Peroksidaz enziminin afinite kromatografisi ile bitkisel kaynaklardan saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of peroxidase enzyme from vegetable source by affinity chromatography
- Tez No: 346236
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. NALAN ÖZDEMİR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2013
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Erciyes Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 96
Özet
Peroksidaz enziminin inhibitörü olan 4-aminobenzohidrazit molekülü tirozine kenetlendirilerek afinite jeli hazırlandı. Kırmızı lahana (Brassica oleracea var. Capitata F. Rubra) bitkisinden peroksidaz (POD) enzimi Sepharose-4B-L-tirozin-4- aminobenzohidrazit afinite kromatografisi kullanılarak tek basamakta %2,9 verimle 120,6 kat saflaştırıldı. Enzim aktivitesi spektrofotometrik olarak 470 nm?de ölçüldü. Enzim saflığını kontrol etmek ve molekül kütlesini belirlemek için SDS-poliakrilamid jel elektroforezi yapıldı ve tek bant gözlendi. Molekül kütlesi kırmızı lahana peroksidaz için yaklaşık 69,3 kDa olarak bulundu. Enzim üzerinde yapılan kinetik çalışmalar neticesinde optimum pH, optimum iyonik şiddet, optimum sıcaklık, stabil pH sırasıyla 7, 0,1 M, 30°C, 5,5 olarak tespit edildi. Guaiakol substratı için saf enzimlerin KM ve Vmax değerleri hesaplandı ve kırmızı lahana için KM 0,048 mM ve Vmax 1,46 EÜ/mL olarak belirlendi. Ayrıca saf peroksidaz enzimi üzerine 4-aminobenzohidrazit inhibitörünün inhibisyon etkisi in vitro şartlarda incelendi. 4-aminobenzohidrazit inhibitörü bitki peroksidazı için yarışmasız inhibisyon gösterdiği bulunmuştur ve kırmızı lahana için IC50 değeri 1,047 mM olarak Ki değeri ise 0,0702±0,05 mM olarak tespit edildi.
Özet (Çeviri)
Affinity gel was prepared by coupling tyrosine to 4-aminobenzohydrazide molecule that is an inhibitor of the peroxidase enzyme. Peroxidase (POD) enzyme of red cabbage (Brassica oleracea var. Capitata F. Rubra) plant was purified in a single step by using Sepharose-4B-L-tyrosine-4-aminobenzohydrazide affinity chromatography with 2,9% yield, 120,6-fold. Enzyme activity was measured spectrophotometrically at 470 nm. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis was performed to check the enzyme purity and to determine molecular weight and a single band was observed. Molecular masses of weight of purified enzyme was found to be approximately 69.3 kDa. As a result of the kinetic studies of the enzyme; optimum pH, optimum ionic strength, the optimum temperature and stable pH were determined as 7, 0.1 M, 30°C, 5,5 respectively for red cabbage. KM and Vmax values were calculated for the purified enzyme using guaiacol as substrate and for red cabbage. KM and Vmax values were found as 0,048 mM and 1,46 EU/mL. Also, inhibitory effect of 4-aminobenzohydrazide inhibitor on purified peroxidase enzyme was examined in vitro conditions. 4-aminobenzohydrazide have shown noncompetitive inhibition for purified peroxidase enzyme of red cabbage, IC50 value was calculated as 1,047 mM and Ki value was calculated as 0,0702±0,05 mM.
Benzer Tezler
- Bitkisel kaynaklardan peroksidaz enziminin saflaştırılması ve rasemik hidroperoksidin enantiyo seçimli indirgenmesi
Purification of peroxidase enzyme from plant sources and enantioselective reduction of racemic hydroperoxide
RAMAZAN KALIN
- Peroksidaz enziminin afinite kromatografisi tekniği ile karaturp (Raphanus sativus L.) ve şalgamdan (Brassica rapa L.) saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of peroxidase enzyme from radish (Raphanus sativus L.) ve black turnip (Brassica rapa L.) by affinity chromatography technique
RAMAZAN KALIN
- Peroksidaz enziminin afinite kromatografisi tekniği ile karnabahardan saflaştırılması ve inhibisyon kinetiğinin incelenmesi
Purification of peroxidase enzyme from cauli̇flower by affi̇ni̇ty chromatography techni̇que and investigation of inhibition kinetics
FATMA NURDAN AĞIRÇELİK
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyokimyaMuş Alparslan ÜniversitesiGıda Güvenliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ZÜLEYHA ALMAZ
- Amino benzohidrazid türevi moleküller kullanılarak karaturp peroksidaz enziminin afinite kromatografisi tekniği ile saflaştırılması
Purification of the peroxidase enzyme with afinite chromatography technique using aamino benzohydrazide derivative molecules
ŞEYMA MEHTAP KOÇAK
- Alabaş turpu peroksidaz enziminin 3-amino benzohidrazid türevleri kullanılarak afinite kromatografisi ile saflaştırılması
Purification of kohlrabi radish peroxidase enzyme with affinity chromatography using 3-amino benzohidrazide derivatives
AHMET AKKAŞ