Tavşan oviduktal oositlerinin in vitro fertilizasyonunda fötal buzağı serumu ve kumulus hücrelerinin etkileri
Effects of cumulus cells and fetal calf serum on in vitro fertilization of rabbit oviductal oocytes
- Tez No: 138204
- Danışmanlar: PROF. DR. NECMETTİN TEKİN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
- Anahtar Kelimeler: Fötal buzağı serumu, in vitro fertilizasyon, kumulus hücreleri, oosit, tavşan, Cumulus cells, fetal calf serum, in vitro fertilization, oocyte, rabbit
- Yıl: 2003
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 73
Özet
54 ÖZET Tavşan Oviduktal Oositlerinin İn Vitro Fertilizasyonunda Fötal Buzağı Serumu ve Kumulus Hücrelerinin Etkileri Bu çalışma tavşan oviduktal oositlerinin in-vitro fertilizasyonu üzerinde kumulus hücreleri ile fötal buzağı serumunun etldlerinin araştırılması amacıyla yapılmıştır. Çalışmada 24 adet Yeni Zellanda dişi ve 2 adet Yeni Zellanda erkek tavşan kullanıldı. Dişi tavşanlarda süperovulasyon oluşturmak amacıyla 3 gün süreyle 24 saat arayla 75 IU PMSG kas içi yolla, son PMSG enjeksiyonundan 24 saat sonra 100 IU hCG damar içi yolla uygulandı. hCG enjeksiyonundan 13-15 saat sonra ovidukt yıkanarak oositler toplandı. Süperovulasyon uygulamasını takiben ovaryumda 184 adet ovulasyon odağı, 120 adet patlamamış follikül sayıldı. Ovidukt yıkaması sonucu 158 adet oosit toplandı. Bunların içinden düzenli kumulus hücre yapısı ve homojen ooplazmaya sahip olan 142 tanesi fertilizasyonda kullanıldı. Oositlerin bir kısmı kumulus hücreleriyle birlikte, diğer bir kısmı ise 1 mg/ml hyaluronidaz katılan medium ile pipete edilerek kumulus hücrelerinden ayrılarak fertilizasyona alındı. Sperma erkek tavşanlardan sun'i vajen yardımıyla alındı. Motil spermatozoonlann seçiminde swim-up tekniği uygulandı. Spermatozoa kapasitasyonu amacıyla 20 ug/ml heparin içeren MDM solüsyonu kullanıldı. İn vitro kapasitasyon için, fertilizasyon ortamında 10s spermatozoa/ml olacak şekilde kapasitasyon mediumuyla sulandırılarak 38°C'de, % 5 CO2 ve % 90 nem içeren inkübatörde 15 dakika inkübe edildi. Gametler in vitro fertilizasyon için MDM' de 5 saat, kültür için Ham's F-10 mediumunda 18-21 saat inkübe edildi. Serumun etkisinin değerlendirilmesi amacıyla Ham's F-10 mediumuna % 20 Fötal Buzağı serumu eklendi. Fertilizasyonun değerlendirilmesi oositlerin bölünme aşamalarına ulaşma oranları saptanarak yapıldı. Kültür periyodu sonunda FCS'li kültür mediumunda inkübe edilen 36 adet kumuluslu oositin 26 tanesinde, FCS'siz kültür mediumunda 33 adet kumuluslu oositin 22 tanesinde fertilizasyon saptandı. Fertilizasyon oranları sırasıyla % 72,2; % 66,7 olarak kaydedildi. FCS'li kültür mediumunda inkübe edilen 35 adet kumulussuz oositin 24 tanesinde, FCS'siz kültür mediumunda inkübe edilen 38 adet kumulussuz oositin 21 tanesinde fertilizasyon saptandı. Fertilizasyon oranlan sırasıyla % 68,6; % 55,3 olarak kaydedildi. Verilerin değerlendirilmesinde ki- kare testi kullanıldı. Gruplar arası farkın istatistik! açıdan önemli olmadığı belirlendi.
