Konvansiyonel/rekombinant metotlar ile üretilen PA, EF ve LF antijenlerinin aktivitesinin in vitro sistemde incelenmesi ve karşılaştırılması
Investigation and comparison of the activity of PA, EF and LF antigens produced by conventional/recombinant methods in vitro system
- Tez No: 1006499
- Danışmanlar: PROF. DR. ASUMAN DEMİROĞLU ZERGEROĞLU, DR. DR. YÜKSEL ÇETİN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2021
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gebze Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Şarbon hastalığı etkeni Bacillus anthracis, iki virülans faktöre sahip, gram pozitif bir bakteridir. Virülans faktörleri poli-D glutamik asit kapsülü ve A-B tipi toksin formasyonudur. Toksin formasyonu için, koruyucu antijen (PA) proteini ile ölümcül faktör (LF) birleştiğinde ölümcül toksin (LT); ödem faktörü (EF) birleştiğinde ödem toksini (ET) oluşur. Toksinler hücre içerisine alınırken öncelikle PA83 proteini membran reseptörüne bağlanır ve hücre zarı fürin proteazlarıyla PA63 formuna kırılır. EF ve LF proteinleri, PA63 proteinine bağlanarak hücre içerisine alınır. LT hücre içi mitojenle aktifleşen kinaz kinaz (MKK) proteinleri üzerinde etkili olarak hücre ölümüne; ET ATP harcanmasına bağlı cAMP artışı yolu ile ödeme sebep olur. Tez kapsamında, PA83 proteininin in vitro ortamda PA63 proteinine kırılımı gerçekleştirilmiş, LF ve EF proteinine bağlanması kontrol edilmiştir. LT'nin biyoaktivitesinin tespit edilmesi için mürin makrofaj J774a.1 hücre hattına alternatif olarak insan monosit THP-1 hücrelerinin makrofaja farklılaştırılması phorbol-12- myristate-13-acetate (PMA) kullanılarak optimize edilmiştir. LT biyoaktivitesi için referans/rekombinant PA proteinleri ile rekombinant LF proteinleri ve konvansiyonel toksin içeren supernatant J774a.1 ve THP-1 kaynaklı makrofaj hücrelerine uygulanarak hücre canlılığı üzerine etkisi MTT kolorimetrik ajanı ile tespit edilmiştir. Her örnek için elde edilen doz-cevap eğrisinden IC50 dozları tespit edilmiştir. ET biyoaktivitesinin tespiti için rekombinant ET ve konvansiyonel olarak üretilen ET içeren supernatant CHO-K1 hücrelerine uygulandıktan sonra cAMP ekspresyonunun indüklediği ELISA ile tespit edilmiştir. Toksin formasyonlarının makrofaj hücrelerinin proinflamatuar sitokin seviyeleri üzerindeki etkisinin tespiti için LT'nin TNF-α ve IL- 8; LT+ET kombinasyonunun IL-1 β ve IL-6 sitokin seviyelerini indüklediği tespit edilmiştir.
Özet (Çeviri)
Anthrax disease agent Bacillus anthracis is a gram-positive bacterium with two virulence factors. Virulence factors are poly-D glutamic acid capsule and A-B type tripartite toxin. Lethal Toxin (LT) is formed by the combination of the Protective Antigen (PA) and Lethal Factor (LF); Edema Toxin (ET) is formed by the combination of PA and Edema Factor (EF) protein. While the toxins are taken up by the cell, first the PA83 protein binds to the membrane receptor and is cleaved into the PA63 form by the cell membrane furine proteases. Next step, EF and LF proteins can be bind to PA63. At the last step, EF and LF that are bound to the PA63 are taken up by the cell. LT is effective on intracellular Mitogen Activated Kinase Kinase (MKK)proteins and causes cell death; ET causes edema through the increase in cAMP due to the consumption of ATP.In this thesis, PA83 protein was cleaved into PA63 protein and its binding to LF and EF protein was studied in in vitro systems. In order to determine the bioactivity of LT on the macrophage cells, differentiation of human monocyte THP-1 cells into macrophages as an alternative to the murine macrophage J774a.1 cell line was optimized using phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA). In order to determine LT biological activity, reference/recombinant PA and LF proteins and bacterial supernatant, which was conventionally produced containing three toxin proteins were applied to J774a.1 and THP-1 derived macrophage cells, and the cell viability was detected by MTT colorimetric agent. The IC50 dose for each sample was calculated from the dose-response curve obtained from the cell vıability assay. For the determination of ET bioactivity, it was determined that it induced cAMP expression level by ELISA after the the conventionally produced ET-containing supernatant and recombinant ET was applied to CHO-K1 cells. To determine the effect of toxin formations on proinflammatory cytokine levels of macrophage cells; LT induced TNF- α and IL-8, LT+ET combinations induced IL-1 β and IL-6 cytokine levels.
Benzer Tezler
- Rekombinant insan interferonunun sıvı ve katı formlarının dayanıklılığı üzerinde çalışmalar
Studies on stability of liquid and solid forms of recombinant human interferon
BİLGEN ÖZBATIR
Yüksek Lisans
Türkçe
2004
Eczacılık ve FarmakolojiHacettepe ÜniversitesiFarmasötik Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FİLİZ ÖNER
- Kimerik pilin rekombinant aşı üretim platformu geliştirilmesi
Development of the chimeric pilin recombinant vaccine production platform
MERVE AKSÜT
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ EVREN DORUK ENGİN
- Polyhydroxyalkanoate production from raisin waste using recombinant Escherichia coli
Rekombinant Escherichia coli kullanılarak kuru üzüm atığından polihidroksialkanoat üretimi
ALEYNA FİLİZFİDANOĞLU
Yüksek Lisans
İngilizce
2025
BiyomühendislikManisa Celal Bayar ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. İREM DENİZ CAN
- Studies on liposome, gel and lipogelosome formulations containing sodium hyaluronate
Sodyum hyaluronat içeren lipozom, jel ve lipojelozom formülasyonları üzerine çalışmalar
İSMAİL ASLAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2010
Eczacılık ve FarmakolojiYeditepe ÜniversitesiFarmasötik Teknoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. GÜLENGÜL DUMAN
PROF. DR. ASUMAN YEKTA ÖZER
- Detecting binding activity of a therapeutic monoclonal antibody targeting vascular endothelial growth factor using surface plasmon resonance
Vasküler endotelyal büyüme faktörünü hedeleyenterapötik monoklonal antikorun bağlanma aktivitesinin yüzey plazmon rezonans ile belirlenmesi
SERİM ERDEM
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
DR. ÖĞR. ÜYESİ ABDULHALİM KILIÇ