Geri Dön

Partial purification and characterization of arylamine N-acetyltransferases from human breast tumor tissues

İnsan meme tümörü dokularından arilamin N-asetiltransferazlar'ın kısmi saflaştırılması ve karakterizasyonu

  1. Tez No: 172317
  2. Yazar: YAŞASIN SENEM SU
  3. Danışmanlar: PROF.DR. TÜLİN GÜRAY
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: N-asetiltransferazlar, Meme Kanseri, Polimorfizm, Saflaştırma, Western Blot, İzoelektrik Fokuslama, N-acetyltransferases, Breast Cancer, Polymorphism, Purification, Western Blotting, Isoelectrofocusing
  7. Yıl: 2006
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 138

Özet

oz İNSAN MEME TUMORU DOKULARINDAN ARİLAMİN N-ASETİLTRANSFERAZLAR'IN KISMİ SAFLAŞTIRILMASI VE KARAKTERİZASYONU Su, Yaşasın Senem Doktora, Biyokimya Bölümü Danışman: Prof. Dr. Tülin Güray Ocak 2006, 122 Sayfa Arilamin N-asetiltransferazlar (NATlar) insanda kanserli meme dokusundan, DEAE-selülöz iyon-değişim kolon kromatografisiyle birbirinden bağımsız izoformlar halinde kısmi olarak saflaştınlmıştır. p-Aminobenzoik asid'e (PABA) karşı aktivite gösteren NAT, insan tümörlü meme dokusundan % 77 verim ve 5-kat saflaştırma faktörü ile saflaştınlmıştır. Sulfametazin'e (SMZ) karşı aktivite gösteren NAT, insan tümörlü meme dokusundan % 21 verim ve 3-kat saflaştırma faktörü ile saflaştınlmıştır. İnsan tümörlü meme dokusundan saflaştınlmış NAT1 izoziminin molekül ağırlığı yaklaşık olarak 27600 ve izoelektrik noktasının da 4.8 civarında olduğu SDS-PAGE, IEF ve Western Blot analizleri ile gösterilmiştir. İmmunohistokimyasal analiz sonucunda, NAT 1' in boyanma miktannın meme küçültme ameliyatlanndan alınan örneklerde az, tümörlü meme dokusunda fazla olduğu gözlenmiştir. PABA ve SMZ'nin sitozolik NATlar ile in vitro konjugasyonlan 30 hastadan alınan tümörlü meme ve aynı hastalardan alınan normal dokularda incelendi. Kontrol meme dokulannda PABA ve SMZ substratum karşı NAT özgül aktivitesi sırasıyla, 13±2 ve 12±2 pmole/dak/mg protein olarak, kanserli dokularda ise 20±3 ve 34±6 pmole/dak/mg protein olarak saptandı. Wilcoxon testi, kontrol ve tümör gruplanndaki NAT1 ve NAT2 aktiviteleri arasındaki farkın istatistiksel olarak anlamlı olduğunu göstermiştir. Üç hastanın (3/30, % 10) tümörlü ve normal meme dokusunda NAT1 aktivitesi tespit edilememiştir. Kontrol dokulannın % 77 'sinde, tümörlü meme dokularının ise % 91 'inde NAT2 aktivitesi ölçülebilmiştir. Kemoterapi tedavisinin, ortalama NAT1 ve NAT2 aktivitelerini düşük miktarda inhibe ettiği gözlenmiştir. Östrojen reseptör statüsünün ortalama NAT1 aktivitesi ile muhtemel, negatif ve NAT2 aktivitesi ile de pozitif ilişkisi olduğu gösterilmiştir. Tümörün derecesi, NAT1 ile pozitif şekilde ilişkilendirilmiş fakat NAT2 ile böyle birbağlantı bulunamamıştır. Hastaların menopozal durumlarının NAT2 aktivitesi üzerinde önemli bir etkisi olduğu öne sürülmüştür. On meme kanserli hastada yapılan genotip değerlendirmesinde NAT 1*4 ve NAT2*5A 'nın en sık rastlanan aleller olduğu görülmüştür. NAT1*11 aidine postmenopozal kadınlarda daha fazla rastlanmıştır. Hızlı olduğu düşünülen NAT1 genotiplerinin, kontrol ve tümörlü meme dokularındaki ortalama NAT1 aktivitelerinin, normal NAT1 genotiplerindekine gore daha düşük olduğu saptanmıştır. NAT2 yavaş asetilatör grubundaki tümör NAT2 ortalama aktivitesinin kontrole gore daha yüksek olduğu istatistiksel olarak gösterilmiştir.

