Geri Dön

Prematür kromozom kondensasyonuyla elde edilmiş interfaz kromozomları ile mitotik kromozomlardaki histon modifikasyonlarının immünfloresan yöntemle incelenmesi

Investigation of histone modifications in interphase chromosomes obtained by premature chromosome condensation and mitotic chromosomes by immunofluorescence method

PDF İndir

  1. Tez No: 961253
  2. Yazar: CAHİDE KARTAL
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. YELDA ARGÜDEN, DR. RAHİYE DİLHAN KURU
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Genetik, Tıbbi Biyoloji, Genetics, Medical Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2025
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa
  10. Enstitü: Lisansüstü Eğitim Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 195

Özet

DNA dizisini değiştirmeden gen ekspresyonunu düzenleyen ve hücre bölünmelerinde kalıtılabilen“Epigenetik”değişimler; DNA metilasyonu, posttranslasyonel histon modifikasyonları ve kodlamayan RNA'lar aracılığıyla meydana getirilir. Histon modifikasyonları, immünfloresan yöntemlerle spesifik antikorlar kullanılarak kromozomlar üzerinde gösterilebilmektedir. Sitogenetik tekniklerle epigenetik çalışmaları birleştiren, dolayısıyla“Sitoepigenetik”olarak adlandırılabilecek bu yöntemlerle metafaz kromozomları üzerinde yapılan –az sayıda- çalışma bulunmakla birlikte, PCC yöntemiyle elde edilmiş interfaz kromozomlarında henüz bu tür çalışmalar bildirilmemiştir. PCC, kalikulin A gibi fosfataz inhibitörleri kullanılarak interfazda kromozom elde edilebilmesini sağlayan bir yöntemdir. Sağlıklı yetişkin gönüllülerden elde edilen izole lenfositler üzerinde gerçekleştirilen bu çalışmada H3K79me2 ve H3K27me3 histon modifikasyonları spesifik antikorlar kullanılarak hem metafaz, hem de PCC yöntemiyle elde edilmiş interfaz kromozomları üzerinde gösterilmiştir. İnterfaz ve metafaz kromozomları elde etmek için yapılan kültürlerin çıkış aşamasında asitli fiksatifler içermeyen ve histon proteinlerini koruyan yöntemler kullanılarak kromozom yaymaları yapılmıştır. Hazırlanan preparatlara, seçilen histon modifikasyonlarına özgü antikorlarla immunofluoresan yöntem uygulanmış ve preparatlar floresan mikroskobunda incelenmiştir. H3K79me2 ve H3K27me3 modifikasyonlarının hem interfaz, hem de metafaz kromozomları üzerinde özgün bant desenleri sergilediği gösterilmiştir. H3K27me3 ve H3K79me2 modifikasyonlarına özgü bant paternlerinin genel olarak birbirlerine benzer olduğu ve PCC ve metafaz kromozomlarında genellikle değişmediği tespit edilmiştir. Ancak PCC kromozomlarının interfaz kromatininin histon modifikasyon paternini koruyup korumadığını anlamak için farklı modifikasyonları hedef alan çalışmalar yapılması gerekmektedir. Çalışmamız, interfaz kromatininindeki histon modifikasyonlarını tek hücre düzeyinde ve kromozomlar üzerinde gösteren ilk çalışmadır ve hücre döngüsü ile hücre farklılaşma mekanizmalarının epigenetik altyapısının aydınlatılmasına katkı sağlayacaktır.

Özet (Çeviri)

Epigenetic“ changes, which regulate gene expression without altering the DNA sequence and can be inherited in cell divisions, are mediated by DNA methylation, posttranslational histone modifications and non-coding RNAs. Histone modifications can be detected on chromosomes by immunofluorescence methods using specific antibodies. Although there have been a limited number of studies on metaphase chromosomes using these methods, which combine cytogenetic techniques with epigenetic studies and can therefore be called ”Cytoepigenetics", such studies have not yet been reported on interphase chromosomes obtained by the PCC method. PCC is a method of obtaining chromosomes in interphase using phosphatase inhibitors such as calyculin A. In this study conducted on isolated lymphocytes obtained from healthy adult volunteers, histone modifications H3K79me2 and H3K27me3 were demonstrated on both metaphase and interphase chromosomes obtained by PCC method using specific antibodies. To obtain interphase and metaphase chromosomes, chromosome spreads were prepared at the harvest stage of cultures using methods that do not contain acidic fixatives and preserve histone proteins. Immunofluorescence was applied to the prepared slides using antibodies specific to the selected histone modifications, and the slides were examined under a fluorescence microscope. The H3K79me2 and H3K27me3 modifications were shown to exhibit distinct band patterns on both interphase and metaphase chromosomes. It has been observed that the band patterns of H3K27me3 and H3K79me2 modifications are generally similar to each other and usually remain unchanged in both PCC and metaphase chromosomes. However, to understand whether PCC chromosomes preserve the histone modification pattern of interphase chromatin, studies targeting different modifications need to be conducted. Our study is the first to demonstrate histone modifications in interphase chromatin at the single cell level and on chromosomes and will contribute to the elucidation of the epigenetic basis of cell cycle and cell differentiation mechanisms.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    482921

    Prematür ovaryen yetmezlikli hastalarda karyotip değerlendirmesi

    Caryotype evolution in patients with premature ovarian failure

    ASLI AKDÖNER

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    Kadın Hastalıkları ve DoğumDokuz Eylül Üniversitesi

    Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MURAT CELİLOĞLU

  2. Tez No

    396496

    Prematür over yetmezliği olgularında genomik kopya sayısı değişikliklerinin array CGH yöntemi ile değerlendirilmesi

    Assessing copy number variations by array CGH in cases with premature ovarian failure

    HALİME KÜÇÜK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    GenetikEskişehir Osmangazi Üniversitesi

    Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SEVİLHAN ARTAN

  3. Tez No

    282817

    Prematür ovaryum yetmezliği (POY) tanısına yönelik mikrodizin bazlı karşılaştırmalı genomik hibridizasyon kiti (mikroarray CGH) geliştirilmesi

    Development of CGH based microarray kit intended for diagnosis of premature ovarian failure (POF)

    CANDAN EKER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    Biyoteknolojiİstanbul Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DR. S. HAKKI KUMUŞOĞLU

    PROF. DR. AYŞEGÜL TOPAL SARIKAYA

  4. Tez No

    752175

    Prematür overyan yetmezlikli (POY) bireylerde FMR1 geni CAG tekrar dizi analizi, kromozomal mikroarray ve multigenetik panel analizi verilerinin değerlendirilmesi ile genetik etiyolojinin retrospektif olarak araştırılması

    Retrospective investigation of genetic etiology by evalution of FMR1 gene CAG repeat sequence analysis chromosomal microarray and multigenetic panel analysis data individuals with premature ovarian insuffiency (POY)

    ASMAR NAGHIYEVA

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Kadın Hastalıkları ve DoğumGazi Üniversitesi

    Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NURAY BOZKURT

  5. Tez No

    346860

    Kontrollü overyan hiperstimülasyon uygulandığında iyi cevap veren (Good responder) ve zayıf cevap veren (Poor responder) infertil hastalardaki fsh reseptör polimorfizmlerinin, fertil kadınlardaki fsh reseptör polimorfizmleri ile karşılaştırılması

    Comparison of fsh reseptor polymorphismis between infertile women (Poor responders and good responders after controlled ovarian hyperstimulation) and fertile women

    BARIŞ SEVER

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    Kadın Hastalıkları ve DoğumAkdeniz Üniversitesi

    Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MEHMET ŞİMŞEK

Geri Dön