Geri Dön

Purification of Pst I endonuclease from providencia stuartii 164

Pst I endonükleazının providencia stuartii 164'den saflaştırılması

  1. Tez No: 112091
  2. Yazar: ERDEM FEHMİ ÇELİK
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. KUTLU ÜLGEN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Kimya Mühendisliği, Chemical Engineering
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2001
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 164

Özet

ÖZET PST I ENDONUKLEAZININ PROVIDENCIA STUARTII 164'DEN SAFLAŞTIRILMASI Pst I endonükleazı, Providencia stuartii 164'ün restriksiyon enzimi olup genellikle rekombinant DNA teknolojisinde kullanılır. DNA üzerindeki spesifik dizileri tanıyarak çift sıralı kesimler meydana getirme özelliğine sahiptir. Pst I restriksiyon enzimi üzerindeki çalışmalar, dializ, sonikasyon, amonyum sülfat çöktürmesi, iyon değişimi kromatografısi ve hidroksiapatit kromatografısi aşamalarından oluşan klasik yöntemlerin kullanılarak saflaştırılmasından ibarettir. Bu beş aşamalı klasik prosedür ile elde edilen Pst Fin aktivitesi birim yaş hücrede 990 ünite, spesifik aktivitesi ise miligram proteinde 64 100 ünite olarak belirlenmiştir. Bu çalışmada ise Pst I endonükleazı için yüksek performanslı iyon değişimi kromatografık yöntemi kuallanılarak kısa bir saflaştırma prosedürü geliştirilmeye çalışılmıştır. Waters Katyon Değiştirici Protein Pak SP 8HR-Apl ve Anyon Değiştirici Protein Pak DEAE 15HR-AP1 kolonları kullanılarak, kromatografik ortamın Pst Fin ayrıştırılması ve geri kazanılması üzerindeki etkileri incelenmiştir. Bu yüksek performanslı iyon değişimi kromatografık yöntemi kolonlarına uygun olan ve aktif Pst I endonükleaz fraksiyonlarının geri kazanılmasında kullanılan çeşitli mobil faz sistemleri test ve optimize edilmiştir. Bunlardan L-Histidine mobil fazı, fraksiyonlarda aktif Pst I endonüzkleazıyla sonuç vermiştir. Geri kazanılan enzimin aktifliği ve saflığı ise sırasıyla agaroz jel elektroforez ve SDS-poliakrilamid jel elektroforez yöntemleri ile kontrol edilmişlerdir. SDS-poliakrilamid jel elektroforez yöntemi, yüksek performanslı iyon değişimi kromatografık yöntemi deneylerinin 74 ve 78inci dakikalarında Pst I'm ve diğer proteinlerin varlığını göstermektedir.

Özet (Çeviri)

IV ABSTRACT PURIFICATION OF PST I ENDONUCLEASE FROM PROVIDENCIA STUARTII 164 Pst I endonuclease is the restriction enzyme of Providencia stuartii 164 and mostly used in recombinant DNA technology. It cleaves the symmetrical hexanucleotide sequence; 5'-C-T-G-C-A^ G-3' and 3'-Gf A-C-G-T-C-5'. Studies on the purification of Pst I restriction enzyme were so far accomplished by following the classical procedure; dialysis, sonication, ammonium sulphate precipitation, ion exchange chromatography and hydroxyapatite batch chromatography. The five step classical procedure resulted in a recovery of 990 units of Pst I activity per gram wet cells and a specific activity of 64 100 units per miligram proteins. A short purification procedure for Pst I endonuclease is then developed using high- performance ion exchange liquid chromatography. A parametric study is conducted to determine the factors affecting the separation behaviour of Pst I endonuclease from the cell extracts. The effects of the types of the chromatographic media on the separation and recovery of Pst I endonuclease are investigated using Waters Cation Exchange Protein Pak SP 8HR-AP1 and Anion Exchange Protein Pak DEAE 15HR-AP1 columns. Several buffer systems suitable for these cation and anion exchange materials in these HPLC columns are tested and optimised for the recovery of active Pst I endonuclease fractions. Among these, L-Histidine buffer (pH:6.0) resulted in active Pst I endonuclease in eluted fractions. The activity and purity of the recovered enzyme are checked by electrophoretic techniques of agarose gel electrophoresis and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, respectively. SDS-PAGE analyses of active fractions collected between 74th and 78th minutes of HPLC experiments show the presence of Pst I endonuclease and other proteins.

Benzer Tezler

  1. Development of a smal-scale purification procedure for the restriction enzyme PstI

    PstI restriksiyon enziminin saflaştırılması için küçük ölçekli yöntem geliştirilmesi

    DİDEM RANA TÜRKKAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1996

    Kimya MühendisliğiBoğaziçi Üniversitesi

    PROF.DR. BETÜL KIRDAR

  2. Optimisation of stationary and mobile phases for the purification of Pst I endonuclease by ion exchange chromatography

    Pst I endonükleazının iyon değişimi kromatografisi yöntemiyle saflaştırılmasında durgun ve hareketli fazların uygunluğunun incelenmesi

    CÜNEYT MEHMET KATIEL

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2004

    Kimya MühendisliğiBoğaziçi Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. KUTLU ÜLGEN

  3. Polietilenglikol esaslı bazı yeni oligoazoperoksiester başlatıcıların sentezi ve karekterizasyonu

    Synthesis and characterization of some new oligoazoperoxyester initiators based on polyethyleneglycolos

    ALİPAŞA AYAS

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1988

    Kimya MühendisliğiKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BAKİ HAZER

  4. Production of recombinant amylopullulanase enzyme from Thermoanaerobium brockii brockii

    Thermoanaerobium brockii brockii kaynaklı amilopullulanaz enziminin rekombinant üretimi

    HANDE MUMCU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2018

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NEVİN GÜL-KARAGÜLER

  5. Elektrooksidasyon prosesinde plaka ve ağ yapılı Ir-Ru elektrotların parasetamol giderimine etkisinin araştırılması

    Investigation of the effect of Ir-Ru electrodes with plate and mesh structure on paracetamol removal in the electrooxidation process

    BEYZANUR GÜZEL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Çevre MühendisliğiGebze Teknik Üniversitesi

    Çevre Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ABDURRAHMAN AKYOL