Geri Dön

Partial purification and characterization of bovine liver acetyl coenzyme A dependent (:) arylamine N-acetyltransferases

Sığır karaciğerinden asetil koenzim A (:) arilamin N-asetiltransferaz enziminin kısmen saflaştırılması ve karakterize edilmesi

  1. Tez No: 116439
  2. Yazar: ÖZLEM BAŞARIR
  3. Danışmanlar: PROF. DR. TÜLİN GÜNAY, PROF. DR. MESUDE İŞCAN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2001
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 93

Özet

oz SIĞIR KARACİĞERİNDEN ASETİL KOENZİM A (:) ARILAMIN N- ASETİLTRANSFERAZ ENZİMİNİN KISMEN SAFLAŞTIRILMASI VE KARAKTERİZE EDİLMESİ Başarır, Özlem Yüksek lisans, Biyoloji Bölümü Danışman: Prof. Dr. Tülin Güray Yardımcı danışman: Prof. Dr. Mesude İşcan Ocak 2001, 76 sayfa N-asetilasyon biyotransformasyon reaksiyonlarında önemli bir basamaktır. Asetil koenzim A' ya bağlı arilamin N-asetiltransferaz (NAT) (E.C.2.3.I.5.), insan da dahil, hayvan türlerindeki N-asetilasyon reaksiyonlarında ihtiyaç duyulan başlıca enzimdir. MBu çalışmada, asetil koenzim A' ya bağlı arilamin N-asetiltransferaz, sığır karaciğerinden izole edilmiş, daha sonra (Sartorius Q15X tipi) kuvvetli anyon-değiştirici filtreye uygulanarak kısmen saflaştırılmıştır. p-Aminobenzoik asit (PABA) (NATl'e özel substrat), sulfamethazin (SMZ) (NAT2' ye özel substrat) konsantrasyonlarının, pH ve sıcaklık değişimlerinin enzim aktivitesi üzerindeki etkileri gibi enzimin bazı biyokimyasal özellikleri de çalışılmıştır. Saflaştırma işlemi sonucunda, yaklaşık 9.6 kat saflaştırma ve 0.734 U/mg protein spesifik aktivite elde edilmiştir. Sığır karaciğeri NAT' larının özgün aktivitesi, NATF e özgün PABA ve NAT2' ye özgün SMZ substratları kullanılarak hesaplanmış, hem PABA hem de SMZ substratlarının 0.1 mM' lık konsantrasyonunda doygunluğa ulaştığı görülmüştür. Sığır karaciğerindeki NAT' ların kinetik değerlerini belirlemek için PABA ve SMZ substrat olarak kullanılmıştır. Sığır karaciğerindeki Vmax ve Km değerleri, sırasıyla, PABA için, 0.734 U/mg protein, 32.4 uM, SMZ için 0.678 U/mg protein, 37.3 uM olarak bulunmuştur. 6.0 ve 9.5 pH değerleri arasında aktivite-pH etkinlik eğrileri saptanmış ve asetilasyon reaksiyonu için en yüksek pH 7.5 olarak bulunmuştur. Sıcaklık değişimlerinin etkisine bakıldığında ise sığır karaciğer NAT' ı en yüksek aktiviteyi 52 °C de göstermiştir. Daha sonra, %12 SDS-poliakrilamit jel vuelektroforezi kullanılarak kısmen saflaştırılmış N-asetiltransferazın saflığı kontrol edilmiştir. Anahtar kelimeler : Asetil koenzim A' ya bağlı arilamin N-asetiltransferaz, N- asetiltransferaz, N-asetilasyon, saflaştırma, biyokimyasal karakterizasyon. vıu

Özet (Çeviri)

ABSTRACT PARTIAL PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF BOVINE LIVER ACETYL COENZYME A DEPENDENT (:) ARYLAMTNE N-ACETYLTRANSFERASES BAŞARIR, Özlem M. S., Department of Biology Supervisor: Prof. Dr. Tülin Güray Co-supervisor: Prof. Dr. Mesude İşcan January 2001, 76 pages N-acetylation is an important step in the biotransformation reactions. Acetyl coenzyme A dependent (:) arylamine N-acetyltransferase (NAT) (E.C.2.3.1.5.) is the main enzyme, that is involved in N-acetylation reactions of animal species including humans. IllIn this study, acetyl coenzyme A dependent (:) arylamine N- acetyltransferases were isolated from bovine liver. Then, the enzyme was partially purified by using a (Sartorius Q15X type) strong anion exchanger. At this step, 9.6-fold purification with a specific activity of 0.734 U/mg protein was achieved. Some of the biochemical properties of the enzyme, the effect of p- aminobenzoic acid (NAT1 specific substrate) and sulfamethazine (NAT2 specific substrate) concentrations, pH, and temperature effects were studied. Bovine liver NATs seemed to be saturated by both PABA and SMZ at around 0.1 mM concentration. The kinetic constants were determined and Vmax and Km values were found as 0.734 U/mg of protein, 32.4 uM and 0.678 U/mg of protein, 37.3 uM when PABA and SMZ was used as a substrate, respectively. The optimum pH curves were obtained ranging pH from 6.0 to 9.5 and the optimum pH for the acetylation reaction was found as 7.5. Bovine liver NAT showed the highest activity around 52 °C. and the purity of the partially purified N-acetyltransferase was checked by using 12 % SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. IVKeywords : Acetyl coenzyme A dependent (:) N-acetyltransferase, N- acetyltransferase, N-acetylation, purification, biochemical characterization.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    438116

    Isolation, screening, partial purification and characterization of halophilic protease from different samples

    Farklı örneklerden halofilik proteaz taranması, izolasyonu, saflaştırılması ve karakterizasyonu

    SARAH FITRIANI

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2016

    BiyolojiAnadolu Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. KIYMET GÜVEN

  2. Tez No

    813120

    Gıda atıklarından termofilik Bacillus licheniformiş SO7 ile üretilen alkalin proteazın manyetik alan destekli üç fazlı ayırma sistemi ile saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu

    Purification and biochemical characterization of alkaline protease produced by thermophilic Bacillus licheniformis SO7 from food waste using magnetic field-assisted three phase partitioning

    GÖKSEN GÖREN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyoteknolojiAtatürk Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MELDA ŞİŞECİOĞLU

  3. Tez No

    498515

    Tuz Gölü'nden izole edilen halofilik mikroorganizmaların serin proteaz aktivitelerinin belirlenmesi ve kısmi saflaştırılması

    The determination of serine protease activities of halophilic microorganism isolated from Tuz Lake and their partial purification

    ALİ ARSLAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    BiyoteknolojiMuğla Sıtkı Koçman Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. GÜLTEN ÖKMEN

  4. Tez No

    76009

    Partial purification and characterization of NADH-cytochrame b5 reductase from mullet liver microsomes

    NADH-sitokrom b5 redüktaz enziminin kefal karaciğer mikroorganizmalarından kısmi olarak saflaştırılması ve karakterizasyonu

    ZAHİDE KABAKLAR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1998

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMEL ARINÇ

  5. Tez No

    287201

    Armillaria mellea mantarından beta-glukozidaz enziminin kısmi olarak saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Partial purification and characterization of beta-glucosidase from Armillaria mellea

    AYŞE TURAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    KimyaKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. NAGİHAN SAĞLAM ERTUNGA

Geri Dön