Geri Dön

Gi proteinine kenetli reseptörler aracılı vasküler kasılma yanıtlarının mekanizmalarının incelenmesi: 5-HT1 reseptör aracılı vasküler kasılma yanıtı

Evaluation of vasocontractile responses mediated by Gi coupled receptors: 5HT1 receptor mediated vasocontractile responses

  1. Tez No: 102793
  2. Yazar: DEMET AKIN
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. HAKAN GÜRDAL
  4. Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
  5. Konular: Eczacılık ve Farmakoloji, Pharmacy and Pharmacology
  6. Anahtar Kelimeler: 5-HT, sumatriptan, 5-HTib reseptörü, 5-HT-id reseptörü, damar düz kası, kasılma, Gi/o proteini, cAMP, fosfolipaz C, voltaj bağımlı kalsiyum kanalları. 52, 5-HT, sumatriptan, 5-HTib receptor, 5-HTiD receptor, vasocontraction, Gi/o protein, cAMP, phospholipase C, and voltage- dependent calcium channels. 55
  7. Yıl: 2001
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Ankara Üniversitesi
  10. Enstitü: Tıp Fakültesi
  11. Ana Bilim Dalı: Farmakoloji ve Klinik Farmokoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 69

Özet

5.0ZET Bu çalışmada tavşan A.karotis komunisde (AKK) 5-HTı reseptörleri aracılığıyla oluşan kasılma yanıtları incelendi ve Gi/o proteinine kenetli olan bu reseptörlerin uyarılması ile aktive olan sinyal iletim mekanizmaları araştırıldı. 5-HTı, a2-adrenerjik ve muskarinik reseptörlerin uyarılması sonucu Gi/o proteini aktive olur ve adenili siklaz enzimini inhibe eder. Bu inhibisyon hücre içi cAMP miktarının azalmasına neden olur. Gi/o proteini aracılı sinyal iletiminin bu kısmı oldukça açıktır. Gi/o proteinine kenetli reseptörlerin hücre içi kalsiyumu artırdıkları ve damarlarda kasılmaya neden oldukları gösterilmiştir. Bu reseptörlerin hangi mekanizma ile hücre içi kalsiyum konsantrasyonunu artırdığı ve kasılma yanıtına neden olduğu yeterince açıklık kazanmamıştır. Bazı çalışmalarda Gi proteinine kenetli reseptörlerin inozitol fosfat oluşumunu artırarak hücre içi kalsiyumunu artırdığı ileri sürülmüştür. Organ banyosunda yapılan fonksiyonel çalışmalarda 5-HTib/id reseptör agonisti sumatriptan AKK de ön kasılma oluşturmadan konsantrasyon bağımlı kasılma yanıtlarına neden oldu. 5-HT2 reseptör antagonisti ketanserin ile bu yanıt oldukça potent bir şekilde antagonize olurken, 5-HTı reseptör antagonisti GR1 27935 ile daha düşük bir potenste antagonizma oldu. Bu yanıtta 5HTı reseptörleri ile birlikte 5-HT2 reseptörlerininde önemli rolü olduğunu ileri sürebiliriz. Bazı çalışmalar 5-HTı aracılı yanıtların damarda ön kasılma oluşturduktan sonra belirgin olduğunu göstermiştir. Ön kasılma oluşturulduktan sonra (30mM KCI ile) elde edilen sumatriptan kasılma yanıtı 5-HT2 reseptör antagonisti ketanserine daha az duyarlı, 5-HTı reseptör antagonisti GR1 