Preparation of immunoaffinity microbeads for removal of cholesterol from hypercholesterolemic human plasma
Hiperkolesterolemik insan plazmasından kolesterol uzaklaştırılması için immunoafinite mikrokürelerin hazırlanması
- Tez No: 131133
- Danışmanlar: PROF. DR. ADİL DENİZLİ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Hiperkolesterolemi, immunoafinite kromatografisi, yönlendirilerek immobilizasyion, LDL adsorpsiyonu, poli(HEMA-EGDMA) mikroküreler, Hypercholesterolemia, immunoaffinity chromatography, oriented immobilization, LDL adsorption, poly(HEMA-EGDMA) microbeads
- Yıl: 2003
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 121
Özet
HİPERKOLESTEROLEMİK İNSAN PLAZMASINDAN KOLESTEROL UZAKLAŞTIRILMASI İÇİN İMMUNOAFİNİTE MİKROKÜRELERİN HAZIRLANMASI Handan Yavuz OZ Hiperkolesterolemi kandaki LDL-kolesterol seviyesinin yüksek olması ile karakterize edilen ve atherosklerozis için doğrudan risk oluşturan bir hastalıktır. Kolesterol seviyesini kontrol etmek veya yüksek ise düşürmek için başlıca dört yaklaşım söz konusudur. Bunların başında diyet gelir. İkinci yaklaşım ilaçla tedavidir. Üçüncü yaklaşım kandaki kolesterolün bir ekstrakorporal sistemle uzaklaştırılması şeklindedir. Hastalığın oldukça ileri aşamalarında baş vurulan son çözüm ise cerrahi işlemdir (bypass, vb.). LDL uzaklaştırılmasında biyoafinite temeline dayanan ekstrakorporal tedavi son yıllarda oldukça dikkat çekmektedir. Bu çalışmada, hiperkolesterolemik insan plazmasından LDL uzaklaştırılması amacıyla anti-LDL antibadi immobilize edilmiş mikroküre bazlı immunoafinite adsorbentinin hazırlanması amaçlanmış ve poli(HEMA-EGDMA) taşıyıcı matriks olarak seçilmiştir. Poli(HEMA-EGDMA) mikroküreler süspansiyon polimerizas onu tekniği ile hazırlanmıştır. Polimerik mikroküreler SEM, şişme deneyleri ve yüzey alanı ölçümleri ile karakterize edilmiştir. Mikrokürelerin kan uyuşabilirlik deneyleri de gerçekleştirilmiştir. Mikroküre yapısındaki hidroksil grupları CNBr ile aktive edilmiş, daha sonra Protein A ve anti-LDL antibadi molekülleri farklı Protein A, anti-LDL antibadi başlangıç derişimlerinde immobilize edilmiştir. Protein A takılı poli(HEMA-EGDMA) mikrokürelere anti-LDL antibadi immobilizasyonu farklı miktarlarda anti-LDL antibadi içeren çözeltilerden farklı pH'larda ve tampon sistemlerinde incelenmiştir. Son basamakta Protein A üzerinden yönlendirilerek ve doğrudan immobilize anti-LDL antibadi içeren sorbentlere insan plazmasından LDL adsorpsiyonu ve rejenerasyon incelenmiştir. Elde edilen önemli sonuçlar aşağıda özetlenmiştir: Poly(HEMA-EGDMA) mikrokürelerin şişme değeri %60'dır. In-vitro koşullarda albumin, globulin ve fibrinojen adsorpsiyonu düşük düzeydedir. Pıhtılaşma zamanları kontrol plazma ile karşılaştırabilir düzeydedir. Platelet ve lökosit kaybı oldukça düşüktür. Maksimum Protein A bağlanması 0.5 mg/mL Protein A başlangıç derişiminde gözlenmiştir (8.32 mg Protein A/g mikroküre). Poli(HEMA-EGDMA) ve poli(HEMA-EGDMA)/Protein A mikrokürelere maksimum anti-LDL antibadi immobilizasyonu sırasıyla 1 1.57 ve 28.26 mg/g'dır.Non-spesifikanti-LDL antibadi adsorpsiyonu 0.83 mg/g'dir. Poli(HEMA-EGDMA), poli(HEMA- EGDMA)/ anti-LDL antibadi ve poli(HEMA-EGDMA)/Protein A/anti-LDL antibadi immobilize mikrokürelerin hiperkolesterolemik insan plazmasından kolesterol adsorpsiyon değerleri sırasıyla 0.48, 8.23 ve 11.65 mg/g'dır. Adsorplanan LDL moleküllerinin % 96'sı başarı ile desorbe edilmiştir. Adsorpsiyon-desorpsiyon döngüsü 6 kez tekrarlanmış ve adsorpsiyon kapasitesinde önemli bir azalma olmadığı belirlenmiştir.
