In vivo detection of yeast alpha mating pheromone receptor Ste2p homodimerization by FRET
FRET ile Ste2p homodimerizasyonunun in vivo gösterilmesi
- Tez No: 355317
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. ÇAĞDAŞ DEVRİM SON
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: FRET, maya, Saccharomyces cerevisae, homodimerizasyon, GPKR, in vivo, FRET, Ste2p, yeast, Saccharomyces cerevisiae, homodimerization, GPCR, in vivo
- Yıl: 2014
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Bölümü
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 86
Özet
Ste2p a tipi Saccharomyces cerevisiae hücrelerinde bulunan ve alfa tipi feromon algılayan bir reseptördür. Maya hücrelerinin yaşam döngüsü Ste2p tarafından algılanan sinyale göre haploid ya da diploid olabilir. Bu reseptör bir tür G-proteine kenetli reseptördür (GPKR). GPKRler sinyal iletimindeki önemli görevlerinden dolayı en önemli ilaç hedeflerinden biridir. Bu reseptörler yedi transmembran bölümden oluşur ve hücrenin içerisinde G-proteine bağlanırlar. FRET Floroforlar arasındaki rezonans enerji transferi ile proteinler arası etkileşimleri gösterebilen bir metottur. Bu floroforlar donör ve akseptör olarak adlandırılır. İki florofor birbirine yeterince yaklaştığında FRET sinyali gözlenir ve bu sinyal akseptör ile donör arasındaki uzaklığı hesaplamak için kullanılabilir. Bu amaçla Ste2p iki farklı florofor olan EGFP ve mCherry ile işaretlenmiştir, bunlar sırasıyla yeşil ve kırmızı renktedir. Çalışma süresince reseptörün iki farklı aminoasit pozisyonu bu iki floroforla gen düzeyinde işaretlenmiştir. Maya hücreleri bu işaretli reseptörü taşıyan plazmidlerle transfekte edilmiştir. Transfeksiyondan sonra aynı hücredeki farklı renkle işaretli proteinlerden konfokal mikroskop ile FRET sinyali alınmıştır. FRET canlı hücrelere zarar vermeden inceleme olanağı sağlamaktadır. Bu çalışmada homodimerizasyona ek olarak, feromonun ve florofor pozisyonunun da FRET üzerindeki etkileri çalışılmıştır.
Özet (Çeviri)
Ste2p is an alpha type pheromone sensing receptor of 'a' type Saccharomyces cerevisiae cells. Yeast life cycle could be haploid or diploid due to the signal sensed by Ste2p. This receptor is a G protein coupled receptor (GPCR). GPCRs are one of the most important drug targets because they are playing key roles in cell signaling. They have seven transmembrane domains and linked with a G protein in the cytosol. FRET is a method that is used for detecting protein-protein interactions by using the resonance energy transfer between fluorophores. The fluorophores are named as donor and acceptor. When two fluorophores are in close proximity to each other FRET signal is generated and this signal can be quantified to determine the distance between the donor and the acceptor. For this purpose Ste2p is labeled with two different fluorophores EGFP and mCherry, green and red, respectively. During the study two different positions of receptor was labeled with the two fluorophores. Yeast cells were transfected with these vectors bearing the fusion gene of receptor and fluorophores. After transfection of the two labeled receptors, the presence of FRET signal was observed under confocal microscope. FRET provides chance of observing live cells without causing harm. In this study in addition to detection of homodimerization we studied effect of agonist on receptor dimerization and fluorescent protein position on FRET efficiency.
Benzer Tezler
- In vivo detection of GPCR dimerizations in Saccharomyces cerevisiae using FRET and BiFC
GPKR dimerleşmesinin FRET ve bölünmüş floresan protein (BiFC) teknikleri ile canlı Saccharomyces cerevisiae hücrelerinde görüntülenmesi
BEREN ÜSTÜNKAYA
Yüksek Lisans
İngilizce
2014
BiyolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ÇAĞDAŞ DEVRİM SON
- Elucidation of R gene mediated yellow rust disaesa resistance mechanism in wheat by dual bait yeast two-hybrid analysis
Buğdayda R geni ile kontrol edilen sarı pas hastalığı dirençlilik mekanizmasının maya ikili hibrid yöntemi ile aydınlatılması
FİGEN YILDIRIM
Doktora
İngilizce
2005
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ
PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ
- Yaş bira ve anason posası ile bazı hasıllardan elde edilen silajların yem değerlerinin farklı analiz teknikleri ile belirlenmesi
Determination of the feed values of anise and wet brewers grain-some whole mixture silage by different analysis techniques
MEHMET LEVENT ÖZDÜVEN
- Quantitative analysis of relationships between fluxome and metabolome in Escherichia coli
Başlık çevirisi yok
HİLAL TAYMAZ NİKEREL
Doktora
İngilizce
2010
BiyoteknolojiTechnische Universiteit Delft (Delft University of Technology)PROF. DR. J. J. HEIJNEN
DR. W. M. VAN GULIK
- ADA 3 proteininin transkripsiyonel regülasyondaki rolü ve diğer transkripsiyonel aktivatörlerle etkileşimleri
Role of the ADA3 protein in transcriptional regulation and its interactions with other transcriptional regulators
SEVİL ZENCİR
