Experimental studies to determine the effect of protein characteristics on translocation of fusion proteins in escherichia coli
Escherichia colide bir füzyon proteinin taşınmasına, protein karakteristiğinin etkisinin belirlenmesinin deneysel çalışmaları
- Tez No: 196829
- Danışmanlar: PROF.DR. AMABLE HORTAÇSU, Y.DOÇ.DR. BERNA SARIYAR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2006
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
ESCHERICHIA COLI'DA BİR FÜZYON PROTEİNİNİNTAŞINMASINA, PROTEİN KARAKTERİSTİĞİNİN ETKİSİNİNBELİRLENMESİNİN DENEYSEL ÇALIŞMALARIFatma Özde ÜtkürMaltoza bağlanan protein-glikoz isomeraz füzyon proteinin sitoplazmik boşluktanperiplazmik boşluğa taşınması üzerine yapılan önceki deneysel çalışma, füzyonproteininin sitoplazmada kaldığını ve üretilen füzyon proteininin çok az bir kısmınınperiplazmaya taşındığını göstermiştir.Bu çalışmada, taşınma üzerinde protein boyutunun etkisini araştırmak için genetikmühendisliği teknikleri kullanılmıştır. Bu amaçla, farklı boyutlarda endüstriyel enzimlerpMAL-p2 vektörüne klonlanmıştır. Bu çalışmada kullanılan iki enzim sırasıyla 718 ve251 amino asit uzunluğunda olan pullulanaz ve serin proteaz enzimleridir. 395 aminoasit uzunluğundaki glikoz izomeraz da pullulanaz ve serin proteazın arasındadır.Thermus thermophilus HB8 (ATCC 27634) bakterisindeki serin proteaz vepullulanaz genleri PCR kullanılarak çoğaltıldı ve pMAL-p2 vektörünün XmnI ve EcoRIbölgeleri arasına yerleştirildi. MBP-serin proteaz ve MBP-pullulanaz füzyon proteinlerirecombinant XL1 hücrlerinde üretildi ve füzyonların sitoplazmik ve periplazmikkısınlardaki hücresel dağılımları gerekli enzim testleri ve SDS-PAGE ile belirlendi.Deneysel sonuçlar, MBP-serin proteaz füzyonunun çoğunun periplazmaya taşındığını,MBP-pullulanaz füzyonunun ise neredeyse tamamının periplazmaya taşındığınıgöstermiştir. Diğer taraftan, MBP-GI füzyonu için sonuçlar pek de tatmin edici değildirve üretilen toplam proteinin yüzde birden fazlası periplazmaya taşınmamaktadır.Böylelikle, taşınacak protein boyutunun taşınma üzerine etkisi olmadığı açıktır.
Özet (Çeviri)
EXPERIMENTAL STUDIES TO DETERMINE THE EFFECT OFPROTEIN CHARACTERISTICS ON TRANSLOCATION OF FUSIONPROTEINS IN ESCHERICHIA COLIFatma Özde ÜtkürPrevious experimental work to translocate maltose binding protein-glucose isomerasefusion protein from the cytoplasmic to the periplasmic space have shown that the fusionprotein mainly remained in the cytoplasm and only one per cent of the expressed fusionprotein was transported to the periplasm.In the present study, genetic engineering techniques are exploited to investigate theeffect of protein size on translocation. For this purpose, two industrial enzymes of differentsizes were cloned using the pMAL-p2 vector. These two enzymes are: 718 amino acids longpullulanase and 251 amino acids long putative serine protease of Thermus Thermophilus HB8.The gene coding for serine protease and pullulanase were amplified using PCR andinserted between XmnI and EcoRI site of the plasmid vector pMAL-p2. The fusion proteinsMBP-serine protease and MBP-pullulanase were expressed in recombinant XL1 cells and thecellular distribution of the fusions were determined in cytoplasmic and periplasmiccompartments by the appropriate enzyme assays and SDS-PAGE analysis. The experimentalresults showed that most of the MBP-serine protease fusion expressed was translocated to theperiplasm and almost all of the MBP-pullulanase fusion expressed was translocated to theperiplasm. On the other hand, not more than one per cent of the total MBP-GI proteinproduced was translocated to the periplasm. Therefore, it was obvious that the length of theprotein to be translocated didn?t have any effect on translocation.
Benzer Tezler
- Nefrojenik diabetes insipidus hastalığına sebep olan mutantlar üzerinde bazı farmakolojik şaperonların etki mekanizmalarının araştırılması
Investigation of the mechanisms to effect of some pharmacological chaperones on mutants caused by nephrogenic diabetes insipidus disease
ELİF MERVE AVCU
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
Eczacılık ve FarmakolojiHacettepe ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. EMEL SAĞLAR ÖZER
- Prematüre bebeği olan annelere uygulatılan nefes egzersizinin kaygı düzeyine ve anne sütü içeriğine etkisi
The effect of breathing exercise applied to mothers with premature babies on anxiety level and breast milk content
ZEYNEP ORMANCI
Doktora
Türkçe
2024
EbelikAydın Adnan Menderes ÜniversitesiEbelik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SÜNDÜZ ÖZLEM ALTINKAYA
- Bıldırcın rasyonlarına sumak çekirdek yağı ilavesinin büyüme ve performans, et ve yumurta kalitesi, serum ve kemik biyomekanik parametreleri, karkas ve üreme özellikleri üzerine etkisi
Effect of supplementing quail diets with sumac seed oil on performance, meat and egg quality, serum and bone biomechanical parameters, carcass and reproductive traits in growing and laying periods
SEYİT AHMET GÖKMEN
- İkinci ürün susam yetiştiriciliğinde topraktan azot ve yapraktan çinko uygulamalarının susam bitkisinin verim ve verim bileşenleri ile danede çinko biyofortifikasyanu üzerine etkilerinin belirlenmesi
Determination of the effects of soil nitrogen and foliar zinc applications on yield and yield components of sesame crops and on zinc biofortification in grain in second crop sesame cultivation
ŞULE HAN
Doktora
Türkçe
2025
ZiraatAkdeniz ÜniversitesiToprak Bilimi ve Bitki Besleme Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. İLKER SÖNMEZ
- Bazı kimyasal madde uygulamalarının ıspanakların soğuğa dayanıklılığına etkisi üzerinde araştırmalar
Investigations on the effects of some chemical applications on frost hardiness of spinach
MURAT DEVECİ