Glutatyon S-transferaz enziminin Van Gölü balığı (Chalcalburnus tarichi pallas) karaciğerinden saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı metal iyonlarının enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi
Purification and characterization of glutathione S-transferase from the liver of Van Lake fish and investigation of some metal ions' effects on enzyme activity
- Tez No: 352153
- Danışmanlar: PROF. DR. MEHMET ÇİFTCİ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Kimya, Biochemistry, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Van gölü balığı, karaciğer, glutatyon S-transferaz, saflaştırma, karakterizasyon, metal, inhibisyon, Van fish, liver, Glutathione S-transferase, purification, characterization, metal, inhibition
- Yıl: 2014
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 89
Özet
Glutatyon S-transferaz (E.C.2.5.1.18.: GST) enzimi Van Gölü Balığı karaciğerinden saflaştırıldı. Saflaştırma işlemi homojenatın hazırlanması ve Glutatyon Agaroz afinite kromatografisi olmak üzere 2 basamakta gerçekleştirildi. 29,304 EÜ/mg protein spesifik aktivitesine sahip olan GST enzimi %37,36 verimle, 316,11 kat saflaştırıldı. Enzim aktivitesi spektrofotometrik olarak 340 nm'de Habig metoduna göre ölçüldü. Enzimin tabii molekül kütlesi jel filtrasyon kromatografisi ile 62,35 kDa, alt birimlerinin molekül kütlesi SDS-PAGE ile sırasıyla 28 kDa ve 33,8 kDa olarak bulundu. Enzim için optimum pH Tris/HCl tamponunda pH 7,8, optimum iyonik şiddet 100 mM Tris/HCl, optimum sıcaklık 30ºC olarak stabil pH ise fosfat tamponunda pH 5,5 olarak bulundu. Ayrıca CDNB için KM sabiti 0,891 mM ve Vmax değeri 1,245 EÜ/ml olarak; GSH için ise, KM sabiti 0,060 mM ve Vmax değeri 0,562 EÜ/ml olarak tespit edildi. Van gölü balığı karaciğeri GST enzimi üzerine bazı metal iyonlarının etkileri incelendi ve inhibisyon etkisi gösteren Ag+, Cu+2, Cd+2, Co+2 iyonlar için Lineweaver-Burk grafikleri yardımıyla Ki sabitleri hesaplandı ve inhibisyon tipleri belirlendi.
Özet (Çeviri)
Glutathione S-transferase (E.C. 2.5.1.18.: GST) was purified from the liver of Van lake Fish. The purification consisted of two steps; preparation of homogenate, and glutathione-agarose affinity gel chromatography. GST enzyme having a specific activity of 29.304 EU/ml proteins, was purifield 316.11 times with the yield of %37.36. Enzymatic activity was spectrofotometrically measured according to Habig method at 340 nm. Molecular weight of enzyme was determined by gel filtration chromatography as 62.35 kDa and molecular weight of subunits were determined by SDS-PAGE as 28 kDa and 33.8 kDa. Optimal pH, optimal ionic intensity, optimal temperature and stable pH were determined as 7,8 at Tris/HCl, 100 mM, 30°C and pH 5,5 at phosphate buffer respectively. In addition KM and Vmax values were determined for CDNB as 0.891 mM and 1.245 EU/ml; and for GSH substrates these values determined as 0.060 mM and 0.562 EU/ml. respectively. Moreover, effects of some metal ions on GST enzyme activity of the liver of Van Lake Fish examined. For metal ions which showed inhibition effects such as Ag+, Cu2+, Cd2+, Co2+ ,Ki constants and inhibition types were found out by means of Lineweaver-Burk graphs.
Benzer Tezler
- Glutatyon S-transferaz enziminin Van Gölü inci kefali balığı (Chalcalburnus tarichi ) solungacından saflaştırılması, karakterizasyonu, bazı metal ve pestisitlerin enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi
Purification and characterization of glutathione S transferase from pearl mullet's gill of Van Lake's fish (Chalcalburnustarichi), examination of somemetals and pesticidies' effects of enzyme activity
YAKUP ZARİÇ
Yüksek Lisans
İngilizce
2018
BiyokimyaAğrı İbrahim Çeçen ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. RAMAZAN DEMİRDAĞ
YRD. DOÇ. DR. EMRAH YERLİKAYA
- Glutatyon S-transferaz enziminin tavuk karaciğerinden saflaştırılması karakterizasyonu ve bazı pestisitlerin enzim aktivitesi üzerine etkisi
Characterization of glutathion S-transferase enzyme from chicken liver and the effect of some pesticides on enzyme activity
HAKAN YILMAZ
- Purification and characterization glutathione S-transferase enzyme from japanese quail (Coturnix coturnix Japonica) heart
Glutatyon S-transferaz enziminin bıldırcın (Coturnix coturnix Japonica) yürek dokusundan saflaştırılması ve karakterizasyonu
BARZAN MIRZA AHMED AHMED
- Glutatyon S-transferaz enziminin gökkuşağı alabalık (Oncorhynchus mykiss) eritrositlerinden saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı kimyasalların etkilerinin araştırılması
Purification and characterization of Glutathione S-transferase from rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) eriythrocyte and effects of some chemicals on enzyme activity
VEYSEL ÇOMAKLI
- Glutatyon s-transferaz enziminin koyun dalak dokusundan saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of glutathione s-transferase enzyme from sheep spleen tissue
FATİH YÜKSEL
