Geri Dön

İnsan göbek kordon ven endotel hücre kültüründe homosisteinin enzim ekspresyonu üzerine etkisi: eNos ve DDAH

The Effect of homocysteine on enzyme expression in human umbilical vein endothelial cell culture: eNOS and DDAH

  1. Tez No: 148799
  2. Yazar: DUYGU BALKAN ÇEVİK
  3. Danışmanlar: PROF.DR. KAYA EMERK
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2004
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Marmara Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 65

Özet

I ÖZET Homosistein, metiyonin metaboliti olarak bulunan, sülfür taşıyan bir amino asittir. Plazmada birçok formda bulunur: % 70-80 proteine bağlı, % 20-30 disülfid ve çok az bir miktanda serbest ve indirgenmiş halde bulunur. Homosistein ya transsülfürasyon yolu ile sistatiniyonine sonra da sisteine katabolize olur ya da metiyonin haline yeniden metillenir. Homosisteininin metillenmesi, folat ve kobalamin bağımlı bir enzim olan metiyonin sentaz tarafından yapılır. Artmış plazma homosistein seviyeleri miyokard enfarktüsü, felç, demans ve periferik vasküler hastalıklarda bağımsız bir risk faktörü olarak belirtilmiştir. Folik asit, vitamin B6 ve vitamin B12 gibi kofaktörlerin ve sistatiniyon 0- sentaz ve 5,10- metilentetrahidrofolat redüktaz gibi metabolizmasında yer alan değişik enzimlerin eksiklikleri plazma homosistein düzeyinin artmasına yol açmaktadır. Homosistein vasküler fonksiyonu bozarak, aterosklerozda komplikasyon riskini artırır. Hiperhomosisteineminin ateroskleroza yol açma mekanizmalarından bir tanesi de NO (Nitrik Oksit) üzerine etkileridir. Endotelyal NO vazodilatatördür ve anti- trombosit etkileri vardır. Hiperhomosisteinemide endotel bağımlı relaksasyonun bozulmasının NO'nun bioyararlamrmmn azalması sonucunda olduğu söylenmektedir. Biyoyararlanımın azalmasımn nedeninin üretimin azalması, degradasyonun artması ya da nitrozotiyol türevlerinin oluşması olduğu düşünülmektedir. Homosisteinin NO üretimini etkilediği bilinen bir konu olmasına rağmen mekanizması tam olarak anlaşılamamıştır. Bu çalışmada homosisteinin NO sentezini nasıl etkilediği araştırılmıştır. İnsan göbek kordon ven endotel hücre kültürü (HUVEC) yapılmış ve kültür hücreleri değişik homosistein konsantrasyonları (lOuM, 50uM, lOOuM, 500uM velOOOuM) ile inkübe edilmiştir. Daha sonra bu hücrelerden elde edilen RNA'lar cDNA'ya dönüştürülmüştür. Bu cDNA örnekleri eNOS ve dimetilarjinin dimetilaminohidrolaza (DDAH) özgü primerler kullamlarak polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) yöntemi ile çoğaltılmıştır. PZR ürünleri daha sonra agaroz jel elektroforezi ve Kodak jel görüntüleme sistemi ile incelenmiştir. Ayrıca hücre kültürü medyumlarından elektrokemilüminesans yöntemi ile NO analizleri yapılmıştır. Yapılan incelemelerhomosisteinin eNOS ve DDAH'nin gen ekspresyonlan üzerine herhangi bir etkisi olmadığını göstermiştir. NO düzeylerine ise hafif bir baskılayıcı etkisi olduğu görülmüştür. Elde edilen bu veriler homosisteinin NO üzerine etkisinin gen ekspresyonu düzeyinde olmadığım göstermektedir.

