Geri Dön

Wilson hastalığına yol açan ATP7B genindeki mutasyonların bakır taşınmasındaki etkilerinin saccharomyces cerevisiae model sisteminde araştırılması

Searching the effect of mutations on ATP7B gene that caused wilson disease to the copper transport on saccharomyces cerevisiae model system

PDF İndir

  1. Tez No: 331310
  2. Yazar: ÖZLENEN ŞİMŞEK PAPUR
  3. Danışmanlar: PROF. DR. ORHAN TERZİOĞLU
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Genetik, Tıbbi Biyoloji, Genetics, Medical Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2012
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 104

Özet

Amaç : Klinik bulguları farklı Wilson Hastalarında saptanan ATP7B genindeki T788I, V1036I ve R1038G-fsX83 mutasyonları ve yaban tip ATP7B geni, yaban tip BY4741 (MAT? his3?1 leu2?0 met15?0 ura3?0) suşundan elde edilmiş CCC2 geni mutant olan (BY4741 ?CCC2) Saccharomyces cerevisiae suşuna transformasyonuyla bakır miktarındaki değişimin saptanması amaçlandı.Yöntem : Hepatoselüler karsinoma hücre dizisi HepG2?den total RNA izolasyonu yapılıp cDNA elde edildi. Yaban tip ATP7B genine özgül primerler kullanılarak ATP7B geni PCR ile çoğaltıldı, plazmid DNA?sına klonlandı.Yaban tip ATP7B?yi içeren plazmid DNA?sında bölge yönlendirilmiş mutagenez `site directed mutagenesis? yöntemi ile T788I, V1036I ve R1038G-fsX83 mutasyonları elde edildi. DNA dizi analizi ile yaban tip ATP7B, T788I, V1036I ve R1038G-fsX83 mutant hücrelerden elde edilen plazmid DNA?larının dizileri doğrulandı. Yaban tip ATP7B, T788I, V1036I ve R1038G-fsX83 mutantları Saccharomyces cerevisiae (BY4741?CCC2) transforme edildi.Konvansiyonel PCR ve real time PCR yapıldı. Komplementasyon deneyi yapılarak ICP MS analizi ile farklı ortam şartlarında, ortamdaki ve hücre pelletlerindeki bakır ve demir miktarı ölçüldü.Bulgular : BY4741 ?CCC2 suşunda , ATP7B geninin mayadaki CCC2 genini komplemente ettiğive işlevsel olduğu gösterildi. Demir sınırlı ortamda, yaban tip ATP7B?ye göre T788I, V1036I ve R1038G-fsX83 mutantlarında hücre kültür ortamındaki bakır miktarının azaldığı ve hücre pelletlerindeki bakırın arttığı gösterildi. Kontrol ortamlarında hem ortam hem de hücre pelletlerinde bakır miktarında fark saptanmadı. Aynı deney şartlarında, yaban tip ATP7B?ye göre mutantlarda hem ortam hem de pelletlerde ölçülen demir miktarında fark saptanmadı. Sonuç : Demir sınırlı ortamda yaban tip ATP7B?ye göre T788I, V1036I ve R1038G-fsX83mutasyonlarında hücre kültür ortamındaki bakırın azaldığı, hücre pelletlerindeki bakırın arttığı gösterildi. ICP-MS ile yapılan ölçümlerde yaban tip ATP7B ile üç mutant arasında bakır taşınımında fark saptandı, hipotezimiz doğrulandı. BY4741?CCC2 genetik özelliğindeki mutant maya suşuna ilk kez insan bakır taşıyıcı geni ATP7B transforme edildi ve komplemantasyon gösterildi. Farklı klinik özelliklere sahip Wilson hastalarındaki mutasyonlara ait model sistem kurulmuş oldu.Anahtar Sözcükler : Wilson hastalığı, bakır, ATP7B , mutasyon, CCC2 , maya

Özet (Çeviri)

