Geri Dön

Production of kits for hepatit diagnosis

Hepatit teşhisi için tayin kitlerinin üretimi

PDF İndir

  1. Tez No: 216437
  2. Yazar: LOKMAN UZUN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. ADİL DENİZLİ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Kimya, Chemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2008
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 162

Özet

Sunulan çalışmada, hepatit teşhisi için hepatit B yüzey antibadi (HBsAb) baskılanmış poli(2-hidroksietil metakrilat-N-metakriloil-L-tirozin metil ester) [poli(HEMA-MAT)] polimer hazırlanmıştır. MAT, HBsAb'nin non-kovalent bağlanması için kompleks oluşturucu ve komonomer olarak seçilmiştir. İlk basamakta, MAT metakriloil klorür ve L-tirozin metil esterin reaksiyonu ile üretilmiştir. Daha sonra, farklı oranlarda HBsAb ve MAT monomeri ile ön-kompleksler hazırlanmıştır. HBsAb-baskılanmış poli(HEMA-MAT) polimer, farklı oranlarda çapraz bağlayıcı, fonksiyonel monomer ve kalıp molekül (HBsAb) kullanılarak hazırlanmıştır. HBsAb baskılanmış polimerler yüzey alan ölçümleri, şişme testleri, taramalı elektron mikroskobu (SEM), elementel analiz, FTIR ve DSC çalışmaları ile karakterize edilmiştir. Polimerik yapıdan kalıp molekülün sökülmesi için 1.0 M etilen glikol kullanılmıştır. Adsorpsiyon çalışmaları, HBsAb ve anti-Hepatit A antibadi (anti-HAV) pozitif insan plazması ile yapılmıştır. Derişimin etkisi, plazma örneklerinin farklı oranlarda seyreltilmesi ile incelenmiştir. Adsorpsiyon kapasitesine zamanın, MAT:HBsAb ön-kompleksindeki MAT miktarının ve sıcaklığın etkisi incelenmiştir. Langmuir adsorpsiyon modelinin bu afinite sistemine uygun olduğu görülmüştür. Adsorpsiyon sistemi birinci derece kinetik ifade ile tanımlanabilir. Adsorpsiyon esnasında HBsAb moleküllerinin gözenekli baskılanmış partiküller içerisine difüzyonu hız belirleyen basamaktır. Kesikli sistemde HBsAb baskılanmış poli(HEMA-MAT) partiküllerin seçiciliğini göstermek için, HBsAb ve anti-HAV pozitif insan plazmasından HBsAb, toplam anti-Hepatit A antibadi (anti-HAV) ve toplam immunoglobulin E (IgE)'nin yarışmalı adsorpsiyonu incelenmiştir. HBsAb baskılanmış partiküller, HBsAb moleküllerini toplam anti-HAV antibadilere göre 18.3 kat; IgE moleküllerine göre 2.2 kat daha fazla adsorplamaktadır. Bu sonuçlara göre, HBsAb baskılanmış partiküllerin iki farklı hepatit türü arasında HBsAb'ye seçiciliği olduğu söylenebilir. Çalışmanın ikinci bölümünde, HBsAb baskılanmış yüzey plazmon rezonans (SPR) sensör çiplerin hazırlanması hedeflenmiştir. Modifiye edilmemiş, allil merkaptan ile modifiye edilmiş ve HBsAb-baskılanmış poli(HEMA-MAT) SPR çipler, temas açısı, atomik kuvvet mikroskobu (AFM) ve yüzey plazmon rezonans ölçümleriyle karakterize edilmiştir. Kinetik çalışmalar anti-HBsAb pozitif insan plazması kullanılarak incelenmiştir. Kinetik ve bağlanma sabitlerinin belirlenmesi için dört farklı izoterm (Scatchard, Langmuir, Freundlich ve Langmuir-Freundlich) kinetik verilere uygulanmıştır. Scatchard grafiği, HBsAb baskılanmış poli(HEMA-MAT) SPR çipin bir miktar yüzey heterojenitesine sahip olduğunu göstermesine rağmen, SPR çip Langmuir izotermine oldukça uygundur. Bu izotermden hesaplanan sonuçlara göre KA ve KD değerleri sırasıyla 0.015 mIU/mL ve 66.0 mL/mIU'dir. SPR çipin kontrol deneyleri, bağışıklık kazanmamış (HBsAb negatif) insan plazması kullanılarak yapılmıştır. Elde edilen sonuçlara göre, SPR çip HBsAb negatif plazmaya herhangi bir cevap vermemektedir.

