Purification and characterization of Heterologous laccase isolated from white-rot fungi Pycnoporus sanguineus in saccharomyces cerevisiae
Pycnoporus sanguineus?un lakkaz izoenziminin Saccharomyces cerevisiae?de heterolog ekspresyonu sonrası saflaştırılması ve karakterizasyonu
- Tez No: 310689
- Danışmanlar: PROF. DR. CANDAN TAMERLER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Genetik, Biotechnology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2011
- Dil: İngilizce
- Üniversite: İstanbul Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 107
Özet
Bu çalışmada, Pycnoporus sanguineus MUCL 38531' dan izole edilen ve Saccharomyces cerevisiae W303-1A' de heterolog olarak üretilen lcc2 lakkazının saflaştırılması ve karakterizasyonunun başarılı bir şekilde gerçekleştirilmiştir. Enzimin saflaştırılması için, amonyum sülfat çöktürmesi, ultrafiltrasyon, anyon değişim kromatografisi ve jel filtrasyonu işlemleri sırasıyla enzim çözeltisine uygulanmıştır. Rekombinant lcc2 enzimin verimi anyon değişim kromatografisi sonrası %44, gel filtrasyonu sonrası ise %13 olarak bulunmuştur. Saflaştırılmış ürün, elektroforez ile doğrulanarak, lcc2 lakkazının moleküler ağırlığı tespit edilmiştir. Enzim aktivitesi, farklı substratlar, en iyi bilinen lakkaz inhibitörleri kullanılarak, farklı sıcaklıklarda ve pH değerlerinde incelenmiştir. pH çalışmaları sonucunda, lcc2'nin en yüksek aktivitesi, substrat olarak ABTS kullanıldığında pH 3 tamponunda ve DMP kullanıldığında ise pH 4 tamponunda gözlenmiştir. Sıcaklık analizleri, optimum sıcaklığın 30°C olduğunu göstermiştir. Bir sonraki adıma göre, lcc2 lakkazı, ABTS'yi substrat olarak, diğer fenolik bileşiklere göre daha hızlı okside etmektedir. lcc2 lakkazının katalitik özellikleri çalışmasında ise ABTS, DMP'ye göre daha spesifik bir substrat olarak belirlenmiştir. Bu tez çalışmasının sonuçlarını literatür bilgisiyle karşılaştırdığımızda diğer bazı lakkaz özellikleriyle benzer sonuçların elde edildiği görülmüştür.
Özet (Çeviri)
In this study, we successfully purified and characterized Pycnoporus sanguineus MUCL 38531 heterologous laccase lcc2 expressed in Saccharomyces cerevisiae W303-1A. Ammonium sulfate precipitation, ultrafiltration, anion exchange chromatography and gel filtration techniques were used for purification process. Recombinant lcc2 was purificated with the anion exchange chromatography with a final enzyme yield of 44 % and gel filtration with a yield of 13 %. Purified product was confirmed by electrophoresis and the molecular weight of the purified laccase was found. Enzyme activity was determined by using different substrates and inhibitors at different temperatures and pH values. The highest activity grade of lcc2 production was observed with ABTS as the substrate in pH 3 buffer and with DMP in pH 4 buffer. The optimum temperature was found as 30°C. Moreover, laccase has oxidized ABTS substrate much faster than other phenolic molecules. At catalytic properties of lcc2 study, ABTS was inferred more specific substrate than DMP for lcc2. When we compared the results of this study with literature, they were also similar to some other laccase properties.
Benzer Tezler
- Cloning of The Laccase cDNAs from Pycnoporus sanguineus MUCL 38531, Expression in Pichia pastoris and Characterization of Recombinant Laccases
Pycnoporus sanguineus?tan Lakkaz cDNA?larının Klonlanması, Pichia pastoris?te Ekspresyonu ve Rekombinant Lakkazların Karakterizasyonu
GÜNSELİ KURT GÜR
Doktora
İngilizce
2010
Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesiİleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYTEN YAZGAN KARATAŞ
- Geobacillus kaustaphilus alfa-galaktosidaz enziminin rekombinant protein olarak E. coli'de ifadesi ve karakterizasyonu
Expression and characterization of geobacillus kaustophilus alfagalactosidase enzyme as a recombinant protein in E. coli
ASLI KUŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyomühendislikKafkas ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ YUNUS ENSARİ
- Biochemical characterization of R.Oryzae xylanase and heterologous probe preparation from T.reesei
R.Oryzae küpünden ksilanaz enziminin biyokimyasal karakterizasyonu ve T.reesei küpünden heterologus sonda hazırlanması
AYŞEGÜL ERSAYIN
Yüksek Lisans
İngilizce
2000
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. UFUK BAKIR
DOÇ. DR. SEZAİ TÜRKEL
- Substrate characterization of putative ancestral xyloglucan endotransglycosylase/hydrolases
Atasal ksıloglukan endotransglikozilaz/hidrolazların substrat karakterizasyonu
DİLARA TÜZÜN
Yüksek Lisans
İngilizce
2016
Bilim ve TeknolojiYeditepe ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ANDREW JOHN HARVEY
- Metagenomik yaklaşımla elde edilen endoglukanaz enziminin rekombinant ekspresyonu ve karakterizasyonu
Recombinant expression and characterization of a novel endoglucanase enzyme obtained by metagenomics approach
FURKAN ABDULLAH ÇALIŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyoteknolojiYıldız Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ EMEL ORDU
DR. GÜNSELİ KURT GÜR