Objective : It was aimed to detect the change amount of copper by transforming wild type ATP7B gene and T788I, V1036I and R1038G-fsX83 mutations in ATP7B gene which detected on Wilson Disease patients that has different clinical findings to Saccharomyces cerevisiae that has mutant CCC2gene (BY4741?CCC2) which obtained from wild type BY4741 (MAT? his3?1 leu2?0 met15?0 ura3?0) strain.Method : Total RNA was isolated from HepG2 cell line that belongs to hepotecellular carcinoma and cDNA synthesis reaction was performed. ATP7B gene was amplified with specific primers by PCR and it was cloned into plasmid DNA. T788I, V1036I and R1038G-fsX83 mutations were obtained by site directed mutagenesis on wild type ATP7B plasmid DNA. Plasmid DNAs that have wild type ATP7B; T788I, V1036I and R1038G-fsX83 mutations were verified by DNA sequencing. Wild type ATP7B, T788I, V1036I and R1038G-fsX83 mutants were transformed to Saccharomyces cerevisiae (BY4741?CCC2). Conventional and real time PCR was performed. Complementation assay was performed. In different medium condition copper and iron were measured in supernatant and pellet by ICM MS analysis.Results : In BY4741?CCC2 strain, ATP7B gene complemented CCC2 gene in yeast and it has been demonstrated that it is functional. On iron limited medium it has been demonstrated that T788I, V1036I and R1038G-fsX83 mutants have decreased copper in supernatant and increased copper in cell pellet comparing with wilde type ATP7B. In control media, no difference was detected on amount of copper both in supernatants and pellets. On the same experiement conditions, comparing with wild type ATP7B and mutants, no difference was found on amount of iron that has been measured in both supernatants and pellets.Conclusion: In iron limited medium it has been demonstrated that T788I, V1036I and R1038GfsX83 mutants have decreased copper in supernatant and increased copper in cell pellet comparing with wilde type ATP7B. The difference of copper transport between wild type ATP7B and three mutants were detected by ICP-MS and the hypothesis was confirmed. ATP7B gene was transformed to BY4741?CCC2 background yeast strain for the first time and complementation was shown. A model system was established for the mutations that belong to Wilson Disease patients that have different clinical findings.Key Words : Wilson disease, copper, ATP7B , mutation, CCC2, yeast

Benzer Tezler

  1. Tez No

    430888

    Bakır tayini için yüzey plazmon rezonans temelli biyosensörlerin hazırlanması

    Preparation of surface plasmon resonance based biosensor for determination of copper

    VOLKAN SAFRAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    BiyokimyaHacettepe Üniversitesi

    Nanoteknoloji ve Nanotıp Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NECDET SAĞLAM

  2. Tez No

    817603

    Identification of the transcriptional regulators of ATB7B gene by genomic locus proteomics and their effect on cisplatin resistance

    ATB7B geninin transkripsiyonel regülatörlerinin genomik lokus proteomik yöntemi ile tanımlanması ve cisplatin direncine etkilerinin araştırılması

    AYÇA AÇAR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    BiyolojiKoç Üniversitesi

    Hücresel ve Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. CEYDA AÇILAN AYHAN

  3. Tez No

    661764

    Hipertansiyon ve/veya diyabetes mellitus hastalarında nonalkolik yağlı karaciğer hastalığı(NAYKH) sıklığı ve NAYKH saptanan hastalarda prokalsitonin düzeylerinin araştırılması

    Investigation of the levels of procaltitonin in patientswith nonalcolic fatty liver disease (NAFLD) in patients with hypertension and / or diabetes mellitus

    TUGAY ATASEVER

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    İç HastalıklarıNamık Kemal Üniversitesi

    İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ SONAT PINAR KARA

  4. Tez No

    379963

    Realisms and working women in the novels of Gaskell and Brontë

    Gaskell ve Brontë'nin romanlarında gerçekçilik ve çalışan kadınlar

    RANA KAHVECİ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2014

    İngiliz Dili ve EdebiyatıOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    İngiliz Dili ve Edebiyatı Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. MARGARET J. M. SÖNMEZ

  5. Tez No

    129658

    Wilson hastalığında oksidan stres, antioksidan vitaminler ve total antioksidan kapasite

    Başlık çevirisi yok

    NESRİN SÖNMEZ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2003

    Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıGazi Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BUKET DALGIÇ

Geri Dön