Özet (Çeviri)

In the present study, hepatitis B surface antibody (HBsAb) imprinted-poly(2-hydroxyethyl methacrylate-N-methacryloyl-L-tyrosine methyl ester) [poly(HEMA-MAT)] polymer was prepared for hepatitis diagnosis. N-methacryloyl-L-tyrosine methyl ester (MAT) was chosen as a complexing agent for non-covalent binding of HBsAb molecules. In the first step, MAT monomer was synthesized via a reaction between methacryloyl chloride and L-tyrosine methyl ester. Then, preorganized complex was prepared with HBsAb and MAT monomer in different ratios. HBsAb-imprinted poly(HEMA-MAT) polymer was prepared in the presence of different amounts of cross linker, functional monomer and template molecule. HBsAb-imprinted poly(HEMA-MAT) polymer was characterized by surface area measurements, swelling test, scanning electron microscope (SEM), elemental analysis, FTIR, and DSC studies. 1.0 M ethylene glycol was used to desorp template molecule (HBsAb) from polymeric structure. Adsorption studies were performed from HBsAb and anti-hepatitis A antibody (anti-HAV) positive human plasma. Effect of concentration was investigated by diluting the plasma with different ratios. Effect of time, amount of MAT monomer in MAT:HBsAb pre-complex and temperature on the adsorption capacity were investigated. Langmuir adsorption model can be applied in this affinity system. Adsorption is more suitable with pseudo-first order kinetic. This situation shows that controlling step of mass transfer is diffussion. In other words, diffusion of HBsAb molecules into porous imprinted particles was rate determining step during the adsorption process. In order to show the selectivity of the HBsAb imprinted poly(HEMA-MAT) particles, competitive adsorption of HBsAb, total anti-HAV and total immunoglobulin E (IgE) from HBsAb and anti-HAV positive plasma was investigated. HBsAb-imprinted particles could adsorp HBsAb molecule 18.3 times more than anti-HAV antibody and 2.2 times more than IgE molecules. Therefore, we can say that HBsAb-imprinted particles has significant selectivity for HBsAb. In the second part of this study, HBsAb imprinted surface plasmon resonance (SPR) sensor chips were prepared. Surface characterization of the non-modified, allyl mercaptane modified and HBsAb-imprinted poly(HEMA-MAT) SPR chips were investigated with contact angle, atomic force microscopy (AFM) and SPR measurements. Kinetic studies were done by using HBsAb positive human plasma. In order to determine the kinetic and binding constant by four different isotherms, Scatchard, Langmuir, Freundlich and Langmuir-Freundlich, were applied to kinetic data. Scatchard curve shows that HBsAb imprinted poly(HEMA-MAT) SPR chip has some surface heterogeneity, SPR chip obeyed the Langmuir adsorption model. So, the maximum detection limit, calculated from the isotherm, was 208.2 mIU/mL and KA, KD values are 0.015 mIU/mL and 66.0 mL/mIU, respectively. Control experiments of the SPR chip were done by using non-immunized, HBsAb negative, human plasma. The results show that SPR chip do not give any response to HBsAb negative plasma.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    171033

    Alfa-fetoprotein'e karşı monoklonal antikor üretimi ve tanı kitinin geliştirilmesi

    Producing monoclonal antibody against alpha-fetoprotein and developing of the test kit

    FUNDA ŞENTÜRK AKFIRAT

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2005

    BiyolojiGebze Yüksek Teknoloji Enstitüsü

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. AYNUR BAŞALP

    PROF.DR. YAVUZ SEZEN

  2. Tez No

    79719

    Hepatit B virüs yüzey antijeninin (HBsAg) saptanmasına yönelik HBsAg-ELISA tanı kiti yapılması ve değerlendirilmesi

    Production and evaluation of HBsAg-ELISA diagnostic kit for detection of hepatitis B virus surface antigen (HBsAg)

    BÜLENT NURİ TAYŞİ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    1999

    MikrobiyolojiGazi Üniversitesi

    Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. CEMALETTİN AYBAY

  3. Tez No

    301207

    Hepatit e antijenine (HBeAg) özgü monoklonal antikor geliştirilmesinde alternatif yöntemler

    Alternative methods for developing monoclonal antibodies against hepatitis e antigen (HBeAg)

    İBRAHİM SÖĞÜT

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    Allerji ve İmmünolojiEskişehir Osmangazi Üniversitesi

    Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYNUR BAŞALP

    PROF. DR. GÜNGÖR KANBAK

  4. Tez No

    463923

    Manisa ili'nde 2014 yılı hepatit A ve hepatit b duyarlılığı ve sosyal belirleyicilerle ilişkisi

    The relationship between hepatitis A and hepatitis b susceptibility and social determinants in 2014 in Manisa

    HİLAL GÖRGEL

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    Halk SağlığıDokuz Eylül Üniversitesi

    Halk Sağlığı Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BELGİN ÜNAL

  5. Tez No

    334660

    Miyoglobin teşhisi için tayin kitlerinin üretimi

    Production of kits for myoglobine diagnosis

    NEVRA ÖZTÜRK ATAY

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    KimyaAdnan Menderes Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. A.ALEV KARAGÖZLER

    PROF. DR. SİNAN AKGÖL

Geri Dön