Dye affinity hollow fibers for protein purification
Protein saflaştırılması için boya afinite hollow fiberler
- Tez No: 155353
- Danışmanlar: PROF.DR. ADİL DENİZLİ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Albümin, Boya Afinite Kromatografisi, Reactive Gren HE-4BD, Hollow Fiber, Albumin, Dye Affinity Chromatography, Reactive Green HE- 4BD, Hollow Fiber
- Yıl: 2004
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 110
Özet
PROTEİN SAFLAŞTIRILMASI İÇİN BOYA AFİNİTE HOLLOW FİBERLER M. Soner Bay ÖZ Boya iigandlar, spesifik afinite kromatografisi için doğal benzerlerine önemli alternatifler olarak göz önünde bulundurulur. Boya İigandlar bazı durumlarda oldukça spesifik bir şekilde, çoğu proteini bağlama yeteneğine sahiptirler. Ticari olarak mevcutturlar, ucuzdurlar ve özellikle hidroksil grubu taşıyan matrislere kolaylıkla immobilize edilebilirler. Boyalar doğalarında sentetik olmalarına rağmen, hala affinite ligandı olarak sınıflandırılırlar, çünkü onlar substratların, kofaktörlerin ya da proteinlerin bağlanma ajanlarının yapısını taklit ederek pek çok proteinin aktif bölgeleriyle etkileşirler. Reaktif boyalar olarak bilinen bir kısım tekstil boyası protein saflaştırılması için kullanılmıştır. Bu reaktif boyaların çoğu, reaktif gruba bağlanmış (sıklıkla mono- ya da diklorotriazin halkası) bir kromofor (ya azo boyaları, antrakinon ya da ftalosiyanin) dan oluşur. Boya İigandlar ile protein arasındaki etkileşim, elektrostatik, hidrofobik ve hidrojen bağı kombinasyonu olabilir. Bu çalışmada, sulu çözeltisinden ve plazmadan albümin saflaştırmak amacıyla Reactive Green HE-4BD boyalı poli amid hollow fiberler hazırlanmıştır. Fiberler SEM, şişme deneyleri, FTIR ve elemental analiz ile karakterize edilmiştir. Reactive Green HE- 4BD boyalı hollow fiberlere albümin adsorpsiyonu farklı miktarlarda insan serum albümin içeren çözeltilerde farklı pH, tampon sistemleri, sıcaklık ve iyonik şiddetlerde incelenmiştir. Sonraki basamakta ise insan plazmasından albümin saflaştırı İmaya çalışılmıştır. Elde edilen önemli sonuçlar aşağıda özetlenmiştir: Reactive Green HE-4BD boyalı hollow fiberlerin şişme oranı %36' dır. Non-spesifik albümin adsorpsiyonu 6.0 mg/g ile ihmal edilebilecek düzeydedir. Maksimum adsorpsiyon (49.7 mg/g) pH 5.0 seviyesinde gözlenmiştir. Adsorpsiyon kapasitesiortamın artan iyonik şiddeti ile azalmıştır. Tüm sıcaklık değerlerinde non spesifik adsorpsiyon ihmal edilecek düzeyde gerçekleşmiştir, maksimum non spesifik albumin adsorpsiyonu 6.1 mg/g olarak ölçülmüştür ve artan sıcaklıkla adsorpsiyon azalmıştır. Desorpsiyon için farklı miktarlarda albümin içeren çözeltiler 0.5 M NaSCN içeren 0.05' lik Tris/HCI tamponu ya da 1.0 M NaCI içeren elüsyon ortamında 60 dakikada izlenmiştir. Poliamid hollow fiberlerin adsorpsiyon kapasiteleri 10 kez tekrarlanan adsorpsiyon-desorpsiyon çalışmaları boyunca önemli ölçüde değişmemiştir, insan plazmasından albümin adsorpsiyon çalışmaları gerçekleştirilmiş ve adsorpsiyon kapasitesinin sulu çözeltilere göre 2.3 kat arttığı gözlenmiştir. Elde edilen çalışmalar ilgili literatür ile karşılaştırılmış ve bu alan da en çok kullanılan boya olan Cibacron Blue F3G-A immobilize edilmiş poli amid hollow fiberlerin daha yüksek albümin adsorpsiyon kapasiteleri sergileyeceği düşünülmüştür.