Özet (Çeviri)

ABSTRACT PARTIAL PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF ARYLAMTNE N-ACETYLTRANSFERASES FROM HUMAN BREAST TUMOR TISSUES Su, Yaşasın Senem Ph.D., Department of Biochemistry Supervisor: Prof. Dr. Tülin Güray January 2006, 122 pages Arylamine N-acetyltransferases (NATs) were partially purified from human breast tumor tissues with complete separation of the isoforms in DEAE-Cellulose ion-exchange step. NAT with activity towards p-aminobenzoic acid (PABA) was isolated and purified from human breast tumor with 77 % yield and a purification factor of 5-fold. NAT with activity towards sulfamethazine (SMZ) was isolated and purified from human breast tumor with 21 % yield and a purification factor of 3-fold. Further purification attempts by Blue Sepharose affinity column chromatography resulted in the complete loss of both enzyme activities. The NAT1 purified from human breast tumor tissues had a molecular weight (Mr) value of about 27600 and an isoelectric point (pi) around 4.8, as confirmed by SDS-PAGE, JEF and Western blotting analysis. With immunohistochemical analysis, level of intensity of NAT1 immunostaining was observed to be going from weak in reduction mammoplasty samples to strongest in malignant breast tissue. The interindividual variation in the conjugation of p-aminobenzoic acid (PABA) and of sulfamethazine (SMZ) by cytosolic arylamine N-acetyltransferases (NATs) were investigated in 30 human breast tumor and matched samples. The average specific activity against PABA was calculated as 13±2 pmole/min/mg protein for breast control NATs, and 20+3 pmole/min/mg protein for breast tumor NATs. The average specific activity against SMZ was calculated as 12+2 pmole/min/mg protein for breast control NATs, and 34±6 pmole/min/mg protein for breast tumor NATs. Wilcoxon test revealed that the difference between the control and tumor groups is statistically significant with respect to the NAT1 activities as well as NAT2 activities. In three (3/30, 10%) patients tumor and tumor-free breast tissue NAT1 activity was not detectable. Among control tissues, the percentage of measurable NAT2 activity was 77% (23/30), while in tumor tissues it increased to 91%. Chemotherapy treatment was observed to have a slight inhibitory effect on mean NAT1 and NAT2 activities. There was an indication of a possible negative association with mean NAT1 activity and estrogen receptor status, while mean tumor NAT2 activity was observed to increase among estrogen receptor positive patients.Grade of malignancy seems to be positively associated with NAT1, but no such association could be suggested for NAT2 enzyme. Menopausal state of the patient was suggested to have a significant effect on NAT2 activity. Genotype determination of NATs revealed that NAT 1*4 and NAT2*5A allele being most common among 10 breast cancer patients. NAT1*11 allele was prevalent among postmenopausal women. The putative rapid NAT1 genotypes was found to display lower control and tumor mean NAT1 activities compared to normal NAT1 genotypes. Among slow NAT2 acetylators, mean tumor NAT2 activities was found to be significantly higher than respective controls.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    116439

    Partial purification and characterization of bovine liver acetyl coenzyme A dependent (:) arylamine N-acetyltransferases

    Sığır karaciğerinden asetil koenzim A (:) arilamin N-asetiltransferaz enziminin kısmen saflaştırılması ve karakterize edilmesi

    ÖZLEM BAŞARIR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2001

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TÜLİN GÜNAY

    PROF. DR. MESUDE İŞCAN

  2. Tez No

    76009

    Partial purification and characterization of NADH-cytochrame b5 reductase from mullet liver microsomes

    NADH-sitokrom b5 redüktaz enziminin kefal karaciğer mikroorganizmalarından kısmi olarak saflaştırılması ve karakterizasyonu

    ZAHİDE KABAKLAR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1998

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMEL ARINÇ

  3. Tez No

    287201

    Armillaria mellea mantarından beta-glukozidaz enziminin kısmi olarak saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Partial purification and characterization of beta-glucosidase from Armillaria mellea

    AYŞE TURAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    KimyaKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. NAGİHAN SAĞLAM ERTUNGA

  4. Tez No

    382256

    Topraktan izole edilen Bacillus sp. suşlarından fitaz enziminin kısmi saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Partial purification and characterization of phytase enzyme from Bacillus sp. strains isolated from soil

    DİLARA AKÇAKOCA

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    BiyolojiUludağ Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ELİF DEMİRKAN

  5. Tez No

    251048

    Partial purification and characterization of polyphenol oxidase from Thermophilic bacillus Sp.

    Polifenol oksidaz enziminin Termofilik bacillus Sp.? den kısmi olarak saflaştırılması ve karakterizasyonu

    MELDA ZEYNEP GÜRAY

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2009

    Biyoteknolojiİzmir Yüksek Teknoloji Enstitüsü

    Biyoteknoloji Bölümü

    YRD. DOÇ. DR. GÜLŞAH ŞANLI

    YRD. DOÇ. DR. ÇAĞLAR KARAKAYA

Geri Dön