Özet (Çeviri)
PREPARATION OF IMM UNO AFFINITY MICROBEADS FOR REMOVAL OF CHOLESTEROL FROM HYPERCHOLESTEROLEMIC HUMAN PLASMA Handan Yavuz ABSTRACT Hypercholesterolaemia is an autosomal disorder characterized by high levels of low density lipoprotein (LDL)-cholesterol in plasma which correlates directly with an increased risk for the atherosclerosis. In addition to dietary and drug therapy, many attempts have been made to remove cholesterol and LDL directly from plasma of patients suffering from FH, especially resistant to drug therapy. Extracorporeal treatment for removal of LDL based on bioaffinity adsorption has been attracted considerable attention. In this study, we aimed to prepare an immunoaffinity adsorbent containing anti-LDL antibody for selective removal of cholesterol from hypercholesterolemic human plasma. We selected poly(HEMA- EGDMA) as the solid matrix. Poly(HEMA-EGDMA) microbeads were produced by suspension polymerization technique. Polymeric microbeads were characterized by swelling studies, SEM and surface area measurements. Blood-compatibility tests of microbeads were also investigated. Then, the hydroxyl functional groups on these microbeads were activated by CNBr, and then anti-LDL antibodies were immobilized first directly and then oriented immobilized through Protein A under different medium conditions (i.e. CNBr, anti-LDL and Protein A initial concentrations, medium pH and buffer type). Later, LDL coupling on the random and oriented anti-LDL antibody immobilized microbeads from human plasma and regeneration were also studied. Important results obtained in this study were summarized as follows: The water swelling ratio of the poly(HEMA-EGDMA) microbeads is 60%. Under in-vitro conditions, adsorption of albumin, fibrinogen and gamma-globulin on the anti-LDL antibody immobilized poly(HEMA-EGDMA) microbeads are negligible. All the clotting times are comparable with control plasma. Lost of platelet and leukocyte were very low. The maximum Protein A immobilization was achieved around at an initial Protein A concentration of 0.5 mg/mL (8.32 mg Protein A/g microbead). Maximum anti-LDL antibody immobilization onto poly(HEMA-EGDMA) and poly(HEMA-EGDMA)/ProteinA microbeads were 1 1.57 and 28.26 mg/g, respectively. The non-specific anti-LDL antibody adsorption was 0.83 mg/g. PoIy(HEMA-EGDMA), Poly(HEMA- EGDMA)/Anti-LDL antibody immobilized and Poly(HEMA-EGDMA)/ProteinIV A/Anti-LDL Antibody immobilized microbeads adsorbed 0.48, 8.23 and 1 1.65 mg LDL/g microbead respectively from hypercholesterolemic human plasma. Up to 96 % of the adsorbed LDL was desorbed. The adsorption-desorption cycle was repeated 6 times using the same microbeads. There was no significant loss in the adsorption capacity.
Benzer Tezler
- Transferrin saflaştırılması için manyetik immünoafinite mikrokürelerin hazırlanması
Preparation of magnetic immunoaffinity microbeads for transferrin purification
DİLARA SAÇLIGİL
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SERAP ŞENEL
PROF. DR. HANDAN YAVUZ ALAGÖZ
- AGO2 proteininin saflaştırılması ve mikro RNA etkileşimlerinin incelenmesi
Purification of AGO2 protein and investigation of micro RNA interactions
SERCAN GÜZEL
- Preparation of fab fragment immobilized immunoaffinity cryogels and albumin purification
Fab fragment immobilize immunoafinite kriyojellerin hazırlanması ve albümin saflaştırılması
SABINA HUSEYNLI
- Preparation of poly (glycidyl methacrylate) based cryogels for immunoaffinity chromatography
İmmünoafinite kromatografisi için poli (glisidil metakrilat) temelli kriyojellerlerin hazırlanması
TURKAN MAMMADOVA
- Okratoksin A tayini için monolitik afinite kolonlarının hazırlanması ve iki-boyutlu HPLC sisteminde çevrimiçi analizlerin incelenmesi
Preparation of monolithic affinity columns for ochratoxin A determination and investigation of online analyses in the two-dimensional HPLC systems
CANAN ARMUTCU ÇORMAN
