Geri Dön

Possible involvement of apoptosis during neural transdifferentiation of bone marrow derived human mesenchymal stem cells by N3 cytokine combination

Kemik iliği kökenli insan mezenkimal kök hücrelerinin N3 sitokin kombinasyonu ile nöral farklılaşması boyunca apoptozun olası ilişkisi

PDF İndir

  1. Tez No: 283710
  2. Yazar: GÜLSÜM ARIKAN
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. SEVİM IŞIK
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2011
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Fatih Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 80

Özet

Apoptoz, normal işlevli insan ve hayvan hücrelerinde, hücre sağlığının durumu veya yaşı ve durumu gerektiğinde hücre çekirdeği tarafından sinyallenen programlı bir hücre ölümüdür. Apoptoz, in vivo'da gelişen organların şekillenmesi ve hücresel iç dengenin düzenlenmesinde önemli bir araç olmasına rağmen in vitro'daki nöral farklılaşma için istenmeyen bir süreçtir ve nöral tetikleyiciler buna sebep olabilir. Kök hücreler, sinir hücrelerini de içeren farklı hücre türlerine trans-farklılaşabilir. Kök hücrelerin trans-farklılaşma süreci apoptoz ve sitotoksisite açısından nöral tetikleyiciler tarafından etkilenebilir. Bu çalışmada insan kemik iliği mezankimal kök hücreleri (iMKH) üzerinde N3 sitokin kombinasyonuyla olan nöral farklılaşmanın sitotoksik ve apoptotik etkileri çalışıldı. Yakın zamandaki çalışmalara göre, topoizomeraz IIß (topo IIß) nöral farklılaşmada rol alabilmektedir. Kök hücrelerin trans-farklılaşma süreci primer nöron hücrelerin farklılaşmasından daha farklıdır. Bunun için, topo IIß'nın kök hücrelerin transdifferensiyasyon işleminde primer hücrelerin farklılaşmasındakinden farklı davranması muhtemeldir. Buna dayanarak, Lipofectamine RNAiMAX transfeksiyon maddesinin güvenilirliğine açıklık kazandırmak amacıyla nöral farklılaşmada topo IIß'ya özel kısa interferanslar (siRNAs) ile beraber Lipofectamine RNAiMAX transfeksiyon maddesi de kullanıldı. Daha sonra, Lipofectamine RNAiMAX transfeksiyon maddesinin iMKH'ler üzerinde sitotoksisite ve apoptoz etkisi incelendi. Deneysel düzenlenme göz önüne alınarak iMKH'ler farklılaşma için N3 sitokin kombinasyonu ile indüklendi ve siRNA transfeksiyonu gerçekleştirildi. Gerçek Zamanlı Hücre Analizi (RTCA) ve apoptoz deneyleri uygulandı. N3 sitokin kombinasyonu ile nöral farklılaşmadan sonra, iMKH'lerin N3 sitokin kombinasyonu ile nöral farklılaşma verimi morfolojideki değişikliklere göre yaklaşık olarak %70±10 bulundu. siRNA ile baskılanan nöral hücrelerde akson uzunluğu siRNA uygulanmayan hücrelere göre daha kısadır (55±5). Ayrıca, iMKH'ler Annexin ve Caspase 3 testleri ile tanımlandığı gibi 2nci, 6ncı ve14üncü günde apoptoza girmedi. Fakat 14üncü günde %10±2, %13±1 ve %15± nekrotik hücreler sırasıyla indüksiyon, transfeksiyon ve indüksiyonla beraber transfeksiyon grubunda gözlemlenmiştir. 2nci ve 6ncı günde önemsiz sayıda hücreler, nekrotik bir işaretleyici (marker) olan Sytox Green ile gözlendiği üzere nekroza girmişlerdir.

