Production of MBP-Taq I restriction endonuclease fusion protein by recombinant Escherichia coli harboring pETMET
MBP-Taq I restriksiyon endonükleaz füzyon proteininin pETMET plazmidi içeren rekombinant escherichia coli harboring pETMET
- Tez No: 95404
- Danışmanlar: PROF. BETÜL KIRDAR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya Mühendisliği, Chemical Engineering
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2000
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 95
Özet
Taq I restriksiyon endonükleaz enzimini kodlayan gen, MSP-Taq I füzyon proteininin ekspresyonu için pMAL-c2 plazmidine klonlanmıştır (p22). Füzyon proteininin tek aşamalı afinite kromatografisi ile saflaştırılması için MBP'nin amiloz'a afinitesi kullanıldı. Taq I endonükleaz geninin kendi ürettiği enzim tarafından kesilmesini önlemek için Taq I metilaz enziminin birlikte ekspresyonu tavsiye edilmiştir. Bu nedenle Taq I metilaz enzimini kodlayan gen PCR ile çoğaltılmış ve pET sistemi içine klonlanarak bu enzimin ekspresyonunu sağlayan pETMET adlı rekombinant plasmid yapılmıştır. Bu çalışmada E. coli hücreleri p22 ve pETMET ile bu iki genin birlikte ekspresyonunu sağlamak için dönüştürülmüştür. Yüksek verimli Taq I endonükleaz üretimi için konakçı hücre, indükleme zamanı ve süresinin optimizasyonu farklı rekombinant E coli suşlarmın kullanıldığı shake flask deneyleri ile yapılmıştır. En yüksek üretim (5.1 05 U/L Taq I endonükleaz aktivitesi) rekombinant E. coli TBI (p22, pETMET) hücrelerinin LB besi ortamında büyütülmesi ve erken büyüme evresinde 10 saat boyunca indüklenmesi ile elde edilmiştir. Büyüme hızı, biyokütle üretimi, plazmid kararlılığı, protein derişimi ve Taq I endonükleaz aktivitesi tam kontrollü fermentör ortamında incelenmiştir. En fazla toplam Taq I endonükleaz aktivitesine (7,5.1 05 Ünite/L) rekombinant E coli TBI (p22, pETMET) hücreleri SB besi ortamında 12 saat boyunca indüklenerek ulaşılmıştır. Sonuç olarak pETMET plazmidinin varlığının MBP-7İR7 I endonükleaz üretimini geliştirdiği saptanmıştır.
Özet (Çeviri)
The gene encoding the Taq I restriction endonuclease was cloned into pMAL-c2 plasmid to construct p22 expressing the MBP-Taq I fusion protein. The affinity of MBP to amylose was exploited for the single-step chromatographic purification. To protect the Taq I endonuclease gene from the cleavage by its own product, the co-expression of Taq I methylase was recommended. Therefore, the gene encoding the Taq I methylase was PCR amplified and a recombinant plasmid (pETMET) expressing this enzyme was constructed. In this study E. coli cells were transformed by p22 and pETMET. The optimum host strain, induction time and period using this system was determined by shake-flask experiments. The highest productivity (5.105 U/L Taq I endonuclease activity) was obtained when the recombinant K coli TBI (p22, pETMET) cells were grown in LB medium and induced at the early exponential phase of the growth for 10 hours. The growth, plasmid stability, and Taq I endonuclease activity were investigated under fully controlled operating conditions using a fermentor. The maximum total Taq I endonuclease activity (7,5.10 U/L) could be reached when the recombinant cells were induced for 12 hours in SB Medium. In conclusion, the presence of pETMET has slightly improved the yield of MBP-Taq I endonuclease production.
Benzer Tezler
- Production of Taq I restriction and modification enzymes by using two different expression systems
Taq I restriksiyon ve modifikasyon enzimlerinin iki farklı ekspresyon sistemi kullanılarak üretilmesi
EBRU TOKSOY
Doktora
İngilizce
2000
Kimya MühendisliğiBoğaziçi ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BETÜL KIRDAR
PROF. DR. ZEYNEP İLSEN ÖNSAN
- Cloning of TaqI endonuclease gene into E.coli and isolation of the enzyme by using pMAL-p2 vector system
pMAL-p2 vektör sistemi kullanılarak TaqI restriksiyon enzim geninin E.coli'ye klonlanması ve enzimin izolasyonu
PEMBE HANDE ÖZDİNLER
- Cloning and expression of TaqI restriction endonuclease gene using pmal-c2 vector system in different straints of escherichia coli
TaqI restriksiyon endonükleaz geninin pmal-c2 vektör sistemi kullanılarak değişik escherichia coli suşlarında klonlanması ve ekspresyonu
ELİF ÖZKIRIMLI
Yüksek Lisans
İngilizce
1998
Kimya MühendisliğiBoğaziçi ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF.DR. BETÜL KIRDAR
- Bazı değirmencilik yan ürünlerinin kek üretiminde kullanılması
Usage of some milling by-products on cake production
NURŞEN ÇAKIR
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
Gıda MühendisliğiNecmettin Erbakan ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NERMİN BİLGİÇLİ
- Moleküler baskılı polimerik nanomalzemelerin optik biyotarayıcı uygulamaları için tasarım ve üretimi
Design and production of molecularly imprinted polymeric materials for optical biosensing applications
ZEHRA OLUZ
Doktora
Türkçe
2019
BiyoteknolojiTOBB Ekonomi ve Teknoloji ÜniversitesiMikro ve Nanoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HATİCE DURAN DURMUŞ