Yenilebilir mantar türlerinden polifenol oksidaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of polyphenol oxidase from edible mushrooms
- Tez No: 245519
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. ÖZEN ÖZENSOY GÜLER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2009
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Balıkesir Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 210
Özet
Bu çalışmada, enzimatik kararmaya neden olan polifenol oksidaz (PPO) ekstrakte edildi ve amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz ve Sepharose 4B-L-tirozin-paraaminobenzoik asid afinite kolonu ile saflaştırıldı.Enzim kaynağı olarak Lactarius salmonicolors ve Agaricus bisporus mantarları kullanıldı. Saflaştırılan enzimler için SDS-PAGE de tek bir bant elde edildi. Lactarius salmonicolor PPO (LsPPO) enziminin molekül ağırlığı 36 kDa, Agaricus bisporus PPO (AbPPO) enziminin molekül ağırlığı 50 kDa civarında gözlemlenmiştir.Katekol, 4-metil katekol ve pirogallol substratları kullanılarak, PPO enziminin optimum pH ve sıcaklık değerleri belirlendi. LsPPO enziminin kullanılan üç farklı substrat için optimum pH ve sıcaklıları sırasıyla pH 6.0-7.5 ve 0-25 oC arasında değiştiği bulunmuştur. Bu değerler AbPPO enzimi için ise pH 7.5-8.0 ve 20-30 oC arasında değiştiği bulunmuştur.Lactarius salmonicolor ve Agaricus bisporus PPO enzimlerinin optimum pH ve sıcaklıkta katekol, 4-metil katekol ve pirogallol substratları için KM ve Vmax değerleri Linewear-Burk yöntemi ile bulunmuştur. Vmax/ KM değerlerine göre LsPPO enzimi için en uygun substratın 4-metil katekol, AbPPO enzimi için ise pirogallol olduğu bulunmuştur.Glutatyon, L-sistein, p-aminobenzen sulfanamid, okzalik asit, 2-merkapto etanol, siyrincis asit ve L-tirozin' in AbPPO ve LsPPO aktivitesi üzerine inhibisyon etkisi katekol substratı kullanılarak etkisi incelendi.Kinetik çalışmalar 2-merkapto etanol, L-sistein, siyrincis asit, okzalik asit, glutatyon ve p-aminobenzen sülfanamidin LsPPO enziminin unkompetetif inhibiörü iken, L-tirozin kompetitif inhibitörü olduğunu göstermiştir.Kinetik çalışmalara göre 2-merkapto etanol, L-sistein, siyrincis asit ve L-tirozinn, AbPPO enziminin unkompetetif inhibitörü iken, p-aminobenzen sülfanamid karışık tipli ve okzalik asit ise kompetitif inhibitörüdür.ANAHTAR SÖZCÜKLER: Lactarius salmonicolor; Agaricus bisporus; polifenol oksidaz; afinite kromatografisi; inhibisyon; optimum pH ve sıcaklık.
Özet (Çeviri)
In this study polyphenol oxidase (PPO) which leads to undesirable enzymatic browning was extracted and purified through ammonium sulphate precipitation, dialysis and Sepharose 4B-L-tyrosin-paraaminobezoic acid affinity column.Lactarius volemus and Agaricus bisporus mushrooms are used as enzyme sources. The purified enzymes were migrated as a single band on SDS-PAGE. The molecular weight of the Lactarius salmonicolor PPO (LsPPO) enzyme and Agaricus bisporus PPO (AbPPO) enzyme were estimated respectively around 36 kDa and 50 kDa.Optimum pH and temperature values of PPO enzyme was determined using catechol, 4-methylcatechol and pyrogallol as substrate. The optimum pH and temperature values of LsPPO for the used three substrates ranged between the pH 6.0-7.5 and 25-0 oC. In the case of AbPPO, pH 7.5-8.0 and 20-30 oC values were obtained.The KM and Vmax values of Lactarius salmonicolor and Agaricus bisporus PPO towards catechol, 4-methylcatechol and pyrogallol were determined by Lineweaver Burk method. The values Vmax/KM showed that LsPPO has the greatest reactivity towards 4-metil catechol and AbPPO has the greatest reactivity towards pyrogallol among the substrates used.Effects of some classical PPO inhibitors of glutathione, L-Cysteine, p-aminobenzene sulfonamide, oxalic acid, 2-mercapto ethanol, syringic aci and L-tyrosine were investigated on the activity of AbPPO using as a catechol substrate.The kinetic analysis showed that 2-mercapto ethanol, L-cystein, syringic asid, oxalic acid, glutathione and p-aminobenzene sulfonamide were uncompetitive inhibitors of LsPPPO while L-tyrosine was acted as a competitive inhibitor of LsPPO enzyme.According to kinetic results, 2-merkapto etanol, L-cystein, syringic acid and L-tyrosine were uncompetitive inhibitor of AbPPO enzyme while p-aminobenzene sulfanamide was the mixed type of inhibitor and oxalic acid was as a competitive inhibitor of AbPPO enzyme.KEY WORDS: Lactarius salmonicolor; Agaricus bisporus; polyphenol oxidase; affinity chromatography; inhibition; optimum pH and temperature.
Benzer Tezler
- Yabani ve yenilebilir bir mantar olan Macrolepiota mastoideada polifenol oksidaz enziminin karakterizasyonu
Characterization of polyphenoloxidase activities from a wild and ediple mushroom Macrolepiota mastoidea
YAKUP KOLCUOĞLU
- Bazı yabani mantarlardan polifenol oksidaz enziminin izolasyonu ve karakterizasyonu
Polifenol oksidase enzyme isolation and characterization from some wild mushrooms
EMİNE ŞAHİN
- Bazı yenilebilir mantar türlerinin sitotoksik, sitogenetik ve oksidatif etkilerinin araştırılması
Investigation of cytotoxic, cytogenetic and oxidative effects of some edible mushroom species
BÜŞRANUR GÜVEN
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyolojiKaramanoğlu Mehmetbey ÜniversitesiFen Bilimleri ve Teknolojileri Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ BUĞRAHAN EMSEN
PROF. DR. ABDULLAH KAYA
- Bazı yenilebilir mantar türlerinin biyolojik aktivitelerinin incelenmesi
Investigation of biological activities of some edible mushroom species
ASUMAN TÜREL
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyolojiKaramanoğlu Mehmetbey ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ABDULLAH KAYA
DR. ÖĞR. ÜYESİ BUĞRAHAN EMSEN
- Rhizopogon luteolus ve Ganoderma adspersum mantar türlerinden antioksidan ve antikolinesteraz aktivite gösteren bileşiklerin izolasyonları ve yapılarının aydınlatılması
Isolation and structure elucidatıon of compounds having antioxidant and anticholinesterase activities from Rhizopogon luteolus and Ganoderma adspersum mushroom species
GÜLSEN TEL ÇAYAN