Özet (Çeviri)

Apoptosis is the programmed cell death as signalled by the nuclei in normally functioning human and animal cells when age or state of cell health and condition dictates. Although apoptosis is an important tool to shape developing organs and for maintaining cellular homeostasis in vivo, for neural differentiation in vitro it is an undesirable process and it may be caused by neural inducers. Stem cells can transdifferentiate into different cell types including neuronal cells. The transdifferentiation process of stem cells might be affected by neural inducers in terms of apoptosis and cytotoxicity. In this study, we investigated the cytotoxic and apoptotic effects of neural differentiation by N3 cytokine combination (Neurobasal Medium, B-27 Supplement, dbcAMP, IBMX, hEGF, rhFGF, FGF-8, rhBDNF and L-Glutamine) on bone marrow human mesenchymal stem cells (hMSCs). According to recent studies, topoisomerase IIß (topo IIß) may play a role in neuronal transdifferentiation. The transdifferentiation process of stem cells appears to be different substantially from the terminal differentiation of granule neurons. Therefore, the functional significance of topo IIß may also be different in these differentiation systems. So, topo IIß specific small interference RNAs (siRNAs) with Lipofectamine RNAiMAX transfection reagent was also used during neural differentiation to investigate the safeness of Lipofectamine RNAiMAX transfection reagent. Then, the cytotoxicity and cell proliferation effect of Lipofectamine RNAiMAX transfection reagent on hMSCs was tested. Considering the experimental layout, hMSCs were induced by N3 cytokine combination for differentiation and siRNA transfection was performed. Next, Real Time Cell Analysis (RTCA) and apoptosis assays were carried out. After neural differentiation by N3 cytokine combination, neural differentiation efficiency of hMSCs by N3 cytokine combination was found nearly 70±10% according to changes in morphology. The axon length in siRNA transfected neural cells was shorter (55±5) than untransfected neural cells. Next, hMSCs did not undergo apoptosis at the 2nd, 6th and14th day as determined by the Annexin and Caspase 3 assays. However, at the end of the 14th day, 10±2%, 13±1% and 15±4% necrotic cells were indicated in induction, transfection and transfection with induction group, respectively. At the 2nd and 6th day insignificant percentage of cells entered necrosis as monitored by the necrotic marker Sytox Green.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    894472

    Impacts of metformin on neocortical development, neuronal differentiation, and synaptic plasticity: Involvement of P35/CDK5 signaling

    Metforminin neokortikal gelişim, nöronal farklılaşma ve sinaptik plastisite üzerindeki etkileri: P35/CDK5 sinyal yolunun potansiyel etkileşimi

    MUHAMMET ÖNER

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2024

    Farmasötik ToksikolojiNational Chung Hsing University

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HO LİN

  2. Tez No

    302693

    Mezyal temporal lob epilepsisinde apoptoza yol açan genlerin ekspresyonlarının analizi

    Investigating the expression of apoptosis related genes in mesial temporal lobe epilepsy

    EMRAH YÜCESAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    Genetikİstanbul Üniversitesi

    Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. UĞUR ÖZBEK

  3. Tez No

    203105

    Renal iskemi reperfüzyon hasarında eritropoietinin koruyucu etkisine k-atp kanallarının katılımı

    Involvement of ATP Dependent K Channels To Protective Role Of Eritropoietin During Renal Ischemia Reperfusion Injury

    NURAY YAZIHAN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    FizyopatolojiAnkara Üniversitesi

    İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜZİN ÖZELÇİ KAVAS

  4. Tez No

    171914

    Katepsin K, sistain C ve survivin serum düzeylerinin koroner arter aterosklerozu ile ilişkisi

    Association of cathepsin K, cystatin C and survivin serum levels with coronary atherosclerosis

    HATİCE AYGÜL ÖZKAYA KARA

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2006

    BiyokimyaDokuz Eylül Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. HÜRAY İŞLEKEL

  5. Tez No

    786624

    Investigation of gasdermin d's role in cancer treatment and SARS-CoV-2 infection

    Gasdermin D proteininin kanser tedavileri ve SARS-CoV-2 enfeksiyonundaki rolünün belirlenmesi

    GHITA JEKKI

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    BiyomühendislikBahçeşehir Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ ELİF EREN

Geri Dön