Geri Dön

Investigation of cloning strategies for A.thaliana G protein α-subunit gene in Pichia pastoris

A.thaliana G-proteini α-alt birimi geninin pichia pastoris'de klonlama yöntemlerinin incelenmesi

PDF İndir

  1. Tez No: 152830
  2. Yazar: BURCU KAPLAN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. ZEHRA SAYERS
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2004
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Sabancı Üniversitesi
  10. Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Bu tezde A. thaliana heterotrimerik G-proteini a alt birimi geninin klonlanması ve ifadesi için yapılan çalışmalar sunulmuştur. Bu amaç doğrultusunda bol miktarda ve yüksek saflıkta rekombinant protein üretimi için uygun bir ökaryotik ifade hücresi seçilmiştir. Polimeraz zincir reaksiyonu sonucu elde edilen GPAl'nın Pichia Pastoris ifade vektörlerine takılmasıyla iki değişik plazmit pPICZC+GPAl ve pPICZaB+GPAl ' oluşturulmuştur. pPICZC+GPAl hücre içi ifade için tasarlanmıştır, öte yandan pPICZaB+GPAl' ise ifade edilen proteine eklenen sinyal dizisi aracılığıyla proteinin hücrenin dışına salgılanmasını sağlamaktadır. Değişik türdeki maya hücrelerinin kullanılmasıyla ifadeyi optimize etme imkanları üzerinde çalışılmıştır. Rekombinant GPAİ pPICZC+GPAl plazmiti ve GS115 hücrelerinin kullanılması sonucu sentezlenmiş ve protein ifadesi maya büyüme eğrileri ve western blot analizleri ile gözlenmiştir. Bu çalışma A. thaliana GPAİ geninin bir ökaryotik hücrede ifadesini gösteren ilk çalışmadır. Saflaştınlmış rekombinant GPAİ biyokimyasal incelemeleri, memeli sistemlerden eş değer proteinler ile karşılaştırmaları ve yapı analizlerini mümkün kılacaktır.

Özet (Çeviri)

In this thesis a strategy was developed to clone and express the gene of the A. thaliana heterotrimeric G-protein a subunit (GPA1). For this purpose an appropriate eukaryotic expression system was chosen to produce large quantities of high purity recombinant protein. GPA1 was amplified by PCR and cloned using a Pichia pastoris expression system. Two different plasmids pPICZC+GP^i and pPICZaB+GP^i ' were constructed. pPICZC+G/Mi was designed for intracellular expression whereas pPICZaB+GP/47 ' contained a signal peptide facilitating secretion of the recombinant protein into the extracellular medium. The possibility of using different yeast strains that may improve expression was explored. Recombinant synthesis of GPA1 was achieved with the pPICZC+GiMi construct using the strain GS1 15, which shows Mut+ phenotype. Expression was followed by monitoring growth of yeast as well as western blots of cellular extracts at different time points during induction. This study describes the first report of expression of A. thaliana GPA1 gene in a eukaryotic system and constitutes a critical step forward in studies of G-proteins in plants. It follows to reason that the availability of purified recombinant GPA1 will enable biochemical characterization, comparison with its mammalian counterparts and facilitate structural studies.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    390833

    Koyunlarda haemonchus contortus'un moleküler karakterizasyonu ve benzimidazol dirençliliğinin moleküler olarak araştırılması

    Molecular characterization of haemonchus contortus in sheep and molecular investigation of benzimidazole resistance

    ZUHAL ÖNDER

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    Veteriner HekimliğiErciyes Üniversitesi

    Veterinerlik Parazitolojisi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ALPARSLAN YILDIRIM

  2. Tez No

    714846

    Bio-immunoinformatik yaklaşımlarla in silico olarak leishmaniasis'e karşı çok peptitli aġı adayının tasarlanması ve immun simülasyon yöntemiyle etkinliğinin değerlendirilmesi

    In silico design of multi-peptide vaccine candidate against leishmaniasis using BİO-immunoinformatic approaches and investigation of its effect by immune simulation methods

    ARZUV CHARYYEVA

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    ParazitolojiErciyes Üniversitesi

    Parazitoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. Alparslan YILDIRIM

  3. Tez No

    970838

    Rekombinant faj tail proteinlerinin bakterilere adezyonundaki rollerinin araştırılması

    Investigation of the role of recombinant phage tail proteins in adhesions to bacteria

    ABDULKERİM KARAYNİR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2025

    Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik MikrobiyolojiAydın Adnan Menderes Üniversitesi

    Moleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BÜLENT BOZDOĞAN

  4. Tez No

    829153

    Zymomonas mobilis levansukraz geninin Lactococcus Lactis konakçısına klonlama çalışmaları

    Cloning strategies of Zymomonas mobilis levansucrase gene into Lactococcus lactis expresson host

    İREM YAPANMIŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Gıda MühendisliğiEge Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BURCU KAPLAN TÜRKÖZ

  5. Tez No

    1018479

    A numerical investigation of valve timing and variable compression ratio (vcr) strategies in a stroke volume modulated (svm) spark ignition (si) engine

    Değişken strok hacmine sahip buji ateşlemeli motorda subap zamanlaması ve değişken sıkıştırma oranı yöntemlerinin sayısal olarak incelenmesi

    AHMET YAPMAZ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2026

    Otomotiv Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Makine Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ BARIŞ DOĞRU

Geri Dön