Experimental studies to determine the effect of protein characteristics on translocation of fusion proteins in escherichia coli
Escherichia colide bir füzyon proteinin taşınmasına, protein karakteristiğinin etkisinin belirlenmesinin deneysel çalışmaları
- Tez No: 196829
- Danışmanlar: PROF.DR. AMABLE HORTAÇSU, Y.DOÇ.DR. BERNA SARIYAR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2006
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 93
Özet
ESCHERICHIA COLI'DA BİR FÜZYON PROTEİNİNİNTAŞINMASINA, PROTEİN KARAKTERİSTİĞİNİN ETKİSİNİNBELİRLENMESİNİN DENEYSEL ÇALIŞMALARIFatma Özde ÜtkürMaltoza bağlanan protein-glikoz isomeraz füzyon proteinin sitoplazmik boşluktanperiplazmik boşluğa taşınması üzerine yapılan önceki deneysel çalışma, füzyonproteininin sitoplazmada kaldığını ve üretilen füzyon proteininin çok az bir kısmınınperiplazmaya taşındığını göstermiştir.Bu çalışmada, taşınma üzerinde protein boyutunun etkisini araştırmak için genetikmühendisliği teknikleri kullanılmıştır. Bu amaçla, farklı boyutlarda endüstriyel enzimlerpMAL-p2 vektörüne klonlanmıştır. Bu çalışmada kullanılan iki enzim sırasıyla 718 ve251 amino asit uzunluğunda olan pullulanaz ve serin proteaz enzimleridir. 395 aminoasit uzunluğundaki glikoz izomeraz da pullulanaz ve serin proteazın arasındadır.Thermus thermophilus HB8 (ATCC 27634) bakterisindeki serin proteaz vepullulanaz genleri PCR kullanılarak çoğaltıldı ve pMAL-p2 vektörünün XmnI ve EcoRIbölgeleri arasına yerleştirildi. MBP-serin proteaz ve MBP-pullulanaz füzyon proteinlerirecombinant XL1 hücrlerinde üretildi ve füzyonların sitoplazmik ve periplazmikkısınlardaki hücresel dağılımları gerekli enzim testleri ve SDS-PAGE ile belirlendi.Deneysel sonuçlar, MBP-serin proteaz füzyonunun çoğunun periplazmaya taşındığını,MBP-pullulanaz füzyonunun ise neredeyse tamamının periplazmaya taşındığınıgöstermiştir. Diğer taraftan, MBP-GI füzyonu için sonuçlar pek de tatmin edici değildirve üretilen toplam proteinin yüzde birden fazlası periplazmaya taşınmamaktadır.Böylelikle, taşınacak protein boyutunun taşınma üzerine etkisi olmadığı açıktır.
Özet (Çeviri)
EXPERIMENTAL STUDIES TO DETERMINE THE EFFECT OFPROTEIN CHARACTERISTICS ON TRANSLOCATION OF FUSIONPROTEINS IN ESCHERICHIA COLIFatma Özde ÜtkürPrevious experimental work to translocate maltose binding protein-glucose isomerasefusion protein from the cytoplasmic to the periplasmic space have shown that the fusionprotein mainly remained in the cytoplasm and only one per cent of the expressed fusionprotein was transported to the periplasm.In the present study, genetic engineering techniques are exploited to investigate theeffect of protein size on translocation. For this purpose, two industrial enzymes of differentsizes were cloned using the pMAL-p2 vector. These two enzymes are: 718 amino acids longpullulanase and 251 amino acids long putative serine protease of Thermus Thermophilus HB8.The gene coding for serine protease and pullulanase were amplified using PCR andinserted between XmnI and EcoRI site of the plasmid vector pMAL-p2. The fusion proteinsMBP-serine protease and MBP-pullulanase were expressed in recombinant XL1 cells and thecellular distribution of the fusions were determined in cytoplasmic and periplasmiccompartments by the appropriate enzyme assays and SDS-PAGE analysis. The experimentalresults showed that most of the MBP-serine protease fusion expressed was translocated to theperiplasm and almost all of the MBP-pullulanase fusion expressed was translocated to theperiplasm. On the other hand, not more than one per cent of the total MBP-GI proteinproduced was translocated to the periplasm. Therefore, it was obvious that the length of theprotein to be translocated didn?t have any effect on translocation.
Benzer Tezler
- Nefrojenik diabetes insipidus hastalığına sebep olan mutantlar üzerinde bazı farmakolojik şaperonların etki mekanizmalarının araştırılması
Investigation of the mechanisms to effect of some pharmacological chaperones on mutants caused by nephrogenic diabetes insipidus disease
ELİF MERVE AVCU
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyolojiHacettepe ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. EMEL SAĞLAR ÖZER
- Membrane protein-based in vitro methods
Zar protein-tabanlı in vitro metotlar
FATİH İNCİ
Doktora
İngilizce
2013
Biyokimyaİstanbul Teknik Üniversitesiİleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FATMA NEŞE KÖK
- Tek taraflı parsiyel üreter obstrüksiyonu oluşturulan sıçanlarda karvedilol kullanımının lipid peroksidasyonu ve antioksidan enzim düzeylerine olan etkilerinin değerlendirilmesi
Başlık çevirisi yok
ADEM YAŞAR
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2011
ÜrolojiGaziosmanpaşa ÜniversitesiÜroloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FİKRET ERDEMİR
- İvesi koyunlarının besi gücü ve karkas özellikleri üzerinde bir araştırma
Başlık çevirisi yok
OSMAN BİÇER
- Parasetamol üretimi atıksuyunun anerobik arıtılabilirliğinin incelenmesi
Anaerobik treatment of paracetamol production wastewater
SEDEF GÜRVARDAR
Yüksek Lisans
Türkçe
1997
Kimya Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NURAN DEVECİ