scFv-Fc plazmit konstraktinin oluşturulmasi ve memeli hücrelerinde ekspresyonu
Generation of scFv-Fc plasmide constract and expression in mammalian cell
- Tez No: 960300
- Danışmanlar: PROF. DR. MUHAMMED HAMZA MÜSLÜMANOĞLU, DR. AYLİN ÖZDEMİR BAHADIR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Yıldız Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Hepatit B virüsü (HBV), siroz ve hepatoselüler karsinom gibi kronik karaciğer hastalıklarının gelişiminde önemli bir rol oynamaktadır. Ancak mevcut teşhis ve tedavi stratejilerinin çoğu, özgüllük, erişilebilirlik ve uzun vadeli etkinlik açısından çeşitli sınırlamalara sahiptir. Bu durum, yenilikçi yaklaşımların geliştirilmesi ihtiyacını doğurmaktadır. Bu tez, HBV yüzey antijenini hedef alan rekombinant bir Lig7 scFv-Fc füzyon proteinini eksprese etmeyi ve tedavi uygulamaları için potansiyel bir aday sunmayı amaçlamaktadır. Bu tez çalışmasında, Lig7 tek zincirli değişken fragmanına (scFv) ve Fc bölgesine ait sekansın pMod plazmit vektörüne sorunsuz bir şekilde entegrasyonunu sağlamak için infüzyon klonlama yöntemi kullanan ileri moleküler klonlama tekniklerinden faydalanılmaktadır. Plazmit konstrüksiyonu tamamlandıktan sonra, Stellar bakterileri plazmit amplifikasyonu için kullanılmakta ve yapı, PCR ve restriksiyon enzimi kesimi yöntemleriyle titizlikle doğrulanmaktadır. Doğrulanan plazmit, post-translasyonel modifikasyonlarla yüksek verimlilikte rekombinant protein üretimi için yaygın olarak kullanılan bir memeli hücre hattı olan CHO-K1 hücrelerine nükleofeksiyon yöntemi ile transfekte edilmektedir. Protein ekspresyonu, Western blot ve immünofloresan analizleriyle takip edilmekte ve optimizasyonu sağlanmaktadır. Daha sonra eksprese edilen protein, HBsAg'ye karşı bağlanma özgüllüğü ve afinitesini ölçmek için işlevsel aktivite testi olan ELISA ile analiz edilmektedir. Bu yöntemler sonucunda elde edilen veriler, füzyon proteininin HBV teşhis ve tedavisindeki işlevselliği ve uygulamaları hakkında kritik bilgiler sağlayacaktır. Bu tezin, yüksek afiniteli scFv-Fc yapılarının sağlam moleküler ve hücresel yöntemler kullanılarak üretilebileceğini göstererek antikor mühendisliği araştırmalarına önemli bir katkı sunması beklenmektedir. Tezin sonuçları, HBV tedavisine ve enfeksiyon hastalıklarına karşı terapötik antikorların kapsamını genişletebilecek yeni nesil biyofarmasötiklerin geliştirilmesi için olanak sunulabilmektedir.
Özet (Çeviri)
Hepatitis B virus (HBV) is a major contributor to the development of chronic liver diseases, including cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Despite advancements, existing diagnostic and therapeutic strategies exhibit significant limitations concerning specificity, accessibility, and long-term efficacy. These shortcomings underscore the urgent need for innovative approaches. This thesis focuses on the expression of a recombinant Lig7 scFv-Fc fusion protein targeting the HBV surface antigen, aiming to develop a potential candidate for therapeutic and diagnostic applications. The study employs advanced molecular cloning techniques, utilizing the In-Fusion cloning methodology to precisely integrate the Lig7 single-chain variable fragment (scFv) and Fc region sequences into the pMod plasmid vector. Plasmid amplification is achieved using Stellar bacterial cells, followed by rigorous validation through PCR and restriction enzyme digestion. The verified plasmid construct is subsequently transfected into CHO-K1 cells—a widely used mammalian cell line renowned for its efficiency in recombinant protein production and post-translational modifications—via the nucleofection method. Protein expression is systematically monitored and optimized through Western blot and immunofluorescence analyses. The functionality of the expressed scFv-Fc protein is then evaluated using ELISA, providing quantitative insights into its binding specificity and affinity for the HBV surface antigen (HBsAg). The results are expected to yield critical data on the potential utility of the fusion protein in the diagnosis and treatment of HBV infections. This research holds substantial promise for advancing the field of antibody engineering by demonstrating the feasibility of producing high-affinity scFv-Fc fusion constructs using robust molecular and cellular techniques. The outcomes of this study could pave the way for the development of next-generation biopharmaceuticals, addressing current gaps in HBV management and expanding the scope of therapeutic antibodies against infectious diseases.
Benzer Tezler
- Inhibition of HBsAg with stable transfection of Anti-HBsAg recombinant antibody in PLC/PRF/5 cell line
Anti-HBsAg rekombinant antikorunun stabil transfeksiyonu ile PLC/PRF/5 hücre hattinda HBsAg'nin inhibisyonu
ELİF AKTAR
Yüksek Lisans
İngilizce
2019
Gebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Yükleniyor...
- Kanser tanı ve tedavisinde kullanılmak üzere anti-PD-L1-scFv antikor geliştirilmesi
Development of anti-PD-L1-scFv antibody for use in cancer diagnosis and treatment
CANSU BABAHAN
- Development of recombinant human antibody library in mammalian cels
Memeli hücrelerinde insan antikor kütüphanesi geliştirilmesi
GİZEM DURU
Yüksek Lisans
İngilizce
2020
Gebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Yükleniyor...
- Production of recombinant bevacizumab antigen-binding fragment in Pichia pastoris
Pichia pastoris'te rekombinant bevacizumab antijen bağlayıcı fragman üretimi
UMUT HASKÖK
Yüksek Lisans
İngilizce
2025
Dokuz Eylül ÜniversitesiBiyoteknoloji ve Moleküler Biyoloji Ana Bilim Dalı
Yükleniyor...
- Hedefe yönelik kanser tedavisi için tek zincirli değişken fragman-anti mikrobiyal peptit füzyon proteininin rekombinant üretimi ve karakterizasyonu
Recombinant production and characterization of single-chain variable fragment-antimicrobial peptide fusion protein for targeted cancer therapy
SÜMEYYE ELİF ÖZTÜRK
Yüksek Lisans
Türkçe
2025
Yıldız Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Yükleniyor...