Mitokondrial glutamat dehidrogenaz enziminin koyun karaciğerinden saflaştırılması, karakterizasyonu ve enzim aktivitesi üzerine bazı metal iyonlarının etkilerinin incelenmesi
Purification and characterization of mitochondrial glutamate dehydrogenase enzyme from sheep liver, and investigation of some metal ions' effects on the enzyme activity
- Tez No: 376325
- Danışmanlar: PROF. DR. ÖMER İRFAN KÜFREVİOĞLU
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2014
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 96
Özet
Bu çalışmada koyun karaciğer mitokondrisinden glutamat dehidrogenaz (NAD(P)+-spesifik EC 1.4.1.3, GDH) enzimi 2', 5'-ADP Sepharose 4B afinite kromatografisi kullanılarak ilk kez tek basamakta saflaştırılmıştır. Enzim yaklaşık olarak 1320 EÜ/mg protein spesifik aktiviteyle, %9 verimle, 272 kat elde edilmiştir. Saflaştırılan enzimin stabil pH'sı 7,0; optimum pH'sı 7,5; optimum iyonik şiddeti 500 mM K-fosfat, optimum sıcaklığı 40ºC, tabii molekül kütlesi jel filtrasyon kromatografisi ile 363 kDa ve alt birimlerinin molekül kütlesi 62 kDa olarak bulunmuş ve özdeş altı alt birimden oluştuğu tespit edilmiştir. Saflaştırılan enzimin substratlarının ve koenzimlerinin KM sabiti ve Vmax değerleri de belirlenmiştir. NADH, NADPH, α-ketoglutarat, NH4+, NAD+, NADP+ ve L-glutamat için KM sabitleri sırası ile 0,14; 1,67; 0,40; 12,92; 1,21; 0,24 ve 5,57 mM olarak, Vmax değerleri 3,86; 3,08; 1,68; 1,32; 0,81; 0,27 ve 0,46 EÜ/ml olarak bulunmuştur. Saflaştırılan enzim üzerine bazı metal iyonlarının inhibisyon etkisi araştırılmış, Ag+; Zn+2; Cu+2; Co+2; Ni+2 ve Fe+3 iyonlarının enzimi inhibe ettiği görülmüştür. İnhibisyon etkisi gösteren metallerin IC50 değerlerini belirlemek için %aktivite-[metal iyonu] grafiği ve inhibisyon türünü belirlemek ve Ki sabitini hesaplamak amacı ile Lineweaver-Burk grafikleri çizilmiş ve inhibisyon türü belirlenmiştir.
Özet (Çeviri)
In this study, glutamate dehydrogenase (NAD(P)+-specific EC 1.4.1.3, GDH) enzyme was purified from sheep liver for the first time by using 2',5'-ADP Sepharose 4B affinity chromatography in a single step. Enzyme was obtained with a specific activity of 1320 EU/mg protein, 272 fold and 9% yield. Optimal conditions for the enzyme were determined as optimal pH 7.5, optimal ionic strength 500 mM, optimal temperature 40ºC, stable pH 7.0. Natural molecular weight and subunits' molecular weight for the enzyme were determined as 363 kDa from the gel filtration chromatography and 62 kDa from the SDS-PAGE. It was concluded that mitochondrial GDH was composed of six identical subunits. KM constants and Vmax values for NADH, NADPH, α-ketoglutarate, NH4+, NAD+, NADP+ and L-glutamate which were substrates and coenzymes of the enzyme were examined and KM constants were calculated as 0.14; 1.67; 0.40; 12.92; 1.21; 0.24 and 5.57 mM, Vmax values were calculated as 3.86; 3.08; 1.68; 1.32; 0.81; 0.27 and 0.46 EU/ml respectively. Also, the inhibition effects of some metal ions on the enzyme activity were investigated. Ag+; Zn2+; Cu2+; Co2+; Ni2+ ve Fe3+ inhibited the enzyme and Ki constants and inhibition types of these ions were determined from the Lineweaver-Burk graphs.
Benzer Tezler
- Mısır (Zea mays L.) bitkisinin üşümeye direnci üzerine karnitinin etkilerinin lipid ve solunum metabolizması ile bağlantılı olarak araştırılması
Investigation of the carnitine effects on chilling resistance of maize (Zea mays L.) plant in connection with lipid and respiratory metabolism
HÜLYA TÜRK
- Tütün bitkisinde GABA-stres ilişkisinin belirlenmesi
Investigation of GABA-stress relation in tobacco plant
NEŞE AKÇAY
- Glioblastoma primer beyin tümörlerinde SIRT4'ün glutamat metabolizması ile ilişkisinin incelenmesi ve potansiyel tümör baskılayıcı özelliğinin araştırılması
Investigation of the relationship between SIRT4 and the glutamate metabolism and its tumor suppressing potantial in glioblastoma primary tumor tissues
AYŞENUR AKKULAK
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
Tıbbi BiyolojiAydın Adnan Menderes ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GİZEM DÖNMEZ YALÇIN
- Endometriozisli hastalarda sirtuin3' ün enerji metabolizması ve oksidatif stresle ilişkisinin incelenmesi
Relation of sirtuin3 with energy metabolism and oxidative stress in patients with endometriosis
İSLİM KALELER
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
Biyokimyaİstanbul ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FATMA EZEL USLU
- Dopaminerjik nöronal hasarda gsk-3β enzim inhibisyonu ile nrf2/are yolağı arasındaki ilişkinin incelenmesi
The investigation of the relationship between gsk-3β enzyme inhibition and nrf2/are pathway in dopaminergic neuronal injury
ELVİN SEVGİLİ