Glutatyon S-transferaz enziminin gökkuşağı alabalık (Oncorhynchus mykiss) eritrositlerinden saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı kimyasalların etkilerinin araştırılması
Purification and characterization of Glutathione S-transferase from rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) eriythrocyte and effects of some chemicals on enzyme activity
- Tez No: 299791
- Danışmanlar: PROF. DR. ÖMER İRFAN KÜFREVİOĞLU
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2011
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 103
Özet
Bu çalışmada, gökkuşağı alabalığı eritrositlerinden glutatyon S-transferaz (E.C 1.8.1.7.; GST) enzimi glutatyon-agaroz afinite kromatografisi kullanılarak 16,54 EÜ x mg-1 protein spesifik aktiviteyle ve %59 verimle 11.026 kat saflaştırıldı.Saflaştırılan enzimin saflığını kontrol etmek ve alt birim molekül kütlelerini belirlemek amacıyla SDS-poliakrilamid jel elektroforezi yapıldı ve tek bant elde edildi. Alt birim molekül kütlesi yaklaşık 23 kDa olarak belirlendi. Eritrosit GST enziminin tabii halinin molekül kütlesi Sephadex-G 100 jel filtrasyon kolonu kullanılarak yaklaşık 47 kDa olduğu tespit edildi. Eritrositlerden saflaştırılan GST için optimum iyonik şiddet 10 mM K-fosfat tamponu olarak belirlendi. Enzim için optimum pH, stabil pH ve optimum sıcaklık sırasıyla 7,3, 7,3, 300C olarak bulundu. Saf enzimin KM ve Vmax değerleri Lineweaver-Burk grafiklerinden faydalanılarak GSH substratı için KM 0,0395, Vmax 0,0328 EÜ/ml; CDNB substratı için KM 0,259, Vmax 0,0655 EÜ/ml olarak hesaplandı. Saflaştırılan GST enzimi üzerine in vitro inhibisyon etkisi gösteren sefuroksim sodyum, gentamisin sülfat, amikasin sülfat antibiyotikleri ve Ag+, Cd+2, Cr+2 ve Mg+2 metal iyonları için IC50 değerleri ve Ki sabitleri hesaplanarak inhibisyon tipleri belirlendi.
Özet (Çeviri)
In the present study, Glutathione S-transferase (E.C 1.8.1.7.; GST) enzyme was purified from rainbow trout (RT) erythrocyte a specific activity of 16,54 and a yield of 38% and 11026-fold respectively using glutathione-agarose affinity gel chromatography. To check the purity of the purified enzyme and to determine the subunit molecular masses of the SDS-polyacrylamide gel electrophoresis was performed and a single band was obtained and Mw of approx. 23 kDa for eritrochyte. The molecular weight of native of erythrocyte GST enzyme was estimated to be approx. 47 kDa by Sephadex-G 100 gel filtration chromatography, respectively. Optimum ionic strengths for the GST from erythrocyte were obtained as 10 mM K-Phosphate buffer. Optimal pH, stable pH, optimal temperature were determined as 7,3, 7,3, 300C respectively, Also KM and Vmax values were determined for enzyme; KM for GSH subsrate: KM 0,0395, Vmax for GSH subsrate: 0,0328 EÜ/ml; KM for CDNB subsrate: 0,259, Vmax for CDNB subsrate: 0,0655 EÜ/ml. After that, in vitro inhibitory effects of some antibiotics, including cefuroxime sodium, gentamicine sulfate, amikacin sulfate and some metal ions, incorporating Ag+, Cd+2, Cr+2 and Mg+2 were evaluated. IC50 values and Ki constants of corresponding antibiotics and metal ions were calculated, and inhibition types were determined.
Benzer Tezler
- Glutatyon S-transferaz enziminin tavuk taşlığından saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of glutathione S-transferase enzyme from chicken gizzard
RAMAZAN OKAN
- Glutatyon s-transferaz enziminin sığır eritrositlerinden saflaştırılması ve bazı biyokimyasal özelliklerinin incelenmesi
Purification of glutathione s-transferase from bovine erythrocytes and research of some biochemical properties
SERDAR GÜVERCİN
- Glutatyon S-transferaz enziminin Van Gölü balığı (Chalcalburnus tarichi pallas) karaciğerinden saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı metal iyonlarının enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi
Purification and characterization of glutathione S-transferase from the liver of Van Lake fish and investigation of some metal ions' effects on enzyme activity
MUHAMMET SERHAT ÖZASLAN
- Glutatyon s -transferaz enziminin kaz (Anser Anser Domesticus) karaciğerinden saflaştırılması, karakterizasyonu, bazı kimyasalların ve metallerin enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi
Glutathion s-transferase enzymepurification from the liver of goose (Anser Anser Domesticus),investigation of characterization, effects of somechemicals and metals on enzyme activity
YEŞİM SAYIN
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyokimyaAğrı İbrahim Çeçen ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. RAMAZAN DEMİRDAĞ
DOÇ. DR. EMRAH YERLİKAYA
- Glutatyon-s-transferaz enziminin tavuk eritrositlerinden saflaştrılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of GST from chicken erythrocyte
DEMET KAVRAYAN