27935' e ise daha çok duyarlı oldu. Ön kasılma oluşturulduktan sonra 5-HT2 reseptör antagonistine duyarlılığın azalması bu reseptörlerin kasılma yanıtına katkısının azaldığını düşündürdü. Bu durumda ön kasılma oluşturulmayan damarlarda sumatriptanın 5-HT2 reseptörleri aracılığıyla hafif bir ön kasılma oluşturabileceğini ve bunun 5-HTt reseptörleri aracılığıyla oluşan yanıtları görünür hale getireceğini ileri sürebiliriz. 50Yaptığımız çalışmalar (Western Blot ve bağlanma) 5HTib, 5HTid ve 5-HT2 reseptörlerinin bu damarda bulunduğunu göstermekte idi. Sumatriptan ile oluşan kasılma yanıtları 5-HTib reseptör antagonisti ile antagonize olurken 5-HT1D reseptör antagonistine daha dirençli idi. Bu durum kasılma yanıtlarının 5-HT-ib reseptörleri aracılığı ile oluştuğunu göstermekte idi. Sumatriptan kasılma yanıtı PTX'ne duyarlı idi. Bu sonuç kasılma yanıtlarında Gi/o proteinlerinin rol aldığını göstermektedir. Sumatriptan ile oluşan kasılma yanıtlarında kalsiyum kanallarının rolünü test etmek amacıyla L-tipi kalsiyum kanal blokeri nikardipin varlığında kasılma yanıtları değerlendirildi. Yanıtların kalsiyum kanal blokajına duyarlılığı Gi/o kenetli reseptörler aracılığıyla oluşan yanıtlarda kalsiyum kanallarının etkili olduğunu düşündürdü. AKK'de 5-HTı reseptör agonistleri sumatriptan ve naratriptan forskolinle uyarılmış cAMP oluşumunu inhibe etti. Bu yanıtında PTX'ne duyarlı olduğu saptandı. Damar halkalarında sumatriptan ile İP birikimi gözlenmedi. Sumatriptan ve naratriptan aracılı cAMP oluşumunu azaltıcı etki nonselektif 5-HT1B/id reseptör antagonisti GR1 27935 ile tamamen antagonize oldu. Bu yanıt 5-HT-ib reseptör antagonisti ile inhibe olurken, 5-HT-|D reseptör antagonistine duyarlı değildi. Bu sonuç sumatriptan ve naratriptanın cAMP oluşumunu inhibe edici etkisinde 5-HT1B reseptörlerinin rol aldığını göstermekte idi. Bu çalışmalar sonucunda AKK'de 5-HTib/id ve 5-HT2 reseptörlerinin varlığı ve sumatriptan ile oluşan kasılma yanıtlarına 5HTib ve 5-HT2 reseptörlerinin aracılık ettikleri gösterilmiştir. Naratriptan ve sumatriptan 5HTib reseptörlerini uyararak cAMP inhibişyonuna neden olmaktadır. Fakat naratriptan 5-HT-ib reseptörlerini uyarmasına rağmen kasılma yanıtına neden olmamaktadır. Sumatriptan ise 5-HTib reseptörlerini uyararak hem kasılma hemde cAMP inhibişyonuna neden olmaktadır. cAMP inhibisyon yanıtında naratriptanın sumatriptandan daha potent olması ve benzer maksimal cAMP inhibişyonuna neden olmaları 5-HT1B reseptörlerini uyarma efikasilerinde büyük farklılıkların olmadığını düşündürmektedir. Dolayısıyla naratriptanın 5-HT-ib 51reseptörlerini uyarmasına karşın kasılmaya neden olmaması açıklama gerektirmektedir. Bu fenomenin agoniste özgü sinyal iletimi ile açıklanabileceği düşünülmüştür.

