Ratlarda L carnitin uygulamasının lipid metabolizması üzerine etkilerinin moleküler olarak araştırılması
Molecular investigation of the effects of L carnitine administration on lipid metabolism in rats
- Tez No: 1009526
- Danışmanlar: PROF. DR. BİLAL AKYÜZ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
- Anahtar Kelimeler: L Karnitin, FABP1, FABP3, Real-Time PCR, İmmunohistokimya, FABP1, FABP3, L-Carnitine, Real-Time PCR, Immunohistochemistry
- Yıl: 2026
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Erciyes Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Veterinerlik Zootekni Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Uzun zincirli yağ asitlerinin mitokondriyal β-oksidasyona katılabilmesi, karnitin aracılı taşıma mekanizmasına bağlıdır. Bu nedenle L-karnitin, yağ asitlerinin hücresel enerji üretimine yönlendirilmesinde temel bir düzenleyici olarak kabul edilmektedir. Hücresel düzeyde yağ asitlerinin taşınması ve metabolik süreçlere aktarılmasında yağ asidi bağlayıcı proteinleri (FABP'ler) kodlayan genler önemli işlevler üstlenir. Özellikle FABP1 ve FABP3 geni, lipid metabolizmasının düzenlenmesi ve yağ asitlerinin hücre içi kullanımının yönlendirilmesinde etkili proteinleri kodlayan genlerdir. Bu çalışmada L-karnitin uygulamasının, lipid metabolizması üzerindeki etkilerini, FABP1 ve FABP3 gen ekspresyonları üzerinden moleküler düzeyde değerlendirmeyi amaçlamıştır. Çalışmada her birinin ayrı bireysel kafeslerde barındırıldığı ve her grupta sekiz Wistar Albino erkek ratın bulunduğu 16 rat kontrol ve deney olacak şekilde iki gruba ayrıldı. Çalışmada kullanılan ratların kiloları haftalık olarak tartıldıktan sonra, deney grubundaki ratlara günlük olarak: 250 mg/Kg oral gavaj yoluyla L Karnitin (L-Karnitin (Sigma Aldrich Cas No: 545-15-1) verilmiştir. Deney sonunda hayvanlar ketamin ve ksilazin kombinasyonu ile genel anestezi alındıktan sonra analizlerde kullanılacak kan ve doku örnekleri alınmıştır. Biyokimyasal analizler için gerekli kan örnekleri, uygun pozisyonda tutulan hayvanlardan intrakardiyak yöntemle alınmış ve hemolizi önleyici koşullar altında işlenmiştir. Kan örnekleri santrifüj edilerek serumları ayrılmış ve elde edilen serumlar lipid profili parametrelerinin belirlenmesinde kullanılmıştır. Histopatolojik incelemeler ve gen ekspresyon analizleri amacıyla karaciğer, ince bağırsak ve abdominal yağ dokusundan örnekler toplanmıştır. Karaciğer, ince bağırsak ve abdominal yağ dokusuna ait örnekler uygun fiksatif içerisinde tespit edildikten sonra rutin histolojik doku takip işlemlerinden geçirilmiştir. Alınan histolojik doku kesitlerinde, normal histolojik yapıyı incelebilmek amacıyla hematoksilen ve eozin (H&E) boyama, hepatositlerin glukojen içeriğini ve goblet hücrelerini belirlemek için periyodik asit schiff (PAS) boyama, bağ dokusunun özellikle kolajen lif içeriğini belirlemek amacıyla Masson'un trikrom (MT) boyaması yapılmıştır. İmmunohistokimyasal analizi FABP1 ve FABP3 proteinlerinin doku düzeyindeki dağılımını belirlemek amacıyla immünohistokimyasal boyama uygulanmıştır. Deparafinizasyon, antijen geri kazanımı ve bloklama basamaklarının ardından kesitler özgül primer antikorlarla inkübe edilmiştir. Biyotin-streptavidin temelli tespit sistemi ve 3,3'-Diaminobenzidine (DAB) kromojeni kullanılarak immünreaksiyon görünür hale getirilmiş, karşı boyama hematoksilen ile yapılmıştır. Preparatlar ışık mikroskobunda değerlendirilmiş, immünreaktivite yoğunlukları ise dijital görüntü analizi ile nicel olarak ölçülmüştür. Gen ekspresyon düzeyleri için dokulardan trizol ile RNA izolasyonu gerçekleştirilmiştir. Elde edilen RNA'lardan cDNA sentezi EvoScript Universal cDNA Master (Roche Ltd., Mannheim, Germany) kitinin protokolüne uygun şekilde gerçekleştirilmiştir. İlgili genlerin primerleri ve hazırlanan RNA örneklerinden sentezlenen cDNA'lar, Biorad SsoAdvanced Universal Sybeer Green Süpermix kiti kullanılarak Light Cycler Nano (Roche Ltd., Mannheim, Germany) cihazında real-time PCR analizi yapılmıştır. Real Time PCR analizi için housekeeping gen olarak GAPDH ve beta-aktin (ACTB) kullanılmıştır. Real Time PCR tamamlandıktan sonra elde edilen Ct sonuçları 2-∆∆Ct metoduna göre normalize edilmiştir. Örnekler, kontrol geni ile karşılaştırılarak logaritmik olarak gen ekspresyon artış azalış oranları hesaplanmıştır. Yapılan biyokimyasal, moleküler, immünohistokimyasal analizler ve histopatolojik incelemeler doğrultusunda tüm dokular için elde edilen sonuçlar değerlendirildiğinde, ratlara oral gavaj yoluyla uygulanan L karnitinin Alınan dokulardaki FABP1 ve FABP3 genlerinin ekpresyon sevilerinde istatistiksel olarak anlamlı bir etkisi olmadığı görüldü.