Özet (Çeviri)
Ill DYE AFFINITY HOLLOW FIBERS FOR PROTEIN PURIFICATION M. Soner Bay ABSRACT Dye-ligands have been considered as one of the important alternatives to natural counterparts for specific affinity chromatography. Dye-ligands are able to bind most types of proteins, in some cases in a remarkably specific manner. They are commercially available, inexpensive, and can easily be immobilized, especially on matrices bearing hydroxyl groups. Although dyes are all synthetic in nature, they are still classified as affinity ligands because they interact with the active sites of many proteins mimicking the structure of the substrates, cofactors, or binding agents for those proteins. A number of textile dyes, known as reactive dyes, have been used for protein purification. Most of these reactive dyes consist of a chromophore (azo dyes, anthraquinone, or phathalocyanine), linked to a reactive group (often a mono- or dichlorotriazine ring). The interaction between the dye ligand and proteins can be by complex combination of electrostatic, hydrophobic, hydrogen bonding. In this study, Reactive Green HE-4BD attached poly amide hollow fibers for albumin adsorption from both its aqueous solutions and human plasma were prepared. Reactive Green HE-4BD attached poly amide hollow fibers were characterized by SEM, swelling studies, FTIR and elemental analysis. Albumin adsorption onto Reactive Green HE-4BD attached poly amide hollow fibers was studied in different HSA containing solutions with different pH, buffers, temperature and ionic strengths. In the next step, albumin was tried to be purified from human plasma. Important results obtained in this study were summarized as follows: Water uptake ratio of Reactive Green HE-4BD hollow fibers is % 36. The non-specific albumin adsorption is negligible with the maximum value which was 6.0 mg/g. Maximum albumin adsorption (49.7 mg/g) was achieved at pH 5.0.IV Adsorption capacities of Reactive Green HE-4BD hollow fibers were decreased with the increasing ionic strength. At all temperatures non specific adsorption of albumin was very low and maximum non-specific albumin adsorption value was 6.1 mg/g. Adsorption capacities of Reactive Green HE-4BD hollow fibers are decreased with the increasing temperature. Hollow fiber membranes carrying different amounts of albumin were placed in an elution medium containing 0.05 Tris/HCI buffer 0.5 M NaSCN or 1.0 M NaCI, (pH 8.0) and the amount of albumin released in 60 min was determined. Adsorption capacities for polyamide hollow-fiber membranes did not change noticeable during the ten repeated adsorption-desorption operations. Adsorption of HSA onto the Reactive Green HE-4BD-attached hollow-fiber membranes was approximately 2.3 fold higher than those obtained in the studies in which aqueous solutions were used. Different dye- affinity sorbents with different adsorption capacities were reported in literature for albumin adsorption. The most frequently used dye is Cibacron Blue F3G-A and according to the related literature and results of this study, Cibacron Blue F3G-A-attached polyamide hollow-fiber membranes exhibit higher human serum albumin adsorption capacities.
Benzer Tezler
- Dye affinity hollow fibers for interferon separation
İnterferon ayrılması için boya afinite hollow fiberler
ELİF ERKAN
- Manyetik silika partiküllerle manyetik alan varlığında boya afinite temelli albümin saflaştırılması
Dye-affinity based albumin purification with magnetic silica particles under magnetic field
NURHAK TATAR
Doktora
Türkçe
2020
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiNanoteknoloji ve Nanotıp Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HANDAN YAVUZ ALAGÖZ
- Removal of phenols from waste waters via dye affinity sorption
Fenollerin boya afinite adsorbsiyonu aracılığıyla atık sulardan uzaklaştırılması
ENGİN BAYRAM
- Boya takılı manyetik poli(hidroksietil-metakrilat) nanoküreler ile kandan albümin azaltılması
Dye-attached magnetic poly(hydroxyethyl-methacrylate) based nanospheres for albumin depletion out of human plasma
ÖZNUR SAKA
- Development and characterization of pre-treatment process to enhance dye affinity and corrosion resistance for metal surfaces
Metal yüzeyler için korozyon direnci ve boyanabilme özelliklerini iyileştirecek bir ön işlem sürecinin geliştirilmesi ve karakterizasyonu
BUKET SEVİL
Yüksek Lisans
İngilizce
2020
Kimya MühendisliğiEge ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ NİLAY GİZLİ