Geri Dön

Clostridium botulinum Tip A'dan proteaz enziminin kısmi olarak saflaştırılması ve karakterizasyonu

Partially purification and characterization of protease from Clostridium botulinum Type A

PDF İndir

  1. Tez No: 330693
  2. Yazar: ŞEYMA DADI
  3. Danışmanlar: PROF. DR. ELİF LOĞOĞLU
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Kimya, Chemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2012
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Gazi Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 97

Özet

Bu çalışmada Clostridium botulinum Tip A ATCC 7948'den proteaz enziminin kısmi olarak saflaştırılması ve karakterizasyonu araştırılmıştır. Proteaz enzimi üretimi %1 tripton, %1 pepton, %0,5 maya ekstraktı, %0,1 çözünebilir nişasta, %0,3 CH3COONa, % 0,05 L-sistein, %0,03 sodyum tiyoglikolat, %0,5 NaCl ve % 1 glukoz içeren besiyerinde 37 0C'de 20 saat süresince gerçekleştirilmiştir. Proteaz enzimi, %85 amonyum sülfat çöktürmesi ve DEAE selüloz anyon değişim kromatografisiyle %6,12 verimle ham ekstrakta göre 3,67 kat saflaştırılmıştır. Enzimin spesifik aktivitesi 650 U/mg'dır. Enzimin optimum pH ve sıcaklığı sırası ile 8 ve 50 0C'dir. Enzim 40 0C'de 3 saat boyunca aktivitesinin yaklaşık tamamını korumuştur. 60 ve 70 0C'de ise ilk 15 dakikada aktivitesinin büyük bir kısmını kaybetmiştir. Enzimin aktivitesi Zn2+, Ca2+, Co2+, Mg2+ ve Ni2+ iyonları varlığında artış gösterirken, Cd2+ ve Sn2+ iyonları enzimi inhibe etmiştir. Al3+, Fe3+, Na+ ve Sr2+ iyonları varlığında ise enzim aktivitesini korumuştur. Enzim kazein, jelatin, soya fasulyesi unu ve BSA gibi doğal substratlar karşısında en yüksek aktiviteyi kazeine karşı göstermiştir. Enzim etanol, matanol, DMSO, 2-propanol ve asetondan etkilenmezken n-butanol ve hekzan varlığında aktivitesini sırası ile %39 ve %23 oranında kaybetmiştir. Deterjan katkı maddelerinden olan Triton X-100 ve Tween 80 enzim aktivitesini artırmıştır. SDS karşısında ise enzim aktivitesini korumuştur. %2'lik ve %5'lik H2O2 varlığında enzimin aktivitesinde artış gözlenmiştir. Enzim metaloproteaz inhibitörü olan EDTA tarafından inhibe edilmiştir. PMSF varlığında ise aktivitesinde düşüş gözlenmiştir. Bu inhibisyon profili enzimin metaloproteaz olduğunu ve aktif merkezinin yakınında serin kalıntılarının bulunduğunu göstermiştir.Bilim Kodu: 201.1.020Anahtar Kelimeler : Metaloproteaz, Clostridium botulinum, saflaştırma karakterizasyonSayfa Adedi: 81Tez Yöneticisi : Prof.Dr. Elif LOĞOĞLU

Özet (Çeviri)

