Lx2 hücre hattında curcuminin TRIM proteinleri üzerine olan etkisinin araştırılması
The effect of curcumin on trim proteins in Lx2 cell line
- Tez No: 964438
- Danışmanlar: PROF. DR. GÜLDEN BAŞKOL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Curcumin, Hepatik fibrozis, LX2, Trim33, Trim52, Curcumin, Hepatic Fibrosis, LX2, Trim33, Trim52
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Erciyes Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 86
Özet
Hepatik fibrozis, karaciğerde hasar oluşturan tekrarlayıcı veya kronik uyarılara sekonder gelişen, viral enfeksiyon, alkolik karaciğer hastalığı dahil olmak üzere herhangi bir etiyolojiye bağlı kronik kronik karaciğer hasarından kaynaklanan hücre dışı matriksin birikmesiyle karakterize edilen“yara iyileşmesi benzeri”karmaşık ve dinamik bir süreçtir. Tripartite motif protein (TRIM) ailesi E3 ubikuitin ligaz aktivitesine sahip olan hücre içi sinyalleşme, gelişim, apopitoz, doğal bağışıklık, otofaji, fibrosiz ve karsinogenez gibi hücresel süreçlerde çeşitli işlevlere sahiptir. TRIM33'ün çeşitli fibrozislerde rolü araştırılmış ve inhibisyonun ya da eksikliğinin fibrozise katkıda bulunduğu bildirilmiştir. Bununla birlikte TRIM52'nin aşırı ekspresyonunun fibrozis sürecini arttırdığı in vitro hepatik fibrozda bir fibroz promoteri olduğu gösterilmiştir. TRIM proteinleri ve hücresel fonksiyonları ile ilgili çalışmalar halen araştırılmaktadır hatta fibrosiz ile ilgili yapılan çalışmalar son derece azdır. Bu tez projesinde LX2 hücre hattında, curcuminin, koloni oluşumu, migrasyonu üzerine olan etkileri araştırılmıştır. Yapılan literatür taramasına göre curcuminin TRIM proteinlerine olan etkisi ile ilişkili in vitro ve in vivo hiç bir çalışma (kanser, fibrozis, vd.) bulunmamaktadır. Bu çalışmada ilk kez curcuminin hepatik fibrosizde TRIM proteinlerine olan etkisi araştırılmıştır. Çalışmamızda, karaciğer fibrozisi patogenezinde önemli bir rol oynayan insan hepatik stellat hücre hattı LX2 üzerinde curcuminin etkileri kapsamlı olarak incelenmiştir. Hücrelerin göç yeteneği, migrasyon testi kullanılarak incelenmiş ve curcumin tedavisinin LX2 hücrelerinin migrasyon kapasitesini anlamlı derecede azalttığı saptanmıştır. Koloni oluş analizi ile hücrelerin çoğalma ve koloni oluşturma yetenekleri değerlendirilmiş, curcumin'in bu süreçleri olumsuz etkilediği gözlemlenmiştir. Ayrıca, ELISA yöntemi kullanılarak Transforming Growth Factor-beta (TGF-β), alfa-Smooth Muscle Actin (α-SMA), Tripartite Motif-containing Protein 33 (TRIM33) ve TRIM52 proteinlerinin hücre kültürü süpernatantındaki salınım düzeyleri ölçülmüştür. Hücre süpernatantları, belirli zaman noktalarında toplanmış ve ticari olarak temin edilen yüksek özgüllüğe sahip ELISA kitleri kullanılarak analiz edilmiştir. Analizler, üretici firmanın önerdiği protokoller doğrultusunda gerçekleştirilmiş, absorbans değerleri mikroplaka okuyucu ile 450 nm dalga boyunda ölçülmüştür. Elde edilen veriler, kontrol ve curcumin tedavi grupları arasında karşılaştırılarak protein ekspresyonundaki değişiklikler istatistiksel olarak değerlendirilmiştir. Bu bulgular, curcumin'in LX2 hücrelerinde proliferasyon ve migrasyonu engellemesinin yanı sıra fibrozise aracılık eden kritik sinyal yolaklarını da modüle ettiğini göstermektedir. Sonuç olarak, curcumin'in karaciğer fibrozisi tedavisinde potansiyel terapötik bir ajan olduğu desteklenmektedir.
