Rekombinant sığır jelatinin üretimi için kollajen gen fragmentinin ve prolil 4-hydroksilaz (P4H) enzimlerinin ve P. pastoris'de ekspresyonu"
For the production of rekombinant cattle gelatinine prolyl 4-hydroxylase (P4H) enzyme and collagen gene ekspresi̇on in P. pastoris
- Tez No: 983868
- Danışmanlar: PROF. DR. ZÜLAL KESMEN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Gıda Mühendisliği, Biotechnology, Food Engineering
- Anahtar Kelimeler: Rekombinant jelatin, Prolil 4-Hydroksilaz, Gen ekspresyonu, Pichia pastoris, Recombinant gelatin, Prolyl 4-Hydroxylase, Gene expression, Pichia pastoris
- Yıl: 2018
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Erciyes Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Gıda Bilimi ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Gen Mühendisliği Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Rekombinant kolajen ve kolajen benzeri ürünler, güvenli ve standart kalitede üretilmesi zor olan hayvansal kaynaklı kolajenin yerini giderek daha fazla almaktadır. Hidroksile kollajen üretmek için bu çalışmada, sığır COL1A1 geninin 400 bp'lik bir kollajen parçası, Pichia'daki P4H enzimini kodlayan prolil-4-hidroksilaz alt birimi α (P4HC) ve prolil-4-hidroksilaz alt birimi β (P4Hβ) ile birlikte ifade edilmiştir. pastoris. Bu amaçla, her bir hedef gen, pPICZaA vektörüne yerleştirildi ve daha sonra E. coli DH5a hücrelerinde klonlandı. Daha sonra birlikte ifade vektörleri,“in vitro multimer ligasyon”yöntemine göre pozitif klonlardan izole edilen rekombinant vektörler kullanılarak oluşturuldu. Tüm rekombinant vektörler, elektroporasyonla P. pastoris X33 hücrelerine aktarıldı. Tüm hedef genlerin rekombinant suşlar tarafından transkript edildiği reverse transkriptaz PCR kullanılarak kanıtlanmıştır. Rekombinant proteinlerin ekspresyonu, metanol beslemeli üretim ile 96 saat süreyle gerçekleştirildi ve kültür ortamından saflaştırılmış proteinlerin konsantrasyonu, His-Tag ELISA yöntemi ile ölçüldü. Rekombinant suşlar tarafından ayrı ayrı ifade edilen rP4Hα ve rP4Hβ ve rCol1 proteinlerinin konsantrasyonları sırasıyla 10.69µg/L, 10.74µg/L, 8.61µg/L olarak belirlenirken, birlikte ifade edilen rP4Hα/β ve rP4Hα/β/rCol1 konsantrasyonları proteinler sırasıyla 7,82 ug/L ve 5,02 ug/L idi. Sonuçlar, hedef genlerin başarıyla ifade edildiğini ve rekombinant P. pastoris hücresinde birlikte ifade edildiğini gösterdi.
Özet (Çeviri)
Recombinant collagen and collagen-like products are increasingly replacing animal-sources collagen which is difficult to produce in safe and standard quality. In this study to produce hydroxylated collagen, a 400 bp collagen fragment of the bovine COL1A1 gene was co-expressed with prolyl-4-hydroxylase subunit α (P4HC) and prolyl-4-hydroxylase subunit β (P4Hβ) encoding the P4H enzyme in Pichia pastoris. For this purpose, each target gene was inserted into the pPICZαA vector and then cloned in E. coli DH5a cells. Subsequently, co-expression vectors were constructed using recombinant vectors isolated from positive clones according to the“in vitro multimer ligation”method. All recombinant expression and co-expression vectors were transformed into P. pastoris X33 cells by electroporation. That all target genes were transcripted by recombinant strains have been proven using reverse-transcriptase PCR. The expression of recombinant proteins was performed for 96 hours by methanol-fed cultivation and the concentration of the purified proteins from the culture medium was measured by the His-Tag ELISA method. The concentrations of rP4Hα and rP4Hβ and rCol1 proteins, expressed individually by recombinant strains were determined as 10.69µg/L, 10.74µg/L, 8.61µg/L, respectively, while the concentrations of co-expressed rP4Hα/βand rP4Hα/β/rCol1 proteins were 7,82 µg/L and 5,02 µg/L, respectively. The results showed that the target genes were successfully expressed and co-expressed in recombinant P. pastoris cell.
Benzer Tezler
- Gıda katkı maddesi olarak kullanılabilecek rekombinant jelatin üretimi için COL1A1 gen fragmanlarının maya sisteminde (Pichia pastoris) transkripsiyonu
Transcription of COL1A1 gene fragmans in yeast system (Pichia pastoris) for production of recombinant gelatin used as food additive
AYTEN GÜLLÜCE
Doktora
Türkçe
2016
Gıda MühendisliğiErciyes ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ZÜLAL KESMEN
- Development and validation of in-house elisa prototypes for anti-F5 (K99) antibody detection in neonatal calf diarrhea and total IgG detection in immune sera
Sığır immun serumlarında total IgG ve yenidoğan buzağı ishallerinde anti-F5 (K99) antikor tespitine yönelik ın-house elısa prototipleri geliştırilmesi ve valıdasyon çalışmaları
MUHAMMAD SHAHBAZ SHARIF
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
Veteriner HekimliğiOndokuz Mayıs ÜniversitesiVeterinerlik Mikrobiyolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. OKTAY GENÇ
- Hypoderma bovis hypodermin rekombinant antijenlerinin karakterizasyonu, ekspresyon profilleri ve serolojik teşhisteki etkinliklerinin değerlendirilmesi
Characterization and expression profiles of hypoderma bovis hypodermin recombinant antigens and assesment of their serodiagnostic efficiencies
MÜBECCEL OKUR
Doktora
Türkçe
2020
Veteriner HekimliğiErciyes ÜniversitesiVeterinerlik Parazitolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ABDULLAH İNCİ
- Rekombinant kimozin üretiminde glikozilasyonun etkisinin araştırılması
The effect of glycosylation on recombinant chymosin production
FATMA ERSÖZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
BiyoteknolojiAkdeniz ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET İNAN
- Rekombinant teknoloji kullanılarak Camelus dromedarius prokimozininin üretilmesi, karakterizasyonu, beyaz peynir üretiminde değerlendirilmesi ve peynir altı suyu hidrolizatlarının biyoaktif özelliklerinin incelenmesi
Recombinant production of Camelus dromedarius prochymosin, its characterization, evaluation in white cheese production, and investigation of the bioactive properties of whey hydrolysates
BURAK ÇEVİK
Doktora
Türkçe
2026
Besin Hijyeni ve TeknolojisiAtatürk ÜniversitesiVeterinerlik Gıda Hijyeni ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUSTAFA ATASEVER
DR. ÖĞR. ÜYESİ İBRAHİM SÖZDUTMAZ