Geri Dön

İnsan karaciğeri pon1 enzim geninin klonlanması, inklüzyon cisimciklerinden arındırılarak protein yapısının yeniden katlandırılması ve enzimin karekterizasyonu

Cloning of human liver paraoxonase 1 gene, refolding of protein structure by clearing of inclusion body and characterization of enzyme

  1. Tez No: 361138
  2. Yazar: YELİZ DEMİR
  3. Danışmanlar: PROF. DR. ŞÜKRÜ BEYDEMİR
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2014
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Atatürk Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 111

Özet

Bu çalışmada PON1 enzimi, insan karaciğer dokusundan rekombinant DNA teknolojisi kullanılarak Escherichia coli (BL21DE3) hücresinde üretildi. SUMO-hPON1 enzimi nikel-nitrilotriasetik asit afinite kromatografisi kullanılarak doğal şartlarda %93,5 verim ve 226,88 EU/mg spesifik aktivite ile 17,12 kat saflaştırma katsayısıyla saflaştırıldı. Saflaştırılan enzimin saflığını kontrol etmek ve molekül kütlesini tespit etmek amacıyla SDS-poliakrilamid jel elektroforezi yapıldı ve tek bant elde edildi. SUMO-hPON1 enziminin kütlesi 51,52 kDa olarak belirlendi. İnklüzyon cisimciklerinin saflaştırılması, refolding işlemi gerçekleştirildi. Enzim %92,72 verim ve 215,93 EU/mg spesifik aktivite ile 12,31 kat saflaştırma katsayısı ile saflaştırıldı. SDS-poliakrilamid jel elektroforezi yapıldı. SUMO-hPON1 enziminin kütlesi 53,48 kDa olarak belirlendi. Ayrıca saflaştırılan hPON1 enziminin karakterizasyonu yapılarak enzimin optimum iyonik şiddet, optimum pH, optimum sıcaklık, Km ve Vmax değerleri belirlendi.

Özet (Çeviri)

In this study, PON1 enzyme was produced from human liver tissue by using recombinant DNA technology in Escherichia coli (BL21DE3) cell. SUMO-hPON1 was purified in nature conditions with 226.88 EU/mg of specific activity 93.5% of purification yield and 17.12 of purification folds by using Nickel-nitrilotriacetic acid affinity chromatography. To check the purity and determine the molecular mass of the purified enzyme SDS-polyacrylamide gel electrophoresis was performed and a single band was observed. Molecular mass of SUMO-hPON1 enzyme was determined as 51.52 kDa. Inclusion body solubilization and refolding were done and enzyme was purified with 215.93 EU/mg of specific activity 92.72% of purification yield and 12.31 of purification folds. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis was performed. Molecular mass of SUMO-hPON1 enzyme was determined as 53.48 kDa. In addition, for characterization of purified hPON1 enzyme optimum ionic strength, optimum pH, optimum temperature, Km and Vmax values were determined.

Benzer Tezler

  1. Paraksonaz enzimi kullanılarak transkripsiyonel aktivite belirlenmesinde yararlanılacak bir aday haberci sisteminin oluşturulması

    Generating a candidate reporter system using paraoxonase enzyme for determination of transcriptional activity

    CEYLAN TOPRAK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    BiyolojiBalıkesir Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. HATİCE YILDIRIM

  2. İnsan serum paraoksonaz (PON1) enziminin yeni bir yöntemle saflaştırılması ve bazı antibiyotiklerin enzim üzerindeki etkilerinin araştırılması

    The purification of human serum paraoxonase (PON1) by newly method and effects of some antibiotics on this enzyme

    SELMA SİNAN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2005

    KimyaBalıkesir Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. OKTAY ARSLAN

  3. Karaciğer hücrelerinde paraoksonaz 1 ekspresyonunun PPARα ile kontrolü

    Control of paraoxonase 1 expression with PPARα in liver cell lines

    SEVGİ ÇEVİK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    BiyokimyaHacettepe Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. FİLİZ AKBIYIK

  4. İnsan serumundan paraoksonaz-ı enziminin saflaştırılması ve bazı ilaçların enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi

    Purification of paraoxonase-i enzyme from human serum and investigation of the effects of some drugs on the enzyme activity

    CÜNEYT TÜRKEŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    KimyaAtatürk Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ŞÜKRÜ BEYDEMİR

  5. İnsan serum paraoksonaz enzimi (PON1) 192 GLN-ARG gen polimorfizminin belirlenmesi

    The determination of gln-arg 192 gene polymorphism of human serum paraoxonase (PON1)

    FUNDA AKÇAY

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2006

    BiyolojiBalıkesir Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. FERAY KÖÇKAR

    PROF. DR. OKTAY ARSLAN