Helicobacter pylori cagA gene diversity: Effect on the gastric epithelial cells activities
Helicobacter pylori cagA gen çeşitliliğinin mide epitel hücrelerine etkisi
- Tez No: 290283
- Danışmanlar: DOÇ. DR. BARIK SALİH
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Mikrobiyoloji, Microbiology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2011
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Fatih Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 89
Özet
Helicobacter pylori enfeksiyonu gastrite neden olup bu durum peptik ülsere ve hatta mide kanserine yol açabilmektedir. cag patojenik adasının (cagPAI) patojenezde önemli bir rol oynadığı gösterilmiş fakat mide ülserli Türk hastalardan izole edilen suşlardaki cagPAI genlerinin fonksiyonları hakkında yeterli bilgi bulunmamaktadır. Aynı zamanda sitotoksin ilişkili gen A'nın (cagA) IL-8 salgılanması ve in vitro ortamda bulunan mide adenokarsinoma hücrelerindeki (AGS) morfolojik değişikliklerle alakalı rolü hala netlik kazanmış değildir.Bizim bu çalışmada in vitro koşullarda H. pylori ile AGS epitel hücrelerini enfekte ederek hücreler üzerinde ne gibi değişiklilerin olduğunu, H. pylori'de bulunan cag patojenik adasındaki virulent genlerin (cagT, cagM, cagE, cagA) ve cagA EPIYA motiflerinin IL-8 salınımında ne gibi bir etkisinin olduğunu ve AGS hücrelerinde sinekkuşu fenotipinin oluşumunu gözlemlemeyi amaçlamaktayız.Bu çalışmada İstanbul Eğitim ve Araştırma Hastanesi'nin endoskopi ünitesinde tedavi gören 53 tane hastanın mide antrum bölgesinden biyopsiler alınarak H. pylori'nin var olup olmadığına hızlı üre testi, kültüre ekim ve PZR yöntemleri ile bakıldı. 53 hastadan 38 tanesinin (16 Gastrit, 13 Duodenal ülser ve 9 Mide ülseri) H. pylori ile enfekte olduğu saptandı. H. pylori'nin varlığı daha sonra PZR yöntemi ile bu bakteride bulunan üreaz-C geninin tespiti sonucu doğrulandı. cagT, cagM, cagE genlerinin ve cagA 3' değişken bölgesinin EPIYA A, B, C ve D dizilerinin yine bu yöntemle amplifikasyonu yapıldı. AGS hücreleri H. pylori ile birlikte kültür edilerek, IL-8 salınımı belirlendi ve morfolojik değişimler gözlendi. Tüm örnekler için IL-8 konsantrasyonu OptEIA human IL-8 ELISA kit kullanılarak ölçüldü.Tüm bu izolatlardan %42,1'i tam (intact), %39,5'i kısmi eksik (partial deletions) ve %18,4'ü tamamen eksik (complete deletions) cagPAI olarak saptandı. Tüm suşların %76'sında cagA geninin varlığı tespit edildi. Bunlarında sırasıyla %58,7'sinin EPIYA-ABC, %34,5'nin ABCC ve %3,4'ünün ABCCC ve ABCCCCC olduğu bulundu. Gastrit hastalarında cagPAI' daki eksik genlerin tespitinde cagT ve cagM genlerinin eksikliğinin diğer iki gene oranla daha fazla olduğu belirlendi ve öte yandan duodenal ülser hastalarında cagM geninin eksikliğinin diğer tüm genlere nispeten daha fazla olduğu tespit edildi. Mide ülseri hastalarındaki cagT, cagM ve cagE genlerinin eksikliğinin gastrit ve duodenal ülser hastalarına nazaran daha yüksek olduğu tespit edilmiştir.H. pylori'nin AGS ile enfeksiyonu sonucu 3. saatte morfolojik değişimlerin başladığı ve 48. saatin sonunda sinekkuşu fenotipinin oluştuğu gözlemlendi. EPIYA-ABCCC motiflerine sahip izolatların EPIYA-ABC ve EPIYA-ABCC'ye kıyasla enfekte edilmiş AGS hücrelerinin morfolojik olarak tamamen değişimlerine neden olduğu tespit edildi.cagA-pozitif suşların cagA-negatif suşlara kıyasla önemli derecede IL-8 salınımıyla ilişkisi olduğu saptandı. EPIYA-ABCC motiflerine sahip gastrit, duodenal ülser ve mide ülseri hasta suşlarının AGS hücreleri ile enfeksiyonu