Experimental studies for production of cytoplasmic and periplasmic thermostable glucose isomerase in recombinant escherichia coli
Sitoplazmik ve periplazmik, ısıya dayanıklı glikoz izomerazın recombinant escherichia coli'de üretimi için deneysel çalışmalar
- Tez No: 196825
- Danışmanlar: PROF.DR. AMABLE HORTAÇSU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2006
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 99
Özet
ÖZETS TOPLAZM K VE PER PLAZM K, ISIYA DAYANIKLIGL KOZ ZOMERAZIN RECOMBINANT ESCHERICHIA COLI'DEÜRET M Ç N DENEYSEL ÇALIŞMALARBurcu ÖztürkGlikozun früktoza tersinir izomerizasyonunu katalize eden glikoz izomeraz (GI)yüksek früktoz mısır şurubu üretiminde ekonomik değere sahiptir. Yüksek sıcaklıklardaizomerizasyon reaksiyonu için denge früktoza doğru yönlenir. GI'nın termofilikmikroorganizmalardaki düşük ekspresyon düzeyi, termofilik mikroorganizmalarınüretiminde ve enzimin natif hücrelerinden saflaştırılmasında karşılaşılan zorluklar, ısıyadayanıklı enzimlerin doğal hücrelerinden büyük miktarlarda üretilmelerini pratiksiz halegetiriyor. Bu problemlerin üstesinden gelmek için termofilik Thermus thermophilus'tan GIiki farklı pET vektörün içine klonlandı ve Escherichia coli'de ekspres edildi. Buçalışmanın ilk kısmında GI geni recombinant proteinin periplazmik lokalizasyonunusağlayan pelB sinyal dizilimine sahip olan pET20b vektörünün içine klonlandı. Translokeolan enzimin toplam üretilen enzime olan oranı zamanla değişti, bu GI'nın sitoplazmadakikatlanma hızındaki değişimden dolayı olabilir. GI'nın recombinant hücrelerinperiplazmasındaki ve sitoplazmasındaki en yüksek hacimsel ve spesifik aktiviteleri 50.6U/L kültür, 42.8 U/mg protein, 36.6 U/L kültür ve 19.6 U/mg protein olarak hesaplandı. Buçalışmanın ikinci kısmında aynı gen, ısıya dayanıklı GI enziminin yüksek seviyedesitoplazmik ekspresyonu için pET28a vectörünün içine klonlandı. En yüksek hacimsel vespesifik aktiviteler 1474.9 U/L kültür ve 366.0 U/mg protein olarak hesaplandı.
Özet (Çeviri)
ABSTRACTEXPERIMENTAL STUDIES FOR PRODUCTION OFCYTOPLASMIC AND PERIPLASMIC THERMOSTABLE GLUCOSEISOMERASE IN RECOMBINANT ESCHERICHIA COLIBurcu ÖztürkGlucose isomerase (GI), which catalyzes the reversible isomerization of Glucose toFructose, is of commercial importance in the production of high fructose corn syrup. Athigh temperature, equilibrium for the isomerisation reaction is shifted toward fructose. Thelow expression level of GI in the thermophilic microorganisms, the difficulties encounteredduring cultivation of the thermophilic microorganisms and purification of the enzyme fromits native host make obtaining large amounts of the thermostable enzymes from the naturalhost impractical. To overcome these problems, GI from thermophile Thermusthermophilus was cloned into two different pET vectors, and expressed in Escherichia coli.In the first part of this study, the GI gene was cloned into pET20b vector containing pelBsignal sequence, which enables the periplasmic localization of the recombinant protein.The ratio of the translocated enzyme to the total produced enzyme changed with timewhich could probably be varying the folding rate of GI in cytoplasm. The maximumvolumetric and specific activities of GI in periplasm and cytoplasm of the recombinantcells were calculated as 50.6 U/L culture and 42.8 U/mg protein, 36.6 U/L culture and 19.6U/mg protein, respectively. In the second part of this study, the same gene was cloned intopET28a vector for high level cytoplasmic expression of the thermostable GI enzyme. Themaximum volumetric and specific activities were calculated as 1474.9 U/L culture and366.0 U/mg protein, respectively.
Benzer Tezler
- CHARACTERIZATION OF THE REGULATORY MECHANISMS OF NOD LIKE RECEPTORS IN THE GENERATION OF IMMUNE RESPONSES: REVISITING NLRC4 IN EOSINOPHILIC FUNCTIONS IN VITRO
BİR EDİNSEL BAĞIŞIKLIK OLAN T2 HÜCRE CEVABININ NOD BENZERİ RESEPTÖRLERİ (NLR) İLE REGÜLASYON MEKANİZMALARININ KARAKTERİZASYONU
ILGIN AKKAYA
Yüksek Lisans
İngilizce
2019
Allerji ve İmmünolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. CEREN ÇIRACI
- Rekombinant mikroorganizmalar kullanılarak L-dopa ve dopamin'in eşzamanlı biyosentezi
Simultaneous biosynthesis of L-dopa and dopamine using recombinant microorganisms
VEYİS SELEN
Doktora
Türkçe
2015
Kimya MühendisliğiFırat ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. DURSUN ÖZER
PROF. DR. HİKMET GEÇKİL
- Investigation of the energy metabolism of helicobacter-activated B cells
Helikobakter ile aktive edilmiş B hücrelerinin enerji metabolizmasının araştırılması
MEHMET ÇALÇI
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
Allerji ve İmmünolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. AYÇA SAYI YAZGAN
- Systematic computational analysis of potential rna interference regulation in Toxoplasma gondii
Toxoplasma gondii'de potansiyel rna interferans regülasyonunun sistematik sayısal analizi
MEHMET VOLKAN ÇAKIR
Yüksek Lisans
İngilizce
2009
Biyoistatistikİzmir Yüksek Teknoloji EnstitüsüMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. JENS ALLMER
- Açlık, beslenme ve DL-DOPA'nın sıçan mide-barsak mukozasına etkilerinin ışık mikroskopu ve ultrastrüktür düzeyinde incelenmesi
Başlık çevirisi yok
FİLİZ AYDIN (KARAÇAVUŞ)
Doktora
Türkçe
1985
Morfolojiİstanbul ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. YURDAGÜL CANBERK