In this study, partially purification and characterization of protease from Clostridium botulinum Type A ATCC 7948 was investigated. Protease production was grown in %1 tripton, %1 peptone, %0,5 yeast extract , %0,1 soluble starch, %0,3 CH3COONa, % 0,05 L-cysteine, %0,03 sodium thioglycolate, %0,5 NaCl and % 1 glucose at 37 0C and 20 hour. Enzyme was purified by %85 ammonium sulfate precipitation and DEAE cellulose anion exchange chromatography with %6,12 yield and 3,67 fold. Specific activity was 650 U/mg. The optimum pH and temperature of protease was 8 and 50 0C, respectively. Protease activity was maintained %100 after 3 hours at 40 0C. Enzyme deactivated at 60 and 70 0C for 15 minute. While enzyme activity increased in the presence of Zn2+, Ca2+, Co2+, Mg2+ and Ni2+, Cd2+ and Sn2+ inhibited enzyme. Al3+, Fe3+, Na+ and Sr2+ showed no effect on protease activity. Protease showed highest activity towards casein among other native proteins such as gelatin, BSA, soy bean. Enzyme maintained activity in the presence of ethanol, methanol, DMSO, 2-propanol and acetone. But enzyme deactivated %39 and %23 in the presence of n-butanol and hexane, respectively. While Triton X-100 and Tween 80 increased enzyme activity, enzyme maintained activity towards SDS. It was observed that enzyme activity increased in the presence of %2 and %5 H2O2. Enzyme was inhibited by metalloprotease inhibitor EDTA. Also 2 and 5 mM PMSF inhibited enzyme at the rate of %18 and %30, respectively. This inhibition profile showed that enzyme was metalloprotease and there were serine residues near the active site.Science Code : 201.1.020Key Words : Metalloprotease, Clostridium botulinum, purification, characterizationPage Number : 81Adviser : Prof. Dr. Elif LOĞOĞLU?

Benzer Tezler

  1. Tez No

    412470

    Clostridium botulinum toksininin kantitatif olarak saptanmasında kullanılacak kanatlı immunoglobulinlerine (IGY) dayalı bir immuno real-time pcr testinin geliştirilmesi

    Development an immuno real-time pcr assay for the quantitative determination of clostridium botulinum toxin by using poultry immunoglobulins (IGY)

    ALİ ABDELKAREEM

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Mikrobiyolojiİstanbul Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. KENAN MİDİLLİ

  2. Tez No

    711075

    Ratlarda sleeve gastrektomi sonrası, pilora botoksenjeksiyonu sonrası, rezidü mide dokusunda iyileşme hızı,anastomoz patlama basıncı kontrolü ile anastomozkaçağı oranlarının karşılaştırılması

    Comparison of rate of healing rate of residual stomach tissue, anastomotic bursting pressure and anastomotic leakage after sleeve gastrectomy and simultaneous pyloric botox injection, in rats

    ONUR İLKAY DİNÇER

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Genel CerrahiSağlık Bilimleri Üniversitesi

    Genel Cerrahi Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BARIŞ RAFET KARAKAŞ

  3. Tez No

    846447

    Clostridium botulinum nörotoksin A'nın kolon kanseri hücre hattında kalsiyum sinyali artışı aracılı oksidatif stres, apoptozis ve tümör hücre ölümü üzerindeki etkileri

    The effects of Clostridium botulinum neurotoxin A on oxidative stress, apoptosis and tumor cell death mediated by calcium signaling increase in colon cancer cell line

    SIDIKA DEMİR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Eczacılık ve FarmakolojiNecmettin Erbakan Üniversitesi

    Tıbbi Farmakoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. İPEK DUMAN

    PROF. DR. MUSTAFA NAZIROĞLU

  4. Tez No

    409553

    Deneysel alerjik rinit modeli oluşturulan tavşanlarda intranazal botulinum toksin tip A infiltrasyonunun etkileri

    The effect of intranasal botulinum toxin TYPE A infiltration in rabbits in which experimental allergic rhinitis model was established

    MURAT SALİH GÜNEŞ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Kulak Burun ve BoğazErciyes Üniversitesi

    Kulak Burun Boğaz Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. İSMAİL KÜLAHLI

  5. Tez No

    821006

    2 hafta süresince 4 °C ve -18 °C de bekletilmiş Abobotulinum toksin A çözeltisinin sıçan modelindeki etkinliği

    The activity of Abobotulinum toxin A solution stored at 4°c and -18°c for 2 weeks in a rat model

    MURAT AKSAÇ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Plastik ve Rekonstrüktif CerrahiMersin Üniversitesi

    Plastik Rekonstrüktif ve Estetik Cerrahi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ALPER SARI

Geri Dön