Isolation, Characterization And In Vitro Culture of Mouse Leydig Cells: A Trial For Targeted Genome Editing Via CRISPR/Cas9
Fare Leydig Hücrelerinin İzolasyonu, Karakterizasyonu ve İn Vitro Kültürü: CRISPR / Cas9 ile Hedeflenen Genom Düzenlenme Denemesi
- Tez No: 958658
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ SERÇİN KARAHÜSEYİNOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Moleküler Tıp, Genetik, Histoloji ve Embriyoloji, Molecular Medicine, Genetics, Histology and Embryology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2018
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Koç Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Üroloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Üreme Biyolojisi Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Erkeklerdeki karakteristik özellikleri başlatan ve bu özelliklerin devamlılığını sağlayan ana steroid hormon olan testosterondur. Bu hormonun testiküler üretiminden çoğunlukla sorumlu olan Leydig hücreleri, erkeklerde en önemli hücre tiplerinden biridir. Bu açıdan, Leydig hücreleri, testosteron sentezi ile sonuçlanacak çok sayıda yolak gerektiren karmaşık bir hücresel sistem kullanan, son derece özelleşmiş hücrelerdir. Bu yolaklar, çeşitli konjenital veya edinilmiş nedenlerden etkilenebilir ve bu etki sonucunda yetersiz veya fazla testosteron üretimi gerçekleşebilir. Bu patolojileri tersine çevirmek için kullanılan yöntemler genellikle tıbbi tedavilere dayanmaktadır. Diğer yandan, genom düzenleme teknolojileri, genomik düzeyde uygulanabilecek tedaviler için bir umut olarak kabul edilmektedir. Daha kolay kullanımı nedeniyle, CRISPR / Cas 9 sistemleri günümüzde en popüler genom düzenleme teknolojilerinden biri olarak kabul edilmektedir. Bununla birlikte, tüm hücre tipleri aynı büyüme özelliklerine sahip olmadığından CRISPR / Cas 9 sistemlerinin etkisi, özellikle in vitro ortamlar düşünüldüğünde, her hücre tipi için eşit derecede etkili olmayabilir. Bu araştırmada, Leydig hücresinde işlevsel olarak çok önemli bir gen olan ve testosteron sentezleyen enzimi kodlayan 17β-HSD-3 geninin ekspresyonunun, in vitro kültür koşullarında, CRISPR / Cas 9 sistemi kullanılarak düzenlenmesi amaçlanmıştır. Bu amaca ulaşmak için, primer Leydig hücreleri, izolasyon deneyleri sonucunda belirlenen en etkin izolasyon yöntemi ile izole edilmiş, in vitro olarak kültüre edilmiştir. Kültüre edilen bu hücrelere CRISPR / Cas9 genom düzenlemesi yapılmıştır. Sonuçlar, in vitro kültürün, steroid sentezinde önemli olan genlerin ekspresyon profillerini, tolere edilebilen bir azalmadan tamamen susmaya kadar değişkenli gösteren bir verimlilikle etkilediğini göstermiştir. Ayrıca, 17β-HSD-3 gen anlatımının, CRISPR / Cas 9' a cevap olarak tamamen durduğu gözlemiştir. Bu çalışma ile, CRISPR / Cas 9 genom düzenleme teknolojisinin, primer hücre kültürlerindeki etkinliğinin, sistemin hücre hatlarında kullanımı ile elde edilen etkinlik kadar yüksek olamayabileceği sonucuna varılmıştır. Her ne kadar genom düzenleme teknolojileri ile hormon üretimine etki etme fikri çok umut verici olsa da, bu tür hücrelerde in vitro çalışmalar farklı yaklaşımlar gerektirebilir
Özet (Çeviri)
Leydig cells are one of the most important cell types in males, since these cells are responsible for the production of majority of testosterone which is the main steroid hormone that initiates and maintains the male features. In this respect, Leydig cells are highly specialized cells that use a complicated cellular machinery to include lots of pathways which would end up with testosterone synthesis. Interference of this pathway by a variety of congenital or acquired reasons can cause deficient or excess testosterone. Conventional methods to reverse such pathologies are usually based on medical therapies. On the other hand, genome editing technologies are currently considered as a future hope for such treatments that can occur at the genomic level. Because of relative simplicity in use, currently CRISPR/Cas 9 systems are considered as one of the most popular genome edition technologies. However, use of CRISPR/Cas 9 systems may not be equally effective for each cell type, especially in vitro, since not all cell types have the same growth characteristics. This research has aimed to detect if expression of 17β-HSD-3, a functionally very important gene that codes for the testosterone synthesizing enzyme in a Leydig cell, can be changed via use of CRISPR/Cas 9 in an in vitro culture system. In order the accomplish this purpose primary Leydig cells were isolated after the experimental selection of the most effective isolation method, isolated cells were in vitro cultured and CRISPR/Cas9 genome edition was performed for the cultured cells. The results have revealed that in vitro culture differentially changes the expression profiles of genes important in steroid synthesis in a range that varies from a tolerable decrement to a total shut down without any expression, and the targeted gene, 17β-HSD-3 has shown a total shut down, letting no interference for a genome edition. It can be concluded that, for in vitro cultures of primary mature cells, CRISPR/Cas 9 genome edition technologies may not work as efficiently as it works for cell lines. Although interference of hormone production via genome edition sounds very promising, in vitro trials with such cells may require different approaches.
Benzer Tezler
- Çeltik kabuklarının yalıtım malzemesi olarak kullanılması
Başlık çevirisi yok
B.CİHAN ÇELEBİ
Yüksek Lisans
Türkçe
1986
Makine MühendisliğiUludağ ÜniversitesiMakine Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MEHMET KIRBIYIK
- Marmara bölgesindeki kavun ve karpuz yetiştiriciliğinin bugünkü durumu, sorunları ve öneriler
The Status of melon and water melongrowing in Marmara region at present and its Problems and recommedations
MEHMET GÜLER
- Traditional vernacular houses in Anatolia: The question of evaluative criteria
Anadolu geleneksel yöresel konut mimarlığında değerlendirme ölçütleri sorunu
OKAN ÜSTÜNKÖK
Doktora
İngilizce
1987
MimarlıkOrta Doğu Teknik ÜniversitesiMimarlık Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÖNÜL TANKUT
- Bira ve alkol üretiminde kullanılan bazı enzimlerin mikrobiyal yolla eldesi
Başlık çevirisi yok
HÜSEYİN ÜSTÜNES
Yüksek Lisans
Türkçe
1985
Gıda MühendisliğiEge ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ULGAR GÜVENÇ
- Balıkesir tavukçuluk işletmelerinin yapısal özellikleri üzerinde bir inceleme
Başlık çevirisi yok
MEHMET TOSUN