Partial purification and kinetic characterization of l-lactate dehydrogenase from rhizopus oryzae
Rhizopus oryzae'den laktat dehidrogenazın kısmi saflaştırılması ve kinetik karakterizasyonu
- Tez No: 116222
- Danışmanlar: PROF. DR. HALUK HAMAMCI, PROF. DR. MERAL YÜCEL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Laktat dehidrogenaz, Laktik asit üretimi, Rhizopus oryzae, Saflaştırma, Lactate dehydrogenase, lihizopus oryzae, Lactic acid fermentation, Lactic acid production, Rhizopus oryzae, Purification
- Yıl: 2001
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
L-Laktat dehidrogenaz (EC 1.1.1.27), L-laktat: NAD+ oksidoredüktaz (LDH), laktik asit fermentasyonunun son aşamasında, NADH varlığında pürivatın laktata indirgenmesini katalize eder. LDH, tüm omurgalılarda, bir çok omurgasızlar ile bitkilerde ve çeşitli mikroorganizmalarda bulunur. LDH nin mikrobiyoloji, gıda, kozmetik ve kağıt endüstrilerinde yaygın kullanım alanları mevcuttur. Bir takım enzimlerin saptanması sırasında da varlığına gereksinim duyulan aksüler bir enzimdir. Mikrobiyal LDH, laktik asit üretimindeki parametrelerin belirlenmesi amacıyla da cok dikkat çekmiştir, küresel laktik asit talebi yıllık 100.000 ton' dan fazladır. Bu çalışmada, LDH enzimi laktik asit üreten filamentli bir küf suşu olan Rhizopus oryzae (ATCC 9363), den kısmen saflaştırılmış ve karakterize edilmiştir. LDH amonyum sülfat fraksiyonu ve kromatofokusing teknikleri ile saflaştırılmıştır. Enzim % 30-60 amonyum sülfat fraksiyonunda çökmüş ve % 76 lık bir verimle 2.4 kat saflaştırılmıştır. Fraksiyon tuzlardan uzaklaştırıldıktan sonra, PBE 94 kolonuna tabi tutulmuş ve % 10 luk bir verimle 1.5 katsaflık derecesi elde edilebilmiştir. Enzim aktivitesi pürivatın laktata indirgenmesi sırasındaki NADH oksidasyonunun 340 nm dalga boyunda takip edilmesi ile saptanmıştır. Ham özütte optimum pH ve sıcaklık değerleri sırasıyla 7.5 ve 35 °C olarak bulunmuştur. Enzimin Km ve Vmax değerleri Pürivat için 6.44 x 10 ~3 M, and 0.223 u mol min“ ' mL”1 olarak bulunmuştur. SDS-PAGE kullanılarak enzimin monomer formunun moleküler ağırlığı 36 kDa olarak tahmin edilmiştir.Anahtar kelimden Laktat dehidrogenaz, Rhizopus oryzae, Laktik asit fermentasyonu
Özet (Çeviri)
L-Lactate dehydrogenase (EC 1.1.1.27), L-lactate:NAD+ oxidoreductase (LDH), catalyzes the reduction of pyruvate in the presence of NADH, in the final step of lactic acid fermentation. It is present in all vertabrates, many invertabrates, plants and diverse microorganisms LDH has an application area in microbiology, food, cosmetics and paper industries. It is also an important auxiliary enzyme for the determination of many enzymes. Microbial LDH, has caught great attention in order to determine the parameters of lactic acid production: Global lactic acid demand is estimated as more than 100.000 tons per year. In this study, LDH was partially purified and characterized from the filamentous fungi, Rhizopus oryzae (ATCC 9363), a lactic acid producing fungus. LDH lias been partially purified by ammonium sulfate fractionation and chromatofocusing techniques. The enzyme was precipitated between 30-60 % saturation, by which a 2.4 purification foldwith 76 % recovery was achieved. After desalting, the sample was applied to a PBE 94 column and the purification fold was 1.5 with 10 % recovery. The enzyme activity was determined by monitoring NADH oxidation at 340 run, as pyruvate is reduced to lactate. The optimum pH and temperature for LDH activity in crude extract was determined as 7.5 and 35 °C, respectively. The Km and V^ values of the enzyme for pyruvate has found as 6.44 x 10 ~3 M, and 0.223 ji mol min“1 mL”1. The molecular weight of monomer unit of LDH was estimated as 36 kDa with SDS-PAGE.
Benzer Tezler
- Ocimum basilicum L.'den elde edilen polifenol oksidaz enziminin saflaştırılması, kinetik ve elektroforetik özelliklerinin incelenmesi
Purification and investigation of kinetic and electrophoretic properties of polyphenol oxidase enzyme obtained from Ocimum basilicum L.
PINAR TURAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2005
KimyaBalıkesir ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. MEHMET DOĞAN
Y.DOÇ.DR. SERAP DOĞAN
- İnülinaz enziminin üretimi, kısmi saflaştırılması, karakterizasyonu ve fermentasyonlarının matematiksel modellenmesi üzerine bir araştırma
An investigation on the production, partial purification, characterization of inulinase enzyme and mathematical modeling of its fermentations
MUSTAFA GERMEÇ
Doktora
Türkçe
2019
Gıda MühendisliğiAkdeniz ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. İRFAN TURHAN
- Fenilalanin amonyum liyazın kereviz kökünden saflaştırılması, karakterizasyonu ve enzim aktivitesi üzerine bazı metallerin etkilerinin araştırılması
Purification and characterization of phenylalanine ammonia lyase from celery root and investigation of the effects of some metals on enzyme activity
ESMANUR ERMİŞ
- Metilen mavisinin magnetik aktif karbon ile adsorpsiyonunun incelenmesi
Investigation of adsorption of methylene blue with magnetic activated carbon
ZEYNEP AYDEMİR
- Selülotik atıklardan izole edilen Bacillus cereus bakterisi tarafından üretilen selülaz enziminin biyokimyasal karakterizasyonu
Biochemical characterization of cellulase enzyme by Bacillus cereus isolated from cellulotic waste
HATİCE ELİF IŞIK BİÇEN