Geri Dön

Experimental studies to determine the effect of protein characteristics on translocation of fusion proteins in escherichia coli

Escherichia colide bir füzyon proteinin taşınmasına, protein karakteristiğinin etkisinin belirlenmesinin deneysel çalışmaları

  1. Tez No: 196829
  2. Yazar: FATMA ÖZDE ÜTKÜR
  3. Danışmanlar: PROF.DR. AMABLE HORTAÇSU, Y.DOÇ.DR. BERNA SARIYAR
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2006
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 93

Özet

ESCHERICHIA COLI'DA BİR FÜZYON PROTEİNİNİNTAŞINMASINA, PROTEİN KARAKTERİSTİĞİNİN ETKİSİNİNBELİRLENMESİNİN DENEYSEL ÇALIŞMALARIFatma Özde ÜtkürMaltoza bağlanan protein-glikoz isomeraz füzyon proteinin sitoplazmik boşluktanperiplazmik boşluğa taşınması üzerine yapılan önceki deneysel çalışma, füzyonproteininin sitoplazmada kaldığını ve üretilen füzyon proteininin çok az bir kısmınınperiplazmaya taşındığını göstermiştir.Bu çalışmada, taşınma üzerinde protein boyutunun etkisini araştırmak için genetikmühendisliği teknikleri kullanılmıştır. Bu amaçla, farklı boyutlarda endüstriyel enzimlerpMAL-p2 vektörüne klonlanmıştır. Bu çalışmada kullanılan iki enzim sırasıyla 718 ve251 amino asit uzunluğunda olan pullulanaz ve serin proteaz enzimleridir. 395 aminoasit uzunluğundaki glikoz izomeraz da pullulanaz ve serin proteazın arasındadır.Thermus thermophilus HB8 (ATCC 27634) bakterisindeki serin proteaz vepullulanaz genleri PCR kullanılarak çoğaltıldı ve pMAL-p2 vektörünün XmnI ve EcoRIbölgeleri arasına yerleştirildi. MBP-serin proteaz ve MBP-pullulanaz füzyon proteinlerirecombinant XL1 hücrlerinde üretildi ve füzyonların sitoplazmik ve periplazmikkısınlardaki hücresel dağılımları gerekli enzim testleri ve SDS-PAGE ile belirlendi.Deneysel sonuçlar, MBP-serin proteaz füzyonunun çoğunun periplazmaya taşındığını,MBP-pullulanaz füzyonunun ise neredeyse tamamının periplazmaya taşındığınıgöstermiştir. Diğer taraftan, MBP-GI füzyonu için sonuçlar pek de tatmin edici değildirve üretilen toplam proteinin yüzde birden fazlası periplazmaya taşınmamaktadır.Böylelikle, taşınacak protein boyutunun taşınma üzerine etkisi olmadığı açıktır.

Özet (Çeviri)

EXPERIMENTAL STUDIES TO DETERMINE THE EFFECT OFPROTEIN CHARACTERISTICS ON TRANSLOCATION OF FUSIONPROTEINS IN ESCHERICHIA COLIFatma Özde ÜtkürPrevious experimental work to translocate maltose binding protein-glucose isomerasefusion protein from the cytoplasmic to the periplasmic space have shown that the fusionprotein mainly remained in the cytoplasm and only one per cent of the expressed fusionprotein was transported to the periplasm.In the present study, genetic engineering techniques are exploited to investigate theeffect of protein size on translocation. For this purpose, two industrial enzymes of differentsizes were cloned using the pMAL-p2 vector. These two enzymes are: 718 amino acids longpullulanase and 251 amino acids long putative serine protease of Thermus Thermophilus HB8.The gene coding for serine protease and pullulanase were amplified using PCR andinserted between XmnI and EcoRI site of the plasmid vector pMAL-p2. The fusion proteinsMBP-serine protease and MBP-pullulanase were expressed in recombinant XL1 cells and thecellular distribution of the fusions were determined in cytoplasmic and periplasmiccompartments by the appropriate enzyme assays and SDS-PAGE analysis. The experimentalresults showed that most of the MBP-serine protease fusion expressed was translocated to theperiplasm and almost all of the MBP-pullulanase fusion expressed was translocated to theperiplasm. On the other hand, not more than one per cent of the total MBP-GI proteinproduced was translocated to the periplasm. Therefore, it was obvious that the length of theprotein to be translocated didn?t have any effect on translocation.

Benzer Tezler

  1. Nefrojenik diabetes insipidus hastalığına sebep olan mutantlar üzerinde bazı farmakolojik şaperonların etki mekanizmalarının araştırılması

    Investigation of the mechanisms to effect of some pharmacological chaperones on mutants caused by nephrogenic diabetes insipidus disease

    ELİF MERVE AVCU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. EMEL SAĞLAR ÖZER

  2. Membrane protein-based in vitro methods

    Zar protein-tabanlı in vitro metotlar

    FATİH İNCİ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2013

    Biyokimyaİstanbul Teknik Üniversitesi

    İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. FATMA NEŞE KÖK

  3. İvesi koyunlarının besi gücü ve karkas özellikleri üzerinde bir araştırma

    Başlık çevirisi yok

    OSMAN BİÇER

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    1988

    ZiraatÇukurova Üniversitesi

    Zootekni Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. OKAN GÜNEY

  4. Parasetamol üretimi atıksuyunun anerobik arıtılabilirliğinin incelenmesi

    Anaerobik treatment of paracetamol production wastewater

    SEDEF GÜRVARDAR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1997

    Kimya Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NURAN DEVECİ