sonucunda ortamdaki IL-8 konsantrasyonunun EPIYA-ABC motiflerine sahip suşlara oranla çok daha önemli derecede fazla olduğu tespit edildi. Buna ek olarak duodenal ülser hastalarından EPIYA-ABCCC ve EPIYA-ABCCCCC motiflerine sahip olanların EPIYA-ABC motiflerine sahip olanlara nazaran çok daha önemli derecede ortamdaki IL-8 konsantrasyonunu arttırdığı saptandı. Aynı zamanda tam cagPAI (intact) genlerine sahip olanların kısmi eksik (partial deletion) olanlara nispeten IL-8 salgılanmasını daha fazla tetiklediği belirlendi.Sonuç olarak, gastrit, duodenal ülser ve mide ülseri hastalarından izole edilen tam cagPAI'ya sahip suşların korunmadığı bulundu. cagA geninin varlığı AGS hücrelerinin IL-8 salgılanmasını tetiklemede ve hücrelerin morfolojik değişiminde önemli bir rol oynadığı gösterildi. EPIYA-C motiflerinin sayısının artmasının belirgin bir şekilde sinekkuşu fenotipi oluşumunu etkilediği görüldü. Mide ülseri veya gastrit hastalarına nazaran duodenal ülser hastalarında cagPAI genlerinin varlığının patojenik açıdan ciddi bir rol oynadığı saptandı. Çoğunlukla cagT ve cagM genlerinin eksikliğinin AGS hücrelerinde morfolojik değişikliği tetiklemediği gözlendi.
Özet (Çeviri)
Helicobacter pylori infection causes gastritis that might progress to peptic ulceration and even gastric cancer. The cag pathogenicity island (cagPAI) was shown to play an important role in pathogenesis, however little is known about the functions of the cagPAI genes in Turkish patients with peptic ulcerations. Also the role of the cytotoxin-associated gene (cagA) in the induction of IL-8 and morphological changes of the AGS cells in vitro is still not very well defined.In this study, we aimed to investigate the effect of H. pylori infection on the function and morphological changes of the AGS gastric epithelial cell line in vitro, to determine the role of the cagPAI virulent genes (cagT, cagM, cagE, cagA) and the cagA EPIYA motifs on the induction of IL-8 secretion and the formation of the hummingbird phenotype.Fifty-three patients attended the endoscopy unit at the Istanbul Teaching Hospital were enrolled in this study. Gastric biopsies from the antrum for rapid urease test (RUT), culture and PCR were collected to detect the presence or absence of H. pylori. Of the 53 patients 38 (Gastritis=16, Duodenal ulcers=13, Gastric ulcer=9) (16 females) were found infected with H. pylori. The presence of H. pylori was further confirmed by PCR using primers to detect the urease-C gene. Amplification of the cagT, cagM, cagE genes and the cagA 3? variable region and the EPIYA motif encoding sequences A, B, C and D was also done. The AGS cell line was used for coculture study, detection of IL-8 secretion and morphological changes. The concentration of IL-8 in each sample was measured by using the OptEIA human IL-8 ELISA kit.Among all the isolates studied we found that 42.1% had intact, 39.5% with partial deletions and 18.4% had absence of the cagPAI. The possession of the cagA gene was found in 76% of the strains examined. Of these 58.7% had the EPIYA motifs ABC, 34.5% ABCC and 3.4% with ABCCC and ABCCCCC respectively. The detection of deletions in the cagPAI showed that isolates from gastritis patients had higher deletion frequencies of the cagT and cagM genes than the other 2 genes, while isolates from DU patients had higher deletion frequencies of the cagM gene over the other genes. Deletion frequencies of the cagT, cagM and cagE genes were higher in isolates from GU patients