Termofilik bakterilerden lipaz üretimi ve karakterizasyonu
Production and characterization of lipase by thermophilic bacteria
- Tez No: 255159
- Danışmanlar: PROF. DR. İSMAİL KARABOZ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Termofilik aktinomisetler, Termostabil lipaz, Lipaz üretimi ve karakterizasyonu, Thermophilic actinomycetes, Thermostable lipase, Lipase produciton and characterization
- Yıl: 2009
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 214
Özet
Bu çalışmada değişik kaynaklardan elde edilen 104 termofilik bakteri izolatının ekstraselüler termostabil lipaz üretim kapasiteleri kalitatif olarak taranmıştır. Bunlardan sadece 26'si Rhodamin B Agar'lı modifiye Thermoactinomyces besiyerinde pozitif sonuç vermiştir ve potansiyel lipaz üreticisi olarak izolat EFTL17 bundan sonraki çalışmalar için seçilmiştir. Pozitif sonuç veren izolatlardan en yüksek miktarda ışıma yapanı daha sonraki lipaz üretim çalışmaları için seçilmiştir. İzolatın tanılaması 16S rRNA gen bölgesine göre yapılmış ve Gen Bankası'ndaki baz dizisi çakışmasına göre Themobifida fusca EFTL17 olarak adlandırılmıştır. Kantitatif ekstraselüler lipaz aktivitesi spektrofotometrik yöntemle ölçüldü 5. günde lipaz aktivitesi 558,7 U/L bulunmuştur. Ekstraselüler lipaz üretimi üzerine çeşitli karbon, organik, inorganik azot kaynakları, ticari yağlar, aşılama oranları, sıcaklık, indükleyici madde oranlarını ve üretim ortam pH'sının etkisi incelenmiştir.Themobifida fusca EFTL17 suşuna ait ekstraselüler termostabil lipaz 10 kDa NMWC ultrafiltrasyon membran ile kısmi saflaştırılmıştır.T. fusca'dan üretilen ve kısmi saflaştırılması yapılan lipaz enziminin aktivitesi üzerine sıcaklık, pH, metal iyonları, inhibitörler, deterjanlar ve organik çözgenlerin etkisi araştırılmıştır. Elde edilen enzimin 25 ? C'de inaktif oldukları, 55-85 ? C arasında aktif oldğu, optimum aktiviteyi 65 ? C ve 7,2 pH'da gösterdiği; ayrıca pH 5,0 ? 9,0 aralığında aktif olduğu bulunmuştur. Hg2+, Zn2+, Ni2+, Fe3+, Mn2+, Li2+ gibi ağır metaller lipaz aktivitesini % 55 ? 68 oranında azaltmışlardır. Cu2+ % 26 oranında, Co2+ ise ancak % 10 oranında azaltmıştır. % 0,1 (ağırlık/hacim) konsantrasyonlarında Tween 80, Tween 20, SDS ve Brij 35'in % 45 ? 68 oranında inhibe ettiği saptanmıştır. Ayrıca metanol, dimetilsülfoksit, etanol, izopropanol, aseton gibi organik çözgenlerde lipaz aktivitesinde artışa neden olmuşlardır. Kloroform % 86, hekzan % 60, toluen ise % 36 oranında lipaz aktivitesinde bir azalmaya neden olduğu belirlenmiştir.Kısmi saflaştırılan Thermobifida fusca EFTL17 lipazının aktivitesi üzerine etkili koşullar dikkate alındığında bu enzimin termostabil olduğu ve organik çözgenlerde aktivitesinin iyi olması onun biyoteknolojik uygulamalar için bir potansiyele sahip olduğunu göstermektedir.
Özet (Çeviri)
In this study, extracellular thermostable lipase production capacity of 104 thermophilic bacteria, isolated from various sources, were tested. Only 26 of these thermophilic bacteria gave positive result in modified Thermoactinomyces medium with Rhodamine B and isolate EFTL17 was selected as a lipase producer for further studies. Identification of the microorganism has done by its 16S rRNA gene sequencing and it was named Themobifida fusca EFTL17 according to the GeneBank sequence comparison studies. Quantitative extracellular lipase activity was estimated spectrophotomertrically and the maximum lipase activity was observed with 558,7 U/L at fifth day. The effects of various carbon and nitrogen sources, different commercial oils, different inoculation rates, different temperatures, percentages of added inducer and different production media for extracellular lipase activity was observed.Extracellular thermostable lipase from Thermobifida fusca EFTL17 was partially purified with ultrafiltration by using 10 kDa ultrafiltration membrane system.Partially purified lipase from T. fusca EFTL17 was most active at 65 ? C and pH 7.2 Enzyme was found to be stable at 55-85 ? C and at pH 7,2. Heavy metals such as Hg2+, Zn2+, Ni2+, Fe3+, Mn2+, Li2+ were reduced lipase activity at the range of 55-68 %. Lipae acivity was inhibited with Tween 80, Tween 20, SDS and Brij 35 (45-68 %). The effect of organic solvents on lipase activity was also invastigated. Methanol, DMSO, ethanol, isopropyl alcohol and acetone were increased lipase activity between 100 and 120 %. However it was determined that hexan, chloroform and toluen were decreased lipase activity 60 %, 86 % and 36 %, respectively.According to the lipase characteristics of T. fusca EFTL17 it is possible to conclude that it is a thermostable enzyme and has good activity in organic sovents, which show its potential for biotechnological applications.
Benzer Tezler
- Lokal olarak izole edilen Anoxybacillus gonensins UF7 ile lipaz enzim üretimi
Lipase enzyme production by locally isolated Anoxybacillus gonensins UF7
FATMA ALTINOK
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyoteknolojiAtatürk ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AHMET ADIGÜZEL
- Determination of extracellular hydrolytic enzyme capabilities of some anoxybacillus isolated from hot spring environments
Kaplıcalardan izole edilen bazı anoksibasillerin ekstrasellüler hidrolitik enzim kapasitelerinin belirlenmesi
WIDAD HASSAN YARWAIS JAF
Yüksek Lisans
İngilizce
2017
BiyolojiSiirt ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. MEHMET EMRE EREZ
- Bazı probiyotik bakterilerin wagashi (peulh) peyniri üretiminde destek kültür olarak kullanımı
Use of some probiotic bacteria as adjunct culture in the production of wagashi (peulh) cheese
EUDES LANDRY PATRICE SEDO ANIHOUVI
- Bazı ekstrem bölgelerden anaerobik bakterilerin izolasyonu, identifikasyonu ve endüstride kullanım olanakları
Başlık çevirisi yok
MELİKE BALK
Doktora
Türkçe
1998
Gıda MühendisliğiAnkara ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEDAT DÖNMEZ
- Termofilik bakterilerden lipaz üreticisi suşların belirlenmesi, enzimin saflaştırılması, karakterizasyonu ve biyoteknolojik uygulanabilirliğinin araştırılması
Determination of lipase producer from thermophilic bacteria and purification of enzyme, characterization and investigation of biotechnological applicability
İKRA ÖZKAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
GenetikAtatürk ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AHMET ADIGÜZEL