Cloning and expression of the pseudomonas KE38 extra-cellular lipase gene in E. coli
Pseudomonas KE38 hücre dışı lipaz geninin klonlanması ve E. coli'de ifadelenmesi
- Tez No: 342973
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. ALPER ARSLANOĞLU, YRD. DOÇ. DR. H. ÇAĞLAR KARAKAYA
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Escherichia coli, Klonlama, Lipazlar, Pseudomonas, Saflaştırma, Escherichia coli, Cloning, Lipases, Pseudomonas, Purification
- Yıl: 2013
- Dil: İngilizce
- Üniversite: İzmir Yüksek Teknoloji Enstitüsü
- Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Lipazlar uzun zincirli triaçilgliserollerin hem hidroliz hemde sentezlerini katalizleyen serin hidrolazlardır ve endüstrideki yaygın kullanımları nedeniyle büyük öneme sahiptirler. Lipazlar yaşayan tüm organizmalar, yani mikrooraganizmalar (bakteri ve mantarlar), bitkiler ve hayvanlar tarafından üretilmektedirler. Ancak, mikrobiyal lipazlar özellikle bakteri kaynaklı olanlar, birçok önemli ve ayırt edici özelliklerinden dolayı bitki ve hayvan kaynaklı olanlara nazaran daha kullanışlıdırlar. Lipazlar su bulunan ve bulunmayan ortamlarda aktivite gösterebilirler ve bu sebeple biyoteknolojideki kullanım alanları oldukça geniştir. Bu çalışmanın amacı Kayseri Erciyes dağının toprak örneğinden izole edilerek Pseudomonas sp. KE38 olarak adlandırılan bakteriden lipaz geninin elde edilmesi, E. coli bakterisine klonlanması ve yine aynı bakteride rekombinant olarak üretildikten sonra E. coli BL21 bakterisinin en uygun lipaz üretim zamanı belirlenerek recombinant lipazın kısmi saflaştırılmasının yapılmasıdır. SDS-PAGE sonucuna göre rekombinant lipazın molekül ağırlığı yaklaşık olarak 64 kDa olarak belirlenmiş ayrıca E. coli BL21 IPTG ile indüklendikten iki saat sonra lipaz üretimi en üst seviyeye ulaşarak devam eden sekiz saat boyunca herhangi bir değişim gözlemlenmemiştir. Sonuç olarak çalışmada amaç olan Pseudomonas sp. KE38 bakterisinden izole edilen lipaz geninin klonlanması, E. colide ifadelenmesi ve kısmi saflaştırılması gerçekleştirilmiştir.
Özet (Çeviri)
Lipases are serine hydrolases that catalyze both the hydrolysis and synthesis of insoluble or poorly soluble long-chain triacylglycerols with an acyl chain length ? 10 carbon atoms based on the presence or absence of water. Lipases are produced and secreted by all kingdoms of life that are eukaryotes including plants, animals, fungi and prokaryotes including bacteria and archaea. However, microbial lipases, especially from bacteria, more useful than their plant and animal derivatives because of several important properties. Because of their acitivities in both aqueous and nonaqueous environments, lipases have specific applications in industry and medicine. The primary goals of this thesis were to clone and express the extra-cellular lipase gene from Pseudomonas sp. KE38, isolated from soil samples of Erciyes mountain in Kayseri, in E. coli and partial purification of the gene product. To achieve this aim, genome walking technique was used to obtain lipase gene from Pseudomonas sp. KE38, that gene was then cloned into pET28a expression vector and expressed in E. coli. The lipase expression of E. coli BL21 and its activity was screened with olive oil-Rhodamin B plate assay. After expression recombinant lipase was partially purified via inclusion body isolation. Moreover the optimum lipase production time of E. coli BL21 cells were determined and analyzed with SDS-PAGE. According to SDS-PAGE analysis the recombinant lipase was approximately 64 kDa and lipase production reached to the highest level after two hours of IPTG induction. As conclusion, recombinant lipase from Pseudomonas sp. KE38 was cloned into E. coli, expressed and partially purified.
Benzer Tezler
- Dört zamanlı türbaşarj direk püskürtmeli bir dizel motorunun bilgisayar ile sümülasyonu
Computer aided simulation of a fourstroke turbocharged direct-anjection diesel engine
MUSTAFA BALCI
- John Fowles as a postmodernist: An analysis of Fowles's fiction within metafictional theories
Başlık çevirisi yok
SERPİL OPPERMANN TUNÇ
Doktora
İngilizce
1987
İngiliz Dili ve EdebiyatıHacettepe Üniversitesiİngiliz Dili ve Edebiyatı Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. OYA BATUM
- Relationships within the families in D.H. Lawrence's Sons and Lovers, The Rainbow, Women in Love
Başlık çevirisi yok
ZERRİN EREN
- Büyük güçlü devre kesicilerin yapı ve problemleri
Başlık çevirisi yok
LEVENT YILDIRIM
Yüksek Lisans
Türkçe
1988
Elektrik ve Elektronik MühendisliğiMarmara ÜniversitesiElektrik-Elektronik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NESRİN TARKAN
- Pseudomonas tomato bakterisine karşı monoklonal antikor salgılayan hibrid hücrelerin geliştirilmesi
Use of monoclonal antibodies in the generation of hybridomas which is specific to pseudomonas tomato
FATMA ŞAHİNGÖZ