Laktoz ve galaktoz tayinlerine yönelik β-galaktozidaz-glukoz oksidaz hibrit biyosensörleri ve galaktoz oksidaz biyosensörlerinin geliştirilmesi
Developing a β-galactosidase-glucose oxidase hybride biosensor for lactose determination and a galactose oxidase bionsensor for galactose determination
- Tez No: 169418
- Danışmanlar: PROF.DR. ERHAN DİNÇKAYA
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Galaktoz biyosensörü, laktoz biyosensörü, enzim elektrodlan, galaktoz oksidaz, P-galaktozidaz, glukoz oksidaz, hibrit biyosensörler, Galactose biosensor, lactose biosensor, enzyme electrodes, galactose oxidase, p-galactosidase, glucose oxidase, hybride biosensors
- Yıl: 2005
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 108
Özet
ÖZET LAKTOZ VE GALAKTOZ TAYİNLERİNE YÖNELİK P-GALAKTOZİDAZ- GLUKOZ OKSİDAZ HİBRİT BİYOSENSÖRLERİ VE GALAKTOZ OKSİDAZ BİYOSENSÖRLERİNİN GELİŞTİRİLMESİ GOKTUG, Tüge Yüksek Lisans Tezi, Biyokimya Anabilim Dalı Tez yöneticisi: Prof.Dr.Erhan DİNÇKAYA Şubat 2005, 87 sayfa Bu tezde, galaktoz tayinine yönelik olarak galaktoz oksidaz ve laktoz tayinine yönelik olarak P-galaktozidaz-glukoz oksidaz temelli biyosensörler geliştirildi. Her iki biyosensör için belirtilen enzimler immobilizasyon materyali jelatin ile karıştırılarak elde edilen enzim- jelatin karışımları çözünmüş oksijen probu yüzeyine yayıldı ve glutaraldehit ile çapraz bağlandı. Ölçümlerin temel prensibi, enzimatik reaksiyonlar uyarınca galaktoz ve laktoz konsantrasyonlarıyla orantılı olarak tüketilen oksijen miktarlarının belirlenmesidir. Bu prensipten yola çıkarak tüketilen oksijen miktarlarındaki azalmanın galaktoz ve laktoz konsantrasyonlarıyla doğru orantılı olarak değiştiği standart grafikler yardımıyla sonuçlara ulaşılmıştır. Hazırlanan biyosensörler için öncelikle biyoaktif tabaka bileşenlerinin optimizasyonları gerçekleştirildi. Optimizasyon çalışmaları sonucunda galaktoz oksidaz biyosensörü için en uygunVI enzim miktarı, jelatin miktarı ve glutaraldehit yüzdesi sırasıyla; 8,4 U/cm2, 14,18 mg jelatin/ cm2 ve % 2,5, P-galaktozidaz-glukoz oksidaz hibrit biyosensörü için ise sırasıyla 3,33 U/ cm2 fJ-galaktozidaz-7,58 U/ cm glukoz oksidaz, 7,08 mg jelatin/ cm ve % 2,5 olduğu saptandı. Çalışma koşullarının optimizasyonu çalışmaları sonucunda galaktoz oksidaz biyosensörü için çalışma tamponunun 0,5 mM K3Fe(CN)ö içeren pH: 7,0, 50 mM'lık fosfat tamponu olmasına ve ölçümlerin 37 °C sıcaklıkta gerçekleştirilmesine, P-galaktozidaz-glukoz oksidaz hibrit biyosensörü için ise çalışma tamponunun pH 6,0, 50 mM fosfat tamponu olmasına ve ölçümlerin 35 °C sıcaklıkta gerçekleştirilmesine karar verildi. Hazırlanan biyosensörlerin karakterizasyon çalışmalarında, galaktoz oksidaz biyosensörü ile galaktoz için 0,25-6,0 mM konsantrasyon aralığında, P-galaktozidaz-glukoz oksidaz hibrit biyosensörü ile laktoz için 0,05-3,5 mM konsantrasyon aralığında doğrusal sonuçlar alınabildiği belirlendi. Geliştirilen biyosensörlerin tekrarlanabilirliğine yönelik yapılan çalışmalarda; galaktoz oksidaz biyosensörü için 3,0 mM galaktoz standardı (n=6) ile ortalama değer (x) 3,28 mM, standart sapma (SS) ±0,064 ve varyasyon katsayısı (VK) % 1,95, P-galaktozidaz-glukoz oksidaz hibrit biyosensörü için ise 0,5mM laktoz standardı (n=13) ile ortalama değer (x) 0,506 mM, standart sapma (SS) ±0,014 ve varyasyon katsayısı (VK) % 2,76 olarak bulundu. Ayrıca biyosensörlerin substrat spesifiklikleri, operasyonel kararlılıkları, depo kararlılıkları gibi parametreleri belirlendi. Farklı süt örneklerinde laktoz, galaktoz tayinleri ve analitik parametreler belirlendi.
