Expression of recombinant CFTR protein by using two different expression systems
İki farklı ekspresyon sistemi kullanarak rekombinant CFTR proteininin ekspresyonu
- Tez No: 129359
- Danışmanlar: DOÇ. DR. KUTLU ÜLGEN, PROF. DR. BETÜL KIRDAR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: CFTR, Ekspresyon, Genler, CFTR, Expression, Genes
- Yıl: 2002
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
ÖZET IKI FARKLI EKSPRESYON SİSTEMİ KULLANARAK REKOMBİNANT CFTR PROTEİNİNİN EKSPRESYONU Kistik fibroz transmembran iletim düzenleyici (CFTR) proteininin üretimi, CFTR proteininin direk olarak uygulanması için gereklidir. Bu terapi yönteminin kistik fibroz hastalarında, mutasyona uğramış CFTR geni taşıyan hücrelerde klor iyonu akışını düzenlediği saptanmıştır. Bu çalışmada, CFTR proteininin ekspres edilmesi amacıyla, pUCl 8 ve pET28a+ plasmid vektörleri, CFTR geninin klonlanması ve daha sonra bu genin kodladığı proteinin E.coli hücrelerinde üretilmesi için kullanılmıştır. Çalışmanın ilk bölümünde Dr. J. Rommens tarafından gönderilen rekombinant pBQ6.2 plasmid vektöründen isole edilen CFTR geni, pUC18 plasmid vektörüne klonlandı. CFTR geninin doğru yönde klonlandığı iki rekombinant plasmid vektör elde edildi ve bu rekombinantlar sırasıyla NGCF1809 ve NGCF1810 olarak adlandırıldı. Bu recombinant plasmidler, CFTR proteini üretimi için, E.coli TBI hücrelerine transfer edildi. SDS-PAGE analizi sonucunda, moleküler ağırlığı 170 kDa olan CFTR proteinine karşılık gelen bir bant görülemedi ve bu durumun klonlanan genin sızan ekspresyonundan kaynaklanabileceği sonucuna varıldı. Çalışmanın ikinci bölümünde, CFTR geni, pET28+a plasmid vektörüne klonlandı. Düzgün bir şekilde klonlanmış genin olduğu recombinant plasmid, NGCF2877 olarak adlandırıldı ve daha yüksek seviyede CFTR proteini ekspresyonu için, lacUV5 promotörünün kontrolü altında, kromozomunda T7 RNA Polimeraz geninin bir kopyasına sahip E.coli BL21(DE3) hücrelerine transfer edildi. SDS- PAGE analizinden sonra CFTR proteinine ait bant elde edildi ve bu rekombinant plasmidin, (NGCF2877), E.coli BL21(DE3) hücrelerinde CFTR proteinini ekspres ettiği gözlendi.
Özet (Çeviri)
IV ABSTRACT EXPRESSION OF RECOMBINANT CFTR PROTEIN BY USING TWO DIFFERENT EXPRESSION SYSTEMS Production of CFTR (cystic fibrosis transmembrane conductance regulator) protein is essential for the direct administration of this protein. This treatment was found to correct chloride ion flow in cells carrying a mutant CFTR gene in CF patients as an effective kind of therapy. In order to express the CFTR protein, in this study, two kinds of plasmid vectors that are pUC18 and pET28a+ plasmids, were used to clone the CFTR gene and to produce CFTR protein that is encoded by this gene, in E.coli cells. In the first part of the study, CFTR gene, isolated from the recombinant pBQ6.2 plasmid vector that was kindly provided by Dr. J. Rommens (Department of Molecular and Medical Genetics, The Hospital for Sick Children), was cloned into the pUC18 plasmid vector. Two recombinant plasmid vectors in which the CFTR gene was cloned in correct orientation, were obtained and they were named as NGCF1809 and NGCF1810, respectively. In order to produce the CFTR protein, these recombinant plasmids were transformed with the E.coli TBI cells. At the end of the SDS-PAGE analysis, no band was observed corresponding to the CFTR protein of molecular weight of 170 kDa and this result was attributed to the leaky expression of the cloned gene. In the second part of the study, CFTR gene was cloned into the pET28a+ plasmid vector. The recombinant construction having the proper cloned gene was named as NGCF2877 and transformed with the E.coli BL21(DE3) cells containing a single copy of the T7 RNA Polymerase gene in its chromosome under the control of the lacUV5 promoter in order to obtain a higher level of expression of the CFTR protein. After SDS-PAGE analysis, a band corresponding to the CFTR protein was obtained indicating that this recombinant plasmid, NGCF28^7, expressed the CFTR protein in E.coli BL21(DE3) cells.
Benzer Tezler
- Production of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) protein in recombinant cells
Rekombinant hücrelerde kistik fibroz transmembran iletim düzenleyici (CFTR) proteininin üretimi
DENİZ RENDE
- Expression of recombinant acid protease (thermopsin) gene from thermoplasma volcanium
Thermoplasma volcanium rekombinant asit proteaz (termopsin) geninin ekspresyonu
BİLSEV KOYUNCU
- Expression of recombinant Puumala virus endonuclease in a bacterial expression system and virtual screening for possible small molecule inhibitors
Rekombinant Puumala hantavirüs endonükleazın bakteri ekpresyon sisteminde ifadesi ve olası küçük molekül inhibitörler için sanal tarama
NAZIM MEDZHIDOV
- Expression and purification of recombinant MPT64 protein in escherichia coli for skin test
Deri testi için escherichia coli bakterisinde recombinant MPT64 proteininin ifadesi ve saflaştırılması
ECE AKSOY
Yüksek Lisans
İngilizce
2021
Acıbadem Mehmet Ali Aydınlar ÜniversitesiMedikal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Yükleniyor...
- Optimization of the recombinant PD-1 protein expression in transiently transfected mammalian cell lines
Geçici olarak transfekte edilmiş memeli hücre hattında PD-1 proteini rekombinant ifadesi optimizasyonu
VELİCAN ENGİN GAYIR