Özet (Çeviri)
55 SUMMARY Effects of Cumulus Cells and Fetal Calf Serum on In Vitro Fertilization of Rabbit Oviductal Oocytes The aim of this study was to investigate the effects of fetal calf serum and cumulus cells on in vitro fertilization of rabbit oviductal oocytes. In this study 24 female and 2 male New Zealland rabbits were used. For superovulation 75 IU PMSG was intramusculary administered 3 times with 24 hours intervals, 24 hours after the last PMSG injection, 100 IU hCG was administered intravenously and 13-15 hours after hCG injection oocytes were collected by flushing of oviduct. Following superovulation application 184 ovulation points and 120 unruptured follicle were counted on the ovaries. 158 oocytes were collected by oviductal flushing. 142 of these which has homogeneous ooplasm and intact cumulus cells were used in fertilization. Some of the oocytes were used in fertilization with cumulus cells others were used without cumulus cells. Cumulus cells were removed by pipetting in a medium supplemented with lmg/ml hyaluronidase. Semen was collected by artificial vagina from bucks. Swim- up technic was used to separate motile spermatozoon. Modifiye defined medium with 20 ug/ml heparine was used for IVC. Semen was diluted with capacitation medium 10s sperm/ml per fertilization drop and kept at 38°C in a humidified incubator in 5 % CO2 in air for 15 min. Gametes were incubated 5 hours in MDM for fertilization and 18-21 hours in Ham's F-10 medium for culture. 20 % FCS was added to Ham's F-10 medium to evaluate the effects of serum in fertilization. Fertilization was assesed by detection of oocytes cleavage rates. Fertilization were seen in 26 of 36 oocytes with cumulus cells which were incubated in culture medium with FCS and in 22 of 33 oocytes with cumulus cells which were incubated in culture medium without any serum after the culturing period. The fertilization rates were 72,2 % and 66,7 %, respectively (P>0,05). Fertilization were seen in 24 of 35 oocytes without cumulus cells which were incubated in culture medium with FCS and in 21 of 38 oocytes without cumulus cells which were incubated in culture medium without any serum after the culturing period. Fertilization rates were 68,6 % and 55,3 %, respectively (P>0,05). Data were evaluated via Chi- square test. It was concluded that the difference between groups were not statistically significant.
Benzer Tezler
- Tavşan oositlerinin in vitro maturasyonu, fertilizasyonu ve transferi üzerinde çalışmalar
Başlık çevirisi yok
İBRAHİM MURAT ŞEVİKTÜRK
Doktora
Türkçe
1998
Veteriner HekimliğiAnkara ÜniversitesiDoğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ŞÜKRÜ KÜPLÜLÜ
- Tavşan embryolarının kazanılması ve kültüre edilmelerinden sonra transferleri üzerinde araştırmalar
Başlık çevirisi yok
SERHAT PABUÇÇUOĞLU
Doktora
Türkçe
1991
Veteriner Hekimliğiİstanbul ÜniversitesiDoğum ve Reprodüksiyon Hastalıkları (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. İ. KAMURAN İLERİ
- Transgenik tavşan embriyosu üretiminde ıcsı, intrasitoplazmik enjeksiyon ve pronüklear enjeksiyon yöntemlerinin karşılaştırılması
Comparing icsi, intracytoplasmic injection and pronuclear injection methods for production of transgenic rabbit embryos
AYŞE CAN
Doktora
Türkçe
2016
Biyoteknolojiİstanbul ÜniversitesiDölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEMA BİRLER
- Genotip, cinsiyet ve çevre sıcaklığının tavşanlarda yaşama gücü, büyüme, hematolojik değişiklikler ve bazı fizyolojik parametrelere etkileri
The Effect of genotype, sex, environmental temparature on livability, growth and some physiological traits in laboratory rabbits
Ş. NESRİN ONGUN
- Tavşan rasyonlarında ekmek mayası kullanımının besi performansı, sindirilme derecesi ve azot dengesi üzerine etkisi
The Effects of bakers' yeast added to the rabbit rations on fattening performance, digestibility and nitrogen balance
M. NUMAN OĞUZ
Doktora
Türkçe
1997
Veteriner HekimliğiAnkara ÜniversitesiHayvan Besleme ve Beslenme Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. SAKİNE YALÇIN