Özet (Çeviri)
The entry of long-chain fatty acids into mitochondrial β-oxidation is dependent on a carnitine-mediated transport mechanism. Consequently, L-carnitine is recognized as a fundamental regulator in directing fatty acids toward cellular energy production. At the cellular level, genes encoding fatty acid-binding proteins (FABPs) undertake crucial functions in the transport of fatty acids and their allocation to metabolic processes. Notably, the FABP1 and FABP3 genes encode proteins that are influential in regulating lipid metabolism and directing the intracellular utilization of fatty acids. This study aimed to evaluate the effects of L-carnitine administration on lipid metabolism at the molecular level by assessing the expression of FABP1 and FABP3. In the study, sixteen male Wistar Albino rats, each housed in individual cages, were divided into two groups (control and experimental), with eight rats per group. Following weekly body weight measurements, rats in the experimental group received a daily oral dose of 250 mg/kg L-carnitine (L-Carnitine, Sigma Aldrich Cas No: 545-15-1) via gavage. At the end of the experimental period, animals were anesthetized with a combination of ketamine and xylazine, and blood and tissue samples were collected for subsequent analyses. Blood samples for biochemical analysis were obtained via the intracardiac method from appropriately positioned animals and processed under conditions preventing hemolysis. Serum was separated by centrifugation and used for the determination of lipid profile parameters. Tissue samples from the liver, small intestine, and abdominal adipose tissue were collected for histopathological examination and gene expression analysis. Specimens from the liver, small intestine, and abdominal adipose tissue were fixed in an appropriate fixative and processed using routine histological techniques. Tissue sections were stained with hematoxylin and eosin (H&E) to assess normal histological structure, periodic acid-Schiff (PAS) to visualize hepatocyte glycogen content and goblet cells, and Masson's trichrome (MT) to evaluate connective tissue, particularly collagen fiber content. Immunohistochemical analysis was performed to determine the tissue-level distribution of FABP1 and FABP3 proteins. Following deparaffinization, antigen retrieval, and blocking steps, sections were incubated with specific primary antibodies. Immunoreactivity was visualized using a biotin-streptavidin detection system and, 3'-Diaminobenzidine (DAB) chromogen, with counterstaining performed using hematoxylin. Preparations were evaluated under a light microscope, and immunoreactivity intensities were quantified using digital image analysis. For gene expression analysis, RNA was isolated from tissues using Trizol reagent. cDNA synthesis from the obtained RNA was performed according to the protocol of the EvoScript Universal cDNA Master Kit (Roche Ltd., Mannheim, Germany). Real-time PCR analysis was conducted using gene-specific primers and cDNA synthesized from the prepared RNA samples, utilizing the Biorad SsoAdvanced Universal SYBR Green Supermix kit on a Light Cycler Nano instrument (Roche Ltd., Mannheim, Germany). GAPDH and beta-actin (ACTB) were used as housekeeping genes for real-time PCR analysis. Following the completion of real-time PCR, the obtained Ct values were normalized according to the 2-∆∆Ct method. Logarithmic fold changes in gene expression were calculated by comparing samples with the control gene. Evaluation of the results obtained from biochemical, molecular, immunohistochemical, and histopathological analyses for all tissues revealed that L-carnitine administered orally via gavage to rats did not have a statistically significant effect on the expression levels of FABP1 and FABP3 genes in the examined tissues.
Benzer Tezler
- Ratlarda deneysel iskemi reperfüzyon hasarında sodyum nitroprussid ve L- karnitinin etkilerinin karşılaştırılması
Comparison of the effects of sodium nitroprussid and L-carnitine in experimental ischemia/ reperfusion in rats
MURAT AKIN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2003
Genel CerrahiGazi ÜniversitesiGenel Cerrahi Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FERİT TANERİ
- L-karnitin uygulamasının ratlarda bazı lipit parametreleri üzerine etkisi
The effect of l-carnitine administration on some lipid parameters of rats
UMUT UMUTLU
- Farklı düzeyde balık yağı ile beslenen erkek ratlarda L-karnitin in bazı kan ve doku parametrelerine etkileri
The effects of L-carnitine on blood and tissue parameters of male rats fed with different levels of fish oil
HALİL YAVUZ
Doktora
Türkçe
2013
BiyokimyaSelçuk ÜniversitesiVeterinerlik Biyokimyası Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FİRUZE KURTOĞLU
- L-carnitine uygulamasının ratlarda bazı hemotolojik parametreler üzerine etkisi
Effect of L-carnitine on some haematological parameters in rats
NURTEN TUNA
- L- karnitin uygulamasının laktasyon döneminde ratlarda enerji metabolizmasına etkisinin araştırılması
The effects of l-carnitine treatment on energy metabolism in rats in lactation periods
SEMRA BALIKCIOĞLU
Doktora
Türkçe
2011
Biyokimyaİstanbul ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLHAN TÜRKAY HOŞTÜRK