Anoxybacillus flavithermus 2641t α-amilaz ve α-glukosidazının (oligo (1-6), (1-4) glukosidaz) ekpresyonu, karakterizasyonu, clea metodu ile immobilizasyonu
Expression, characterization, immobilisation by clea method of anoxybacillus flavithermus dsm 2641T α-amylase and α-glucosidase (oli̇go (1-6), (1-4) glucosidase
- Tez No: 943184
- Danışmanlar: PROF. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 125
Özet
α-Amilaz ve α-glukosidaz, Glikozit hidrolazın temsilcilerindendir. Bu tez kapsamında, Anoxybacillus flavithermus 2641T α-amilaz ve α-glukosidaz genlerinin klonlanması, ekspresyonları, rekombinant olarak üretilen enzimlerin biyokimyasal karakterizasyonları ve CLEA yöntemi ile immobilizasyonları yapıldı. α-Amilaz ve α-glukosidazın doğal PAGE ve zimogram analizleri yapılarak, optimum pH, optimum sıcaklık ve kinetik parametreleri belirlendi. Toprak alkali metaller, alkali metaller, potansiyel inhibitörler, iyonik ve non-iyonik deterjanların, organik çözücülerin α-amilaz ve α-glukosidaz üzerine etkileri araştırıldı. α-Amilazın, substrat olarak patates nişastası varlığında optimum pH'sı 6,0-8,0 aralığında bulundu. Enzimin optimum sıcaklığı 70 °C olarak belirlendi. Patates nişastası için, α-amilazın Lineweaver-Burk eğrisi ile Km değeri 1,14 mg/ml, Vmax değeri 31 U/mg olarak belirlendi. α-Glukosidazın substrat olarak pNPG varlığında optimum pH'sı 6,0-8,0 aralığında, optimum sıcaklığı ise 60 °C olarak belirlendi. Çapraz bağlı enzim agregatları (CLEA) metodu kullanılarak enzimlerin ayrı olarak ve birlikte immoblizasyonu yapıldı. İmmobilize α-amilazın da karakterizasyonu yapılarak, optimum pH'sı 8,0-9,0, optimum sıcaklığı 70 °C, Km ve Vmax değerleri sırası ile, 0,94 mg/ml ve 35 U/ml olarak belirlendi. İmmobilize α-glukosidaz için optimum sıcaklık 55 °C, optimum pH 6,0-8,0 ve Km ve Vmax değerleri sırası ile 0,66 mM ve 811 U/mg olarak belirlendi. Birlikte immobilize edilen enzimler için optimum sıcaklık 55 °C, optimum pH 7,4 olarak belirlendi.
Özet (Çeviri)
α-Amylase and α-Glucosidase are representatives of glyoxyl hydrolysis. In this study, cloning, expression, immobilization and characterization of α-glucosidase and α-amylase of Anoxybacillus flavithermus DSM 2641T were performed. α-amylase and α-glucosidase genes were produced recombinantly and purrified. Zymogram and Native PAGE analyses of α-amylase and α-glucosidase were performed, optimum pH, optimum temperature and kinetic parameters were determined. The effects of alkaline earth metals, alkali metals, potential inhibitors, ionic and non-ionic detergents, organic solvents on α-amylase and α-glucosidase activity were investigated. The optimum pH of α-amylase was between 6-8 in the presence of potato starch as a substrate. The optimum temperature of the enzyme was determined as 70 °C. For potato starch, the Km and Vmax values of α-amylase were 1.14 mg/ml and 31 U/mg by means of Lineweaver-Burk curve, respectively. The optimum pH for α-glucosidase in the presence of pNPG as substrate was found to be in the range of 6-8. The optimum temperature of the enzyme was 60 °C. The enzymes were immobilized separately and together by using the cross-linked enzyme aggregate (CLEA) method. The optimum pH for immobilized amylase was 8-9, the optimum temperature was 70 °C and the kinetic parameters were Km: 0.94 mg/ml and Vmax: 35 U/ml The optimum temperature for immobilized glucosidase was determined as 55 °C, the optimum pH as 6-8 and the kinetic parameters as Km: 0.66 mM and Vmax: 811 U/mg. The optimum pH for the co-immobilized enzymes was 55 °C and the optimum pH was 7.4.
Benzer Tezler
- Termofilik Anoxybacillus flavithermus DSM 2641T bakterisinin ptps geninin klonlanması, ekspresyonu ve enzimin biyokimyasal karakterizasyonu
Cloning and expression of PTPS genefrom thermophilic Anoxybacillus flavithermusdsm 2641T and biochemical characterization of its enzyme
EFSUN ÇELİK
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
BiyolojiRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FATİH ŞABAN BERİŞ
- Termofilik basillerin biyofilmlerindeki vejetatif hücrelerin ve sporların abiyotik çeşitli yüzeylere adezyonları ve tutunan bu hücre- sporların yüzeylerden eliminasyonu
Adhesion of vegetative cells and spores of Thermophilic bacilli biofilms on some abiotic surfaces and elimination of these cells- spores from the surfaces
AYŞE BÜŞRA KARAKAYA
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
MikrobiyolojiAnkara ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ARZU ÇÖLERİ CİHAN
- Anoxybacillus flavithermus bakterisinin ısıl kararlı guanozintrifosfat siklohidrolaz-I geninin klonlanması ve ekspresyonu
Cloning and expression of guanosintriphosphate cyclohydrolase-I from anoxybacillus flavithermus
ÖZLEM HIZAL
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
BiyoteknolojiRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. FATİH Ş. BERİŞ
- Termofilik Anoxybacillus flavithermus bakterisinin ısıl kararlı β-glukozidaz geninin klonlanması, ekspresyonu ve biyokimyasal karakterizasyonu
Cloning and expression of Afbgl gene from, Anoxybacillus flavithermus and biochemical characterization of thermophilic β-glucosidase
AYTÜL UZUN
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
BiyolojiRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. FATİH ŞABAN BERİŞ
- Anoxybacillus flavithermus WK1 AfCDA geninin klonlanması, ekspresyonu, saflaştırılması ve biyokimyasal karakteriasyonu
Cloning, expression, purification and enzymatic characterization of AfCDA gene from Anoxybacillus flavitheermus WK1
AYŞENUR EMİNOĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2012
BiyokimyaRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. CEMAL SANDALLI