Geri Dön

Production of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) protein in recombinant cells

Rekombinant hücrelerde kistik fibroz transmembran iletim düzenleyici (CFTR) proteininin üretimi

PDF İndir

  1. Tez No: 152586
  2. Yazar: DENİZ RENDE
  3. Danışmanlar: PROF.DR. BETÜL KIRDAR
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Kimya Mühendisliği, Chemical Engineering
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2004
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 79

Özet

ÖZET REKOMBİNANT HÜCRELERDE KISTIK FİBROZ TRANSMEMBRAN İLETİM BÜZENLEYİCİ (CFTR) PROTEİNİNİN ÜRETİMİ Rekombinant DNA teknolojisi uygulamalan, tedavi amaçlı proteinlerin büyük ölçekli üretimi ve bu proteinlerin yapılarının ve işlevlerinin belirlenmesinde temel oluşturmaktadır. Epitel hücrelerin apikal membranlarmda klor iyonunun taşınmasını düzenleyen Kistik Fibroz Transmembran İletim Düzenleyici (CFTR) proteini de Kistik Fibroz hastalığının tedavisinde kullanımı sözkonusu olan önemli bir proteindir. Bu çalışmada, CFTR geni, pYES2 plazmid vektörüne klonlandı ve hücre zarının yıkımı pMET-düzenleyici kaseti ile kontrol edilen Saccharomyces cerevisiae AS 102 hücrelerinde ekspresyonu sağlandı. Bu tez çerçevesinde, CFTR geni pBQ6.2 plazmid vektöründen izole edilerek, besiyerine galaktoz eklendiğinde yüksek düzeyde protein ekspresyonu sağlayan, GALİ promotörü altında pYES2 plazmid vektörüne klonlandı. Doğru yönde girmiş CFTR genini taşıyan rekombinant plasmid yapışım içeren iki koloni, restriksiyon enzimi analizi ile saptandı ve bu plazmidlere p57 ve p312 isimleri verildi. Daha sonra, bu iki plasmid, Saccharomyces cerevisiae AS 102 hücrelerine aktarıldı. CFTR proteirıinin sentezi ile CFTR proteinine ait protein bandı, hücre özütlerindeki protein içeriğinin SDS-Poliakrilamid Jel Elektroforezi analizi ile saptandı. pMET-düzenleyici kasetinin ekspresyonunu engelleyen metiyonin besiyerine eklendiği zaman, hücre zarının yıkımınm sağlanması sonucunda proteinlerin besiyerine bırakıldığı, besiyeri proteinlerinin analizlerinde zamana bağlı bir artış olduğunun gözlemlenmesiyîe doğrulandı.

Özet (Çeviri)

IV ABSTRACT PRODUCTION OF CYSTIC FIBROSIS TRANSMEMBRANE CONDUCTANCE REGULATOR (CFTR) PROTEIN IN RECOMBINANT CELLS The application of the recombinant DNA technology is essential for the large scale production of therapeutic proteins and for the elucidation of their structures and function. Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) protein, which regulates the chloride ion transport in the apical membrane of the epithelial cells, is an important protein with a possible therapeutical function. In this study, the CFTR gene was cloned into the pYES2 plasmid vector and expressed in Saccharomyces cerevisiae AS 102 cells, in which cell lysis was controlled by pMET-regulation cassette. Within the framework of this thesis, the CFTR gene was isolated from pBQ6.2 plasmid vector, and was cloned into the pYES2 plasmid vector under the GALİ promoter, which provides high level protein expression in yeast upon addition of galactose into the culture medium. Two colonies harboring the recombinant plasmid construct containing the CFTR gene insert in correct orientation, namely p57 and p312, were identified by the restriction en2yme analysis. These plasmids were then transformed with Saccharomyces cerevisiae AS 102 cells. CFTR protein was found to be expressed and the protein band corresponding to the CFTR protein was observed when the protein content of the cellular extracts was analyzed by SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis. Analysis of medium at different time intervals showed an increase in protein concentrations of medium upon methionine addition, by repression of the expression of pMET-regulation cassette, thus confirmed the release of proteins into the culture medium as a result of induced lysis.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    129359

    Expression of recombinant CFTR protein by using two different expression systems

    İki farklı ekspresyon sistemi kullanarak rekombinant CFTR proteininin ekspresyonu

    NESLİHAN GÜNEL

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2002

    KimyaBoğaziçi Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. KUTLU ÜLGEN

    PROF. DR. BETÜL KIRDAR

  2. Tez No

    91536

    Konjenital Bilateral Vas Deferens Aplazi (CBAVD)'li hastalarda kistik fibröz (CF) genindeki nokta mutasyonlarının araştırılması: CBAVD, CF ilişkisi

    Researching of the cystic fibrosis (CP) gene mutations in patients with Congenital Bilateral Absnece of the Vas Deferens: CF, CBAVD relationazi (CBAVD)

    SEMİRE UZUN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2000

    Biyofizikİstanbul Üniversitesi

    Biyofizik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SİNA GÖKÇE

  3. Tez No

    764794

    Kistik fibrozisli hastalarda TH17 ilişkili sitokinlerin moleküler analizi

    Molecular analysis of TH17 related cytokines in patients with cystic fibrosis

    TUĞBA NUR GÜR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Tıbbi BiyolojiErciyes Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HALİT CANATAN

  4. Tez No

    493258

    Kistik fibrozis hastalarında nötrofil fonksiyonları ve sitokin düzeylerinin araştırılması

    Determinetion of neutrophil functions and cytokine levels in patients with cyctic fibrosis

    ÜMİT ASLANHAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    Allerji ve İmmünolojiİstanbul Üniversitesi

    İmmünoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ESİN ÇETİN

  5. Tez No

    807233

    Pichia pastoris'te rekombinant insan dornaz alfa üretimi

    Production of recombinant human dornase alfa in Pichia pastoris

    AYÇA URAS

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyomühendislikAkdeniz Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET İNAN

Geri Dön