as compared to gastritis and DU patients.Coculture of the AGS cells with H. pylori resulted in morphological changes that started with elongations at 3h after infection and formed the hummingbird phenotype at 48h. Isolates with the EPIYA-ABCCC caused complete morphological changes of the infected AGS cells at 48h when compared to those of the EPIYA-ABCC and the EPIYA-ABC types.The cagA positive strains had significant association with IL-8 secretion when compared to cagA negative strains. The concentrations of IL-8 were significantly higher when the AGS cells infected with isolates from gastritis patients, DU and GU patients with EPIYA-ABCC than those of the EPIYA-ABC. In addition, isolates from DU patients with EPIYA-ABCCC and EPIYA-ABCCCCC had significantly higher association with increased concentrations of the IL-8 than those with EPIYA-ABC. Also isolates from gastritis patients, DU and GU patients with intact cagPAI genes induced higher IL-8 secretion than those with partial deletions.In conclusion, we found that the intactness of the cagPAI in isolates from gastritis patients, DU and GU patients is not conserved. The possession of the cagA gene appeared to play an important role in the induction of IL-8 and the morphological changes of the AGS cells. An increase in the number of the EPIYA-C motifs had noticeable effect on the formation of the hummingbird phenotype. The possession of the cagPAI genes was also found to play an important role in the pathogenesis of DU but not GU or gastritis. Higher deletion frequencies of the cagT and cagM did not seem to affect the induction of morphological changes of the AGS cells.
Benzer Tezler
- Üst gastrointestinal sistem (GİS) karsinomalı ve kronik gastritli hasta gastrik biyopsi örneklerinden hazırlanmış parafin blok örneklerinde h.pylori prevalansı ile h. pylori cagPAI ve vacA genotiplerinin histopatolojik tanı ile korelasyonunun belirlenmesi
Determination of h. pylori prevalence and correlation between histopathologic diagnosis and h. pylori cagpai and vaca genotypes in paraffin embedded biopsy samples prepared from patients with upper gastrointestinal (gi) carcinoma and chronic gastritis
ALI BAHADORI
Doktora
İngilizce
2016
MikrobiyolojiÇukurova ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FATİH KÖKSAL
- Helicobacter pylori cagA and vacA gene variability in dyspeptic patients in Turkey
Türkiye'de bulunan dispeptik hastalarda Helicobacter pylori cagA ve vacA gen varyasyonu
HÜSEYİN SARIBAŞAK
- Qualitative and quantitative analysis of Helicobacter pylori analytes in sera of infected subjects
Helicobakter pylori enfekte hastaların serumlarındaki analitlerin kantitatif ve kalitatif analizleri
DUYGU YAZICI
- Dispeptik hastalardan izole edilen helıcobacter pylorı suşlarının antijenik heterojenitesinin belirlenmesi
Determination of the antigenic heterogeneity of helicobacter pylori strains isolated from patients with dyspepsia
NESLİHAN SAVAŞKAN
Doktora
Türkçe
2024
Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik MikrobiyolojiDokuz Eylül ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖZLEM YILMAZ
- Endoskopik olarak duodenal ulkus ve duodenit saptanan hastalarda helıcobacter pylorı cag-a pozitifliği
Helicobacter pylori cag-a positivity in patients with endoscopic detected duodenal ulcus and duodenitis
HAKAN GÜVELİ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2001
GastroenterolojiSağlık BakanlığıDahiliye Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. YILDIRIM ÇINAR