Özet (Çeviri)
vn ABSTRACT DEVELOPING A |3-GALACTOSIDASE-GLUCOSE OXIDASE HYBRIDE BIOSENSOR FOR LACTOSE DETERMINATION AND A GALCTOSE OXIDASE BIOSENSOR FOR GALACTOSE DETERMINATION GÖKTU?, Tüge Master of Science Thesis, Biochemistry Department Supervisor: Prof.Dr Erhan DİNÇKAYA February, 2005, 87 pages In this thesis, an amperometric biosensor based on galactose oxidase for galactose determination and a P-galactosidase-glucose oxidase hybride biosensor for lactose determination were developed. For both biosensors enzymes mixed with immobilisation material gelatin and crosslinked with glutaraldehyde after fixed on pretreated teflon membrane. The principle of the measurements based on the determination of consumed oxygen level by the activity of enzymes and decrease in the consumed oxygen level related to galactose and lactose concentration injected in the cell. Determinations were carried out by standart curves which were obtained by the measurements of decrease in the consumed oxygen level related to galactose and lactose concentrations. Firstly, the optimum concentrations of the bioactive layer components were established for both biosensors. In the optimizationvm studies the most suitable enzyme, gelatine amounts and glutaraldehyde ratio were determined as 8.4 U/cm2, 14.18 mg gelatine/ cm2 ve 2.5% for galactose oxidase biosensor and 3.33 U/ cm2 |3-galaktosidase-7.58 U/ cm2 glucose oxidase, 7.08 mg gelatine/ cm2 ve 2.5% for p- galactosidase-glucose oxidase hybride biosensor respectively. For galactose oxidase biosensor pH 7.0, 50 mM phosphate buffer containing 0.5 mM K3Fe(CN)ö and 37 °C, for P-galactosidase-glucose oxidase biosensor pH 6.0, 50 mM phosphate buffer and 35 °C were established as providing the optimum working conditions. In the characterization studies, a linearity in the galactose concentration range 0.25-6.0 mM was obtained with galactose oxidase biosensor and a linearity in the lactose concentration range 0.05-3.5 mM was obtained with P- galactosidase-glucose oxidase biosensor. The repeatability studies (n=6) revealed that for 3.0 mM galactose, the avarege value (x) was 3.28 mM, standard deviation (SD) was ±0,064 and variation coefficient (CV) was 1.95% for galactose oxidase biosensor and the repeatability studies (n=13) revealed that for 0.5 mM lactose, the avarege value (x) was 0.506 mM, standard deviation (SD) was ±0.014 and variation coefficient (CV) was 2.76 % for P-galactosidase-glucose oxidase biosensor. Besides, substrate specification, operational and storage stability of both biosensors were investigated. In addition, lactose and galactose concentrations of different milk samples and analytical parameters were determined.
Benzer Tezler
- Laktoz ve galaktoz intoleranslı bireylerin tüketimine yönelik fermente süt ürünlerinin geliştirilmesi ve kalite özelliklerinin belirlenmesi
Developing fermented dairy products with low galactose content for patients with galactosemia & lactose intolerance and determination of quality characteristics
İLYAS ERDEM TONGUÇ
Doktora
Türkçe
2012
Gıda MühendisliğiEge ÜniversitesiSüt Teknolojisi Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. CEM KARAGÖZLÜ
- Kefir danesine özgü bazı bakterilerden ve daneden üretilen ürünlerin aroma bileşenlerinin belirlenmesi
Determination of aroma components in products obtained from some unique bacteria of isolated kefir grain and kefir grain
FATMA ECEMNUR DURAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Gıda MühendisliğiSüleyman Demirel ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. TUĞBA KÖK TAŞ
- Bacillus cereus KG5' in proteaz enzimi üzerine çalışmalar
Studies on the protease enzyme in Bacillus cereus KG5
NAZENİN AHMETOĞLU
- Functionalized magnetic nanoparticles
İşlevselleştirilmiş manyetik nanoparçacıklar
AYŞE DEMİR KORKMAZ
Doktora
İngilizce
2015
KimyaFatih ÜniversitesiKimya Bölümü
PROF. DR. ABDULHADİ BAYKAL
DOÇ. DR. HÜSEYİN KAVAS
- β-galactosıdase enziminin kabak lifi ve pirinç kabuğuna immobilizasyonunun optimizasyonu: Laktoz hidrolizinin incelenmesi
Optimization studies on the immobilization of β-galactosidase enzyme onto loofa sponge and rice husk: Application for lactose hydrolysis
FATMA BETÜL AKGÜL TANER
Doktora
Türkçe
2021
BiyoteknolojiYıldız Teknik ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BELMA ÖZBEK