Özet (Çeviri)
Hepatic fibrosis is a complex and dynamic process characterized by the accumulation of the extracellular matrix resulting from chronic liver injury of any etiology, including viral infection, alcoholic liver disease, secondary to recurrent or chronic stimuli that cause damage to the liver. The tripartite motif protein (TRIM) family E3 ubiquitin has various functions in cellular processes such as intracellular signaling, development, apoptosis, innate immunity, autophagy, fibrosis, and carcinogenesis, which have ligase activity. The role of TRIM33 in various fibrosis has been investigated and it has been reported that inhibition or lack thereof contributes to fibrosis. However, overexpression of TRIM52 has been shown to be a fibrosis promoter in hepatic fibrosis in vitro, enhancing the fibrosis process. Studies on TRIM proteins and their cellular functions are still being investigated, and even studies on fibrosis are very few. In this thesis project, the effects of curcumin on cell viability, proliferation, colony formation, migration, cell cycle and apoptosis in the LX2 cell line were investigated. According to the literature review, there are no in vitro in vivo studies (cancer, fibrosis, etc.) related to the effect of curcumin on TRIM proteins. In this study, the effect of curcumin on TRIM proteins in hepatic fibrosis was investigated for the first time. In this study, the effects of curcumin on the human hepatic stellate cell line LX2, which plays a crucial role in the pathogenesis of liver fibrosis, were comprehensively investigated. Cell viability was assessed using the MTT assay to measure metabolic activity, revealing that curcumin inhibited cell proliferation in a dose- and time-dependent manner. Cell migration capacity was examined via migration assays, demonstrating that curcumin treatment significantly reduced the migratory ability of LX2 cells. Colony-forming unit (CFU) analysis was performed to evaluate the proliferative and colony-forming capabilities of the cells, showing that curcumin negatively affected these processes. Furthermore, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was utilized to quantify the secretion levels of key fibrosis-related biomarkers, including Transforming Growth Factor-beta (TGF-β), alpha-Smooth Muscle Actin (α-SMA), Tripartite Motif-containing Protein 33 (TRIM33), and TRIM52, in the cell culture supernatants. Supernatants were collected at specified time points and analyzed using commercially available high-specificity ELISA kits, following the manufacturers' protocols. Absorbance measurements were performed at 450 nm using a microplate reader. The data were statistically analyzed to compare protein expression levels between control and curcumin-treated groups. These findings indicate that curcumin not only inhibits proliferation and migration of LX2 cells but also modulates critical signaling pathways involved in fibrosis. Consequently, curcumin is supported as a potential therapeutic agent for the treatment of liver fibrosis.
Benzer Tezler
- LX2 hücre hattında silibinin'in fosfatidilserin/IL-6/GAS6 /AXL metabolizması üzerine etkisi
Effect of silibin on phosphatidylserine/IL-6/GAS6/AXL metabolism in LX2 cell line
ŞÜHEDA GÖKBULUT
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyokimyaErciyes ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLDEN BAŞKOL
- Hepatosellüler karsinomaya neden olan genlerin gen ekspresyonunun kantitatif ölçümü
Quantitative measurement of gene expression of the genes causing hepatocellular carcinoma
GÖNÜL ŞEYDA SEYDEL
- Karaciğer fibrozisinde etken olabilecek aday miRNA'ların hepatik stellat hücrelerinde araştırılması
Searching for the candidate miRNAs of liver fibrosis in hepatic stellate cells
GÜNİZ CENGİZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiTemel Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. SENEM CEREN ÖZEN KARATAYLI
- CRISPR-Cas9 Teknolojisi ile in Vitro F8 geninin fonksiyonunun bozulmasının sağlanması
Impairment of F8 Gene function in Vitro with CRISPR-Cas9 technology
MAHDI SHEKARI
Doktora
Türkçe
2023
BiyoteknolojiEge ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FERİŞTAH FERDA ÖZKINAY
- Pluripotent stem cell (IPSCs)-derived hepatic organoids for modeling liver cancer
Karaciğer kanserinin modellenmesinde indüklenebilir pluripotent kök hücre (IPSCs) kaynaklı hepatik organoidler
MUSTAFA KARABİÇİCİ
Doktora
İngilizce
2022
BiyolojiDokuz Eylül ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ŞERİFE ESRA ERDAL BAĞRIYANIK