Establishment of primary human skin cell culture and soft agar transformation assay
Birincil insan deri hücresi kültürünün kurulumu ve yumuşak agar dönüşüm tahlili
- Tez No: 245883
- Danışmanlar: DOÇ. NESRİN ÖZÖREN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2009
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
İnsan vücudunun en büyük organı olan deri, bir çok işlevli olan kapalı bir sistemdir. İşlevleri arasında olumsuz çevre şartlarına karşı fiziksel koruma sağlanması, dışarıdan gelen uyarıları kompleks duyu sistemiyle algılanması ve fiziksel korumanın yetersiz kaldığı durumlarda immünolojik tepkilerin tetiklenmesi önde gelenlerdir. Deri, bu görevleri yerine getirebilmesini, ileri derecede ince yapılandırılmış ve çok katmanlı oluşuna borçludur. Bu katmanlardaki bir çok hücre çeşidi bu sofistike yapının devamlılığını ve homeostazını sağlar. Bu çalışmada biz, epidermisten gelen birincil insan melanositleri ve keratinositleriyle, dermisten gelen birincil insan fibroblastlarının saflaştırma prosedürlerini ve kültür koşullarını optimize ettik. Bu üç hücre çeşidi özellikle kanser araştırmalarında önem taşır. Deri kanserleri çoğunlukla melanosit ve keratinositlerdeki bozukluklardan kaynaklanırken fibroblastlar ise dönüşüm deneylerinin- ki bu deneyler kanser araştırmalarının vazgeçilmez elementlerindendir- sıklıkla kullanılan hücre çeşididir. İnsan derisinden saflaştırdığımız bu birincil fibroblastları kullanarak, yumuşak agar koloni oluşum tahlilini oturttuk. Bu tahlil genetik olarak değiştirilmiş hücrelerin dönüşüm potansiyelini belirlemekte kullanılan önemli bir araçtır. Birincil fibroblastları dönüştürmek için, p53 protein anlatımını bir lentiviral transfeksiyon sistemi kullanarak düşürdük, sonradan da hRas veya cMyc onkogenlerinden birini kombinasyon olarak ekledik. Lentiviral sistemin transdüksiyon verimliliği yüzde doksanın üzerindeydi. shRNAya dayanan lentiviral vektörler kullanarak, tümör baskılayıcı p53 ve Bax genlerini başarılı bir şekilde işlevsizleştirdik. p53 anlatımı durdurulmuş ve onkogenik cMyc veya hRas eklenmiş birincil fibroblastların çıpa bağımsız bir şekilde yumuşak agarda koloni oluşturduklarını gözlemledik. Büyük olasılıkla da dönüşüm geçirmiş oldular. Daha sonra, tasarlayıp ürettiğimiz ASC baskılayıcı shRNA vektörünü, cMyc veya hRas onkogen kombinasyonlarında kullanarak, dönüşüm yapabilme özellikleri birincil insan fibroblastlarında ve melanositlerinde araştırılacaktır.
Özet (Çeviri)
The skin, the largest organ of the human body, is a complete closed system with various functions, including physical protection from the exterior hostile environment, sensing outside signals via its complex sensory system and initiating immunologic reactions when the initial physical protection fails. These functions are possible because of the highly elaborate structure of this multilayered organ, made up of various kinds of cells which maintain the homeostasis of skin. In this study, we optimized the isolation procedures and culture conditions of primary human melanocytes and keratinocytes from the epidermis and primary human fibroblasts from the dermis. These three cell types are especially important in cancer research. Skin cancers arise mainly from melanocytes and keratinocytes. However, fibroblasts are used widely in transformation assays, which are indispensible elements of cancer research. Using the isolated primary human fibroblasts, we established the soft agar colony formation assay, an important tool for determining the transformation potential of genetically altered cells. To transform primary fibroblasts we knocked-down p53 expression using a lentiviral transduction system and in combination we expressed oncogenic forms of hRas or cMyc. The transduction efficiency of the lentiviral system was over 90 per cent, and the tumor suppressor genes p53 and Bax were knocked down successfully using shRNA based lentiviral constructs. Colonies of potentially transformed primary fibroblasts grew in attachment independent manner in soft agar upon p53 knock-down in combination with either cMyc or hRas oncogene expression, implying a successful transformation. Next, the transformation ability of the newly generated anti-ASC shRNA vector will be tested in combination with the oncogenes cMyc or hRas using primary human fibroblasts and melanocytes.
Benzer Tezler
- Lezzetin somutlaştırılması: yöresel nörogastronomik unsurların duyularımızla ilişkisinin nörobilim teknikleri kullanılarak belirlenmesi
The embodiment of flavor: Determining the relationship between regional neurogastronomic elements and human senses using neuroscientific techniques
MEHMET NECATİ ERKEM
Doktora
Türkçe
2025
Gastronomi ve Mutfak SanatlarıAtatürk ÜniversitesiTurizm İşletmeciliği ve Otelcilik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NESLİHAN SERÇEOĞLU
- Assessing the impact of truth commissions in human rights development
İnsan hakları gelişiminde hakikat komisyonlarının etkisinin değerlendirilmesi
MERYEM ESRA VAROL
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
SosyolojiAnkara Sosyal Bilimler ÜniversitesiUluslararası İlişkiler Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ KADİR ONUR UNUTULMAZ
- Tıbbi müdahalelerde idarenin hizmetin kuruluşundan doğan sorumluluğu
The responsibility of the administration arising from the establishment of the service in medical interventions
BURCU TURAN
- Şanlıurfa ilinde iklim değişikliği sıtma-vektör organizma tabanlı coğrafi bilgi sistemi oluşturulması
Establishment of geographical information system (GIS) based on climate change-malaria-vector organism in Şanlıurfa city
ÜLKÜ NİHAN YAZGAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2003
BiyolojiHacettepe ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SELİM SÜALP ÇAĞLAR