Özet (Çeviri)

n. SUMMARY Homocysteine (HCy) is a naturally occuring, sulphur-containing amino acid, that appears in the blood as a metabolite of methionine. HCy is formed in the liver and other tissues as a response to the intake of methionine, which in itself is derived from protein-rich foods. In the plasma: 70-80% of HCy is protein bound, 20-30% is disulfide, and small amount is free i.e. reduced. Homocysteine may either be catabolised in the transsulfuration pathway via cystathionine to cysteine or remetylated back to methionine mainly by the folate and cobalamine dependent enzyme methionine synthase. Elevated plasma homocysteine levels are independent risk factor for myocardial infarction, stroke, alzeimer and peripheral vascular disease. In deficiency of folic acid, vitamin B6, vitamin B12, cystatinione p~ synthase and 5,10-methylenetetrahydrofolatreductase the plasma homocysteine levels are elevated. Hyperhomocysteinemia may alter vascular function in a way that increases risk for complications of atherosclerosis. Hyperhomocysteinemia have effects on the NO modulated pathways. Endothelial NO is a vasodilator and has antitrombolytic effects. Impairment of endothelium-dependent relaxation in hyperhomocysteinemia appears to be mediated in part by decreased bioavailability of endothelium-derived NO, which may be caused either by decreased production or increased degradation of NO or the formation of nitrosothiol derivatives. Expression of eNOS does not appear to be decreased during hyperhomocysteinemia, but production of NO by eNOS may be limited by endogenous inhibitors. It is known that homocysteine effects the NO production but the mechanism is not clear yet. In this study the effect of homocysteine on NO synthesis is analyzed. Primary human umbilical vein endothelial cells are incubated with various homocysteine concentrations (lOuM, 50uM, lOOuM, 500uM, velOOOuM). For 24 hours, mRNA extracted from these is converted to cDNA. Using primers specific for DNA sequences of eNOS and DDAH.These cDNA samples are amplified with polymerase chain reaction. Then the PCR products were run in agarose gel electrophoresis and analyzed with Kodak gel imaging system. In addition to these NO is assayed in the cell culture mediums using electrochemiluminesans method. The results show that homocysteine has no effect on eNOS and DDAH gene exspressions but has a minor depressive effect on NO levels. 8

Benzer Tezler

  1. Tez No

    354022

    İnsan göbek kordon ven endotel hücre kültüründe homosisteinin telomer uzunluğu üzerine etkisi

    Başlık çevirisi yok

    SEÇKİN ÖZGÜR TEKELİ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    BiyokimyaMarmara Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. KAYA EMERK

  2. Tez No

    70575

    17 Beta-estradiolün endotel hücre kültüründe endotelin-1 gen expresyonu üzerindeki etkisi

    17 beta-estradiol moduletse endothelin-1 expression and release from cultured human umblical vein endothelial cells (HUVEC)

    ERKAN TETİK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1998

    Tıbbi BiyolojiMarmara Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYŞE ÖZER

  3. Tez No

    289019

    İnsan umblikal ven endotel hücre kültüründe TNF-? ile oluşturulmuş in vitro greft versus host hastalığı modelinde adrenomedullinin sitoprotektif etkisi

    Cytoprotective effect of adrenomedullin in in vitro graft versus host disease model induced by TNF-?

    FATİH KURNAZ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    HematolojiErciyes Üniversitesi

    İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MUSTAFA ÇETİN

  4. Tez No

    467243

    Investigating the behavior of endothelial cells and monocytes under disturbed flow conditions within a microfluidic system

    Mikroakışkan sistemde düzensiz akış durumunda endotel ve monosit hücre davranışlarının incelenmesi

    RANA FUÇUCUOĞLU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2017

    Bilim ve Teknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYÇA SAYI YAZGAN

  5. Tez No

    722609

    İnsan plasenta ve endotel hücre hatları ile 3b kriyojel ortak kültür sisteminin oluşturulması ve etkinliğinin araştırılması

    Construction of a 3d cryogel co-culture system using human placental and endothelial cell lines and investigating its efficiency

    MERVE DEMİR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYSUN KILIÇ SÜLOĞLU

Geri Dön