Geri Dön

Cloning and expression of benzaldehyde lyase gene from pseudomonas fluorescens biovar i in Pichia pastoris

Pseudomonas fluorescens biovar I benzaldehit liyaz geninin Pichia pastoris mikroorganizmasına klonlanması ve ekspresiyonu

PDF İndir

  1. Tez No: 181023
  2. Yazar: ARDA BÜYÜKSUNGUR
  3. Danışmanlar: PROF. DR. PINAR ÇALIK, PROF. DR. TUNÇER ÖZDAMAR
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: P.pastoris, P.pastoris
  7. Yıl: 2006
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Pseudomonas fluorescens Biovar I mikroorganizmasının benzaldehit liyaz (BAL,EC 4.1.2.38) tiamin difosfat bağımlı enzimi C-C bağlarının yapımı ve yıkımındagörevlidir. Bu çalışmada, Pseudomonas fluorescens Biovar I benzaldehit liyazgeninin, benzaldehit liyaz enzimin hücredışı üretimi amacı ile Pichia pastorismayasına klonlanması amaçlanmıştır. Bu kapsamda, polimeraz zincirtepkimesiyle çoğaltılan bal geni pPICZalphaA entegrasyon vektörüne aktarılmış,ve oluşturulan rekombinant pPICZalphaA::bal plazmidi P.pastoris hücresineaktarılmış ve gen P.pastoris kromozomuna integre edilmiştir. Hücredışıbenzaldehit liyaz enzimi P.pastoris hücresinde AOX promotorunun kontrolüaltında üretilmiş ve S. cerevisiae alpha faktör sinyal sekansı ile hücredışınaaktarılmıştır. Rekombinant P.pastoris hücresi önce zeosin içeren katıbesiyerinde 48-72 saat çoğalmış ve oluşan tek kolonilerden gliserol içeren önbesi ortamına aktarılıp 24 saat boyunca çoğalmışlardır. Bu işlemden sonrahücreler santrifüjlenerek ayrılmış ve metanol içeren üretim ortamında 72 sboyunca her 24 saatte bir metanol ile indüklenmişlerdir. SDS-PAGE analizleriderekombinant P.pastoris türü tarafından hücredışı üretilen benzaldehit liyazenzim monomerinin 59 kDa büyüklüğünde olduğu görülmüştür. FPLC analiziüretim ortamında enzimin tetramer formunun monomer formundan çok daha azmiktar bulunduğunu göstermiştir.Benzaldehit Liyaz, Hücredışı üretim, Rekombinant

Özet (Çeviri)

Benzaldehyde lyase (BAL, EC 4.1.2.38) from Pseudomonas fluorescens Biovar I,a thiamine pyrophosphate (ThDP) dependent enzyme, catalyzes the enzymatickinetic resolution of racemates by C-C bond cleavage and concomitant C-Cbond formation. In this study, benzaldehyde lyase gene from Pseudomonasfluorescens Biovar I was cloned into Pichia pastoris, with the aim of theextracellular production of the enzyme. For this purpose, firstly, PCR amplifiedbal gene was cloned into an integration vector pPICZalphaA. Thereafter therecombinant plasmid pPICZalphaA::bal was transformed into P.pastoris.Extracellular benzaldehyde lyase enzyme was expressed under the control ofthe strong AOX promoter and the secretion of the enzyme in the fermentationmedium was achieved by means of S. cerevisiae α factor signal sequence. Therecombinant cells were grown for 48-72 hours in YPD solid medium then thecells inoculated in glycerol containing medium. After being separated bycentrifugation cells were transferred into methanol containing productionmedium. In methanol containing medium cells were grown for 72 h. Startingfrom t=24 h methanol was added to medium as an inducer of AOX promoterand the carbon source of microorganism in order to produce BAL in every 24hour. SDS-PAGE analyses illustrated that extracellular benzaldehyde lyaseenzyme produced by the recombinant P.pastoris strain had the size of 59 KDa,which is the size of benzaldehyde lyase monomer. FPLC analysis showed thatconcentration of the tetrameric form of benzaldehyde lyase enzyme, activeform, was much less than the monomeric form of the enzyme indicating thatthe enzyme produced by recombinant P.pastoris mostly could not fold intomultimeric form in the fermentation medium.Benzaldehyde lyase, Extracellular production, Recombinant

Benzer Tezler

  1. Tez No

    13175

    Cloning and expression of glucose oxidase gene from aspergillus niger NRRL-3

    Başlık çevirisi yok

    FADEL AKRAM SHARİF

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    1991

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    PROF.DR. GÜRDAL ALAEDDİNOĞLU

  2. Tez No

    38569

    Cloning and expression of a haloacid dehalogenase gene from pseudomanas sp. strain ISS ın E. coli

    Pseudomonas sp. 19S suşundan bir haloasit dehalogenaz geninin E.Coli'ye klonlanması ve ekspresyonu

    BUĞRAER ASLAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1995

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    PROF.DR. SEMRA KOCABIYIK

  3. Tez No

    50512

    Cloning and expression of TagI endonuclease in E.coli by using the cloning vector pUC18

    TaqI endonükleazının pUC18 klonlama vektörü kullanılarak E.coli'ye klonlanması ve üretimi

    ZEYNEP PETEK ÇAKAR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1996

    Kimya MühendisliğiBoğaziçi Üniversitesi

    PROF.DR. BETÜL KIRDAR

    PROF.DR. ZEYNEP İLSEN ÖNSAN

  4. Tez No

    76483

    Cloning and expression of TaqI restriction endonuclease gene using pmal-c2 vector system in different straints of escherichia coli

    TaqI restriksiyon endonükleaz geninin pmal-c2 vektör sistemi kullanılarak değişik escherichia coli suşlarında klonlanması ve ekspresyonu

    ELİF ÖZKIRIMLI

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1998

    Kimya MühendisliğiBoğaziçi Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. BETÜL KIRDAR

  5. Tez No

    172239

    Cloning and expression of periplasmic (CLpP-LIKE) and memrane-bound serine protease genes of thermoplasma volcanium in escherichia coli

    Thermoplasma volcaniumun periplazmik (CLpP-benzeri) ve membrana-bağlı serin proteaz enzim genlerinin escherichia colide klonlanması ve anlatımı

    BURÇAK DEMİROK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2006

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    PROF.DR. SEMRA KOCABIYIK

Geri Dön