α and IL-6, which are involved in inflammation. In addition, increased expression of caspase-3, -8 and -9 genes supported cell death by apoptosis. In conclusion, suppression of AREG by CRISPR-Cas9 reduced viability, proliferation, inflammation, and cell motility and increased apoptosis in melanoma cells. Therefore, AREG can be considered an effective therapeutic target in melanoma treatment.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    341874

    Kronik pankreatit hastalarında serum amfiregülin düzeyi tayini

    Determination of serum amphiregulin level in patient with chronic pancreatitis

    BÜLENT ÇOLAK

    Tıpta Yan Dal Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    GastroenterolojiGazi Üniversitesi

    İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET CİNDORUK

  2. Tez No

    311190

    Gebelik süresince inek uterusunda erbbreseptörleri ile epidermal büyüme faktörü, amfiregulin ve nörogulin dağılımının immunohistokimyasal olarak gösterilmesi

    Immunohistochemical expression of erbb receptors and epidermal growth factor, amphiregulin and neuregulin distribution in bovine uterus during gestation

    MEHMET ERDEM AKBALIK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    Histoloji ve EmbriyolojiDicle Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MUZAFFER AYDIN KETANİ

Geri Dön