Clostridium botulinum Tip A'dan proteaz enziminin kısmi olarak saflaştırılması ve karakterizasyonu
Partially purification and characterization of protease from Clostridium botulinum Type A
- Tez No: 330693
- Danışmanlar: PROF. DR. ELİF LOĞOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Metaloproteaz, Clostridium botulinum, saflaştırma karakterizasyon, Saflaştırma, Metalloprotease, Clostridium botulinum, purification, characterizationPage Number : 81Adviser : Prof. Dr. Elif LOĞOĞLU
- Yıl: 2012
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gazi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu çalışmada Clostridium botulinum Tip A ATCC 7948'den proteaz enziminin kısmi olarak saflaştırılması ve karakterizasyonu araştırılmıştır. Proteaz enzimi üretimi %1 tripton, %1 pepton, %0,5 maya ekstraktı, %0,1 çözünebilir nişasta, %0,3 CH3COONa, % 0,05 L-sistein, %0,03 sodyum tiyoglikolat, %0,5 NaCl ve % 1 glukoz içeren besiyerinde 37 0C'de 20 saat süresince gerçekleştirilmiştir. Proteaz enzimi, %85 amonyum sülfat çöktürmesi ve DEAE selüloz anyon değişim kromatografisiyle %6,12 verimle ham ekstrakta göre 3,67 kat saflaştırılmıştır. Enzimin spesifik aktivitesi 650 U/mg'dır. Enzimin optimum pH ve sıcaklığı sırası ile 8 ve 50 0C'dir. Enzim 40 0C'de 3 saat boyunca aktivitesinin yaklaşık tamamını korumuştur. 60 ve 70 0C'de ise ilk 15 dakikada aktivitesinin büyük bir kısmını kaybetmiştir. Enzimin aktivitesi Zn2+, Ca2+, Co2+, Mg2+ ve Ni2+ iyonları varlığında artış gösterirken, Cd2+ ve Sn2+ iyonları enzimi inhibe etmiştir. Al3+, Fe3+, Na+ ve Sr2+ iyonları varlığında ise enzim aktivitesini korumuştur. Enzim kazein, jelatin, soya fasulyesi unu ve BSA gibi doğal substratlar karşısında en yüksek aktiviteyi kazeine karşı göstermiştir. Enzim etanol, matanol, DMSO, 2-propanol ve asetondan etkilenmezken n-butanol ve hekzan varlığında aktivitesini sırası ile %39 ve %23 oranında kaybetmiştir. Deterjan katkı maddelerinden olan Triton X-100 ve Tween 80 enzim aktivitesini artırmıştır. SDS karşısında ise enzim aktivitesini korumuştur. %2'lik ve %5'lik H2O2 varlığında enzimin aktivitesinde artış gözlenmiştir. Enzim metaloproteaz inhibitörü olan EDTA tarafından inhibe edilmiştir. PMSF varlığında ise aktivitesinde düşüş gözlenmiştir. Bu inhibisyon profili enzimin metaloproteaz olduğunu ve aktif merkezinin yakınında serin kalıntılarının bulunduğunu göstermiştir.Bilim Kodu: 201.1.020
Özet (Çeviri)
In this study, partially purification and characterization of protease from Clostridium botulinum Type A ATCC 7948 was investigated. Protease production was grown in %1 tripton, %1 peptone, %0,5 yeast extract , %0,1 soluble starch, %0,3 CH3COONa, % 0,05 L-cysteine, %0,03 sodium thioglycolate, %0,5 NaCl and % 1 glucose at 37 0C and 20 hour. Enzyme was purified by %85 ammonium sulfate precipitation and DEAE cellulose anion exchange chromatography with %6,12 yield and 3,67 fold. Specific activity was 650 U/mg. The optimum pH and temperature of protease was 8 and 50 0C, respectively. Protease activity was maintained %100 after 3 hours at 40 0C. Enzyme deactivated at 60 and 70 0C for 15 minute. While enzyme activity increased in the presence of Zn2+, Ca2+, Co2+, Mg2+ and Ni2+, Cd2+ and Sn2+ inhibited enzyme. Al3+, Fe3+, Na+ and Sr2+ showed no effect on protease activity. Protease showed highest activity towards casein among other native proteins such as gelatin, BSA, soy bean. Enzyme maintained activity in the presence of ethanol, methanol, DMSO, 2-propanol and acetone. But enzyme deactivated %39 and %23 in the presence of n-butanol and hexane, respectively. While Triton X-100 and Tween 80 increased enzyme activity, enzyme maintained activity towards SDS. It was observed that enzyme activity increased in the presence of %2 and %5 H2O2. Enzyme was inhibited by metalloprotease inhibitor EDTA. Also 2 and 5 mM PMSF inhibited enzyme at the rate of %18 and %30, respectively. This inhibition profile showed that enzyme was metalloprotease and there were serine residues near the active site.Science Code : 201.1.020
Benzer Tezler
- İzmir pazarlarında satılan taze köy peynirlerinin bazı nitelikleri ve özellikle zehirlenmeye neden olan bakteri içerikleri üzerinde araştırmalar
Başlık çevirisi yok
NURSEL VAPURCU
Yüksek Lisans
Türkçe
1985
Gıda MühendisliğiEge ÜniversitesiSüt Teknolojisi Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HASAN YAYGIN
- Bursa yöresinde toprak örneklerinde Klostridium'ların dağılımı üzerinde bir araştırma
Başlık çevirisi yok
ORHAN ŞENYÜZ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1987
MikrobiyolojiUludağ ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KAYA KILIÇTURGAY
- Bursa il merkezi içme sularında patojenik bakterilerin araştırılması
Başlık çevirisi yok
METİN ŞİMŞEKLİ
- Clostridium acetobutylicum kullanılarak peyniraltı suyundan aseton-bütanol üretimi üzerinde bir araştırma
A Study on the production of acetone-butanol from whey using clastridium acetobutylicum
NİLGÜN YALÇIN
Yüksek Lisans
Türkçe
1989
Gıda MühendisliğiAnkara ÜniversitesiTarım Ürünleri Teknolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. M. HİLMİ PAMİR
- Application of microbial enhanced oil recovery technique to Raman crude oil
Başlık çevirisi yok
KEMAL BEHLÜLGİL
Yüksek Lisans
İngilizce
1990
Petrol ve Doğal Gaz MühendisliğiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiPetrol Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. TANJU MEHMETOĞLU