Çukurova bölgesinde saptanan glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enzim varyantlarının phage display yöntemiyle tanımlanması
Determination of the G-6-PD variants detected in Çukurova region by using phage display technique
- Tez No: 107663
- Danışmanlar: PROF.DR. KIYMET AKSOY
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Fajmit vektör, G6PD, İmmünglobulin, Phage display, ScFv, XII, G6PD, Immunoglobulin, Phage display, Phagemid vector, ScFv xm
- Yıl: 2001
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Çukurova Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 112
Özet
ÖZET Çukurova Bölgesinde Saptanan G-6-PD Varyantlarının Phage Display Yöntemiyle Tanımlanması Glukoz-6-Fosfat Dehidrogenaz (G6PD) vücudun tüm hücrelerinde bulunan önemli bir enzimdir. G6PD hücrede gerekli bir indirgeyici güç kaynağına sahip olmasından dolayı housekeeping bir enzim olarak düşünülmektedir ve eritrositlerde G6PD pentoz fosfat yolunda ilk ve hız sınırlayıcı enzimdir. G6PD eksikliği bilmen en yaygın kalıtsal enzim defektidir ve dünya üzerinde 400 milyondan fazla insanı etkilemektedir. Dünya Sağlık Örgütünün (WHO) biyokimyasal, kinetik ve klinik kriterlerine göre 442 farklı G6PD varyantı tanımlanmıştır. Yapılan tarama çalışmaları sonucunda Çukurova bölgesinde enzim eksikliğinin %8,2 oranmda olduğu rapor edilmiştir. Yapılan bu çalışmada, phage display tekniğinden yararlanarak scFv formunda insan G6PD enzimini algılayabilen rekombinant antikor parçası elde edilmiştir. ScFv kütüphanesinin hazırlanmasında Balb/cJ soyuna ait fareler, kolon kromatografisi ile kısmi olarak saflaştırılmış G6PD enzimi ile bağışıklanmıştır. Bağışıklanan farelerin dalaklarından mRNA izole edilmiş ve immünglobulin değişken ağır ve hafif zincir genlerini içeren cDNA'yı elde etmek için kullanılmıştır. Ağır ve hafif zincir genleri PCR ile çoğaltılmıştır. İmmünglobulin ağır ve hafif zincir değişken bölgeleri sentetik bir linker yardımıyla PCR işlemiyle ve pCANTAB5E fajmit vektörüne klonlanmıştır. 3 defa uygulanan biopanning işlemi sonrasmda rastgele seçilen 20 klon insan G6PD enzimine karşı faj ELİZA yöntemiyle taranmış ve bu klonlardan iki tanesinin G6PD enzimini tanıdığı tespit edilmiştir.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT Determination of the G-6-PD Variants Detected in Çukurova Region by Using Phage Display Technique GIucose-6-phosphate dehydrogenase is a ubiquitous enzyme that is found in all cells of the body. G6PD is often considered to be a housekeeping enzyme because it is an essential source of reducing power within the cell. In erythrocytes, G6PD is the first and rate limiting enzyme in the hexose monophosphate shunt Deficiency of G6PD is the most common inherited enzyme defect known, affecting more than 400 million people worldwide. 442 different G6PD variants have been described based on World Health Organization (WHO) criteria for biochemical, enzymatic and clinical characteristics. The incidence of G6PD deficiency is reported as 8,2% according to the population surveys done in Çukurova region of Turkey. In this study, by using phage display tecnique in the single chain variable fragment (scFv) form recombinant antibody fragment that perceive human G6PD enzyme was obtained. For the construction of scFv library, mice which are Balb/cJ race were immunized with G6PD enzyme that purified partially using colon chromatography. The mRNA is extracted from mice spleen and used to obtain cDNA containing the genes for the variable heavy and light chains. These genes were amplified by using PCR. After amplification immunglobulin heavy and light chain is linked together with a synthetic linker through a PCR assembly process and these assembled genes are cloned into pCANTAB5E phagemid vector. After three biopanning process randomly selected 20 colony against human G6PD enzyme were screened with phage ELISA method and two colony from these colonies that recognize G6PD enzyme were established.
Benzer Tezler
- Çukurova bölgesinde kordon kanı glukoz 6 fosfat dehidrogenaz aktivitesi, yapısı, moleküler özelliği ve yenidoğan hiperbilirubinemisi üzerine etkisi
Glucose 6 phosphate activity, structure, molecular property and effect on neonatal hyperbilirubinemia in cord blood in Çukurova region
FERDA ÖZLÜ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2007
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıÇukurova ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET SATAR
- Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enzim eksikliği saptanan olguların kinetik ve moleküler özelliklerinin incelenmesi
The Study of kinetic and molecular properties of the detected glucose-6-phosphate dehydrogenase deficient cases
EBRU BİLGET GÜVEN
- Doğu Akdeniz bölgesinde sert çekirdekli meyvelerde plum pox potyvirüs (PPV, Sharka)'ünün durumunun belirlenmesi ve karakterizasyonu
Determination and characterization of plum pox potyvirüs (PPV, Sharka) on stone fruits at east mediterranean region
GÖKMEN KOÇ
- Çukurova bölgesinde Bisalbuminemi
Başlık çevirisi yok
YÜKSEL ÖZDEMİR
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1977
BiyokimyaÇukurova ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GÜNEŞ YÜREĞİR
- Çukurova bölgesinde görülen primer konjenital glokomlu olguların moleküler genetik analizi
Molecular genetic analysis of cases with primary congenital glaucoma in Cukurova region
AHSEN NAZİRE AKBAŞ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2021
Göz HastalıklarıÇukurova ÜniversitesiGöz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ELİF ERDEM