Özet (Çeviri)

6.SUMMARY In this study we examined the involvement of 5-HT-ib and 5-HTid receptors, which are coupled to Gi/o proteins, in the vasocontractile response induced by 5-HT-IB/1D receptor agonist sumatriptan in rabbit common carotid artery (CCA). Stimulation of 5-HT1B/id> a2-adrenergic and muscarinic receptors activates Gi/o protein and inhibits adenylyl cyclase which cause a decrease in intracellular cAMP level. It has been shown that, Gi/o coupled receptors increase intracellular calcium and cause vasocontraction. But the mechanism of activation of these signals mediated by Gi/o proteins is still a matter of debate. In some studies it has been shown that, Gi/o coupled receptors increase intracellular calcium through activation of PLC and producing inositol phosphates. In our functional studies, sumatriptan, a 5-HT1B/id receptor agonist, caused concentration-dependent vasocontraction (pD2: 5.08) in CCA. Ketanserin, a 5-HT2A-receptor antagonist, inhibited this response (pKb: 9.4) with its typical potency in the receptor. The same response was also antagonized by GR1 27935, a 5-HTib/id-receptor antagonist, (pKb: 7.2) but with a lower potency than expected from its affinity to 5-HTib/id receptors (which is in the order of nanomolars). In some studies it has been shown that 5-HT-ib/id receptors mediate vasoconstriction in some vascular tissues when the tissues are moderately precontracted by a vasocontratile agent such as thromboxane, KCI, histamin etc., otherwise they are silent. In precontracted rings (by 20-30 mM KCI), concentration-response curve of sumatriptan shifted toward left and its maximal response increased. In these conditions, the response became relatively resistant to ketanserin (pKb: 7.5), but more sensitive to GR1 27935 (pKb: 9.4). These results suggest that both 5-HTib/id 53and 5-HT2A receptors are involved in sumatriptan-induced contractions in CCA, where 5-HT2a receptors apparently act synergistically on 5-HT^/id mediated pathway. The contribution of these receptors to the observed contractions seems to be quite complicated depending on the“contraction state”of the tissue. Immunoblotting experiments using specific antisera against 5-HTib and 5-HT-id receptors revealed the presence of both 5-HTib/id receptors in CCA. Binding studies performed by using a selective radiolabeled-5-HT2A-receptor- ligand showed the presence of this receptor in CCA. Sumatriptan-mediated vasocontractile response was antagonised by SB216641, a selective 5-HT-ib receptor antagonist, with a pKb value of 8.6, which is consistent with its affinity to 5-HT-ib receptor. Antagonism by BRL15572, a selective 5-HTiD receptor antagonist, was weak and less when compared to antagonism of SB216641 and calculated pKb value (pKb: 6.0) was consistent with the affinity for 5-HT-ib subtype but not for 5-HTid subtype. These results indicate no or insignificant involvement of 5-HT-id receptor subtype in the vasocontractile response. The vasocontractile response induced by sumatriptan was highly sensitive to pertussis toxin treatment of CCA. Calcium channel blocker, nicardipine also potently antagonised vasocontractile response to sumatriptan. These results suggested the involvement of both Gi/o proteins and L-type voltage dependent calcium channels in the response. 5-HT, not sumatriptan, stimulated inositol phosphate accumulation in CCA. 5-HT stimulated inositol phosphate accumulation was antagonized by 5HT2a receptor antagonist, spiperone, but not by 5-HT1B/id receptor antagonist, GR127935. It seems that 5-HTib/id receptor stimulation does not lead PLC activation in CCA. Sumatriptan or naratriptan inhibited forskolin stimulated cAMP production. This response was also sensitive to PTX and 5-HTiB receptor antagonist, but not to 5-HTid receptor antagonist. These results suggest that mainly 5-HTiB, 54not 5-HTid receptor, involves in sumatriptan or naratriptan mediated inhibition of cAMP accumulation. Stimulation of 5-HTib receptors by sumatriptan caused cAMP inhibition and vasoconstriction in CCA. On the other hand, naratriptan did not produce vasoconstriction but it cause cAMP inhibition by stimulating 5-HTiB receptor in CCA. Naratriptan was more potent than sumatriptan to inhibit forskolin-stimulated cAMP production and both of them caused similar maximal cAMP inhibition in CCA. This made us consider that, there is no significant difference in the efficacy of these ligands in stimulating ö-HT^ receptor to inhibit cAMP response. Therefore, it requires further explanation why naratriptan did not cause contraction like sumatriptan did, despite both of them stimulate 5-HTib receptors. It is thought that agonist-directed trafficking may be an explanation for this phenomenon.

Benzer Tezler

  1. G proteinlerine kenetli reseptörlerde, reseptör-G proteini kenetinin sinyal transdüksiyon verimi bakımından incelenmesi

    Investigation of receptor-G protein coupting in terms of signal transduction efficiency in G protein coupled receptors

    KEMAL SAYAR

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    1999

    Eczacılık ve FarmakolojiAnkara Üniversitesi

    Farmakoloji ve Klinik Farmokoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. ONGUN ONARIM

  2. Identifying the putative G protein coupled receptor/s candidates of cocaine and amphetamine regulated transcript (CART) peptide

    Kokain ve amfetamin ile regüle edilen transkript (CART) peptidini tanıdığı varsayılan G-proteine kenetli reseptör adaylarının tayini

    MERVE KASAP

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2014

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ÇAĞDAŞ DEVRİM SON

  3. Functional and structural insights into a novel insect Gprotein-coupled receptor, allatostatin receptor type C ofpine processionary moth

    Yeni bir böcek G proteinine-bağlı reseptörü olan çam kesekurdu C tipi allatostatin reseptörünün işlevi ve yapısınadair

    AIDA SHAHRAKI

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2020

    BiyolojiBoğaziçi Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DR. NECLA BİRGÜL İYİSON

  4. K562 hücre soylarının çoğalmasında muskarinik reseptörlerin rolleri

    The role of muscarinic receptors in K562 cell proliferation

    BANU AYDIN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    BiyofizikMarmara Üniversitesi

    Biyofizik Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. HÜLYA CABADAK

  5. Experimental studies for production of cytoplasmic and periplasmic thermostable glucose isomerase in recombinant escherichia coli

    Sitoplazmik ve periplazmik, ısıya dayanıklı glikoz izomerazın recombinant escherichia coli'de üretimi için deneysel çalışmalar

    BURCU ÖZTÜRK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2006

    BiyoteknolojiBoğaziçi Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. AMABLE HORTAÇSU