Peroksidaz enziminin afinite kromatografisi tekniği ile karaturp (Raphanus sativus L.) ve şalgamdan (Brassica rapa L.) saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of peroxidase enzyme from radish (Raphanus sativus L.) ve black turnip (Brassica rapa L.) by affinity chromatography technique
- Tez No: 312917
- Danışmanlar: PROF. DR. HASAN ÖZDEMİR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2012
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 119
Özet
Enzimin inhibitörü olan 4-aminobenzohidrazit molekülü tirozine kenetlendirilerek yeni bir afinite jeli hazırlandı. Karaturp (Raphanus sativus L.) ve şalgam (Brassica rapa L.) bitkilerinden peroksidaz (POD) enzimi Sepharose-4B-L-tirozin-4-aminobenzohidrazit afinite kromatografisi kullanılarak tek basamakta sırasıyla %10,6 verimle 40,3 kat ve %9 verimle 269,3 kat saflaştırıldı. Enzim aktivitesi spektrofotometrik olarak 470 nm'de ölçüldü. Enzimlerin saflığını kontrol etmek ve molekül kütlelerini belirlemek için SDS-poliakrilamid jel elektroforezi yapıldı ve tek bant gözlendi. Molekül kütleleri karaturp (Raphanus sativus L.) POD için yaklaşık 67,3 kDa ve şalgam (Brassica rapa L.) POD için yaklaşık 65,8 kDa olarak bulundu. Enzimler üzerinde yapılan kinetik çalışmalar neticesinde optimum pH, optimum iyonik şiddet, optimum sıcaklık, stabil pH sırasıyla karaturp (Raphanus sativus L.) için 6,5, 0,1 M, 300C, 6,5 ve şalgam (Brassica rapa L.) için 6,5, 1 M, 300C, 5,0 olarak tespit edildi. Guaiakol substratı için saf enzimlerin KM ve Vmax değerleri hesaplandı ve karaturp (Raphanus sativus L.) için KM 24,88 mM, Vmax 3,23 EÜ/ml, şalgam (Brassica rapa L.) için KM 4,09 mM, Vmax 0,797 EÜ/ml olarak belirlendi. Ayrıca saf peroksidaz enzimleri üzerine 4-aminobenzohidrazit inhibitörünün inhibisyon etkisi in vitro şartlarda ayrı ayrı incelendi. 4-aminobenzohidrazit inhibitörü her iki bitki peroksidazı içinde yarışmasız inhibisyon göstermekte olup, karaturp (Raphanus sativus L.) ve şalgam (Brassica rapa L.) için sırasıyla IC50 değeri 0,726 mM ve 1,167 mM olarak, Ki değerleri ise sırasıyla 0,5947±0,0122 mM ve 1,1033±0,1016 mM olarak tespit edildi.
Özet (Çeviri)
A novel affinity gel was prepared by joining 4-aminobenzohydrazide, an inhibitor molecule of the enzyme, to tyrosine. Peroxidase (POD) enzymes of black radish (Raphanus sativus L.) and turnip (Brassica rapa L.) plants were purified in a single step by using Sepharose-4B-L-tyrosine-4-aminobenzohydrazide affinity chromatography as 10.6% yield, 40.3-fold and 9% yield, 269.3-fold, respectively. Enzyme activity was measured spectrophotometrically at 470 nm. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis was performed to check the purity and molecular weights of enzymes to determine and the observed single band. Molecular masses of enzymes for POD black radish (Raphanus sativus L.)and turnip (Brassica rapa L.) was found to be approximately 67.3 kDa and 65.8 kDa, respectively. As a result of the kinetic studies on the enzymes; optimum pH, optimum ionic strength, the optimum temperature and stable pH were determined as 6.5, 0.1 M, 300C, 6.5 for black radish (Raphanus sativus L.) and 6.5, 1 M, 300C, 5.0 for turnip (Brassica rapa L.). KM and Vmax values were calculated for the pure enzyme using guaiacol as substrate and for black radish (Raphanus sativus L.) KM and Vmax values were found to be as 24.88 mM and 3.23 EU / ml, for turnip (Brassica rapa L.) they were found to be as 4.09 mM and 0.797 EU / mL. Also, inhibitory effect of 4-aminobenzohydrazide inhibitor on pure peroxidase enzymes were examined in vitro conditions separately. 4-aminobenzohydrazide have shown noncompetitive inhibition in both peroxidase enzymes of black radish (Raphanus sativus L.) and turnip (Brassica rapa L.), IC50 values were calculated as 0.726 mM and 1.167 mM, Ki values were calculated as 0,5947±0,0122 mM and 1,1033±0,1016 mM, respectively.
Benzer Tezler
- Amino benzohidrazid türevi moleküller kullanılarak karaturp peroksidaz enziminin afinite kromatografisi tekniği ile saflaştırılması
Purification of the peroxidase enzyme with afinite chromatography technique using aamino benzohydrazide derivative molecules
ŞEYMA MEHTAP KOÇAK
- Peroksidaz enziminin afinite kromatografisi tekniği ile karnabahardan saflaştırılması ve inhibisyon kinetiğinin incelenmesi
Purification of peroxidase enzyme from cauli̇flower by affi̇ni̇ty chromatography techni̇que and investigation of inhibition kinetics
FATMA NURDAN AĞIRÇELİK
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyokimyaMuş Alparslan ÜniversitesiGıda Güvenliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ZÜLEYHA ALMAZ
- Afinite kromatografisi tekniği ile peroksidaz enziminin kırmızı pancardan (Beta vulgaris) saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of peroxidase enzyme from red beet(Beta vulgaris) by affinity chromatography technique
SEVİLAY İNAL
- Bayır turpu (Armoracia rusticana) peroksidaz enziminin 3-aminobenzohidrazid türevleri kullanılarak afinitekromatografisi ile saflaştırılması
Purification of horseradish (Armoracia rusticana) peroxidase enzyme by afine chromatography using 3-amino benzohidrazide derivatives
NURGÜL ABUL
- Bitkisel kaynaklardan peroksidaz enziminin saflaştırılması ve rasemik hidroperoksidin enantiyo seçimli indirgenmesi
Purification of peroxidase enzyme from plant sources and enantioselective reduction of racemic hydroperoxide
RAMAZAN KALIN