Geri Dön

Karadeniz alabalığı (Salmo trutta Labrax) böbrek, karaciğer, solungaç ve kas dokularından karbonik anhidraz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı metal iyonlarının enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi

Purification and characterization of carbonic anhydrase enzyme from black sea trout (Salmo trutta Labrax) tissues and inhibition effects of some metal ions on the enzyme activity

PDF İndir

  1. Tez No: 380493
  2. Yazar: MURAT KÜÇÜK
  3. Danışmanlar: PROF. DR. İLHAMİ GÜLÇİN
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Karadeniz alabalığı, Salmo trutta Labrax, enzim saflaştırma, enzim karakterizasyon, karbonik anhidraz, ağır metal, Black sea trout, Salmo trutta Labrax, enzyme purification, enzyme characterization, carbonic anhydrase, heavy metal
  7. Yıl: 2015
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Atatürk Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 190

Özet

Bu tez kapsamında Karadeniz alabalığı (Salmo trutta Labrax) böbrek, karaciğer, solungaç ve kas dokularından karbonik anhidraz (CA) enzimi sırasıyla 603.77, 561.79, 1395.35 ve 297.03 EÜ/mg spesifik aktiviteleriyle birlikte, %35.5, 18.6, 71.1 ve 75.0 verimlerle Sepharose-4B-L-tirozin-sülfanilamid afinite kolon kromatografisi kullanılarak saflaştırıldı. Karadeniz alabalığının böbrek, karaciğer, solungaç ve kas dokuları CA enzimi için saflaştırma kat sayıları sırasıyla 349.00, 362.45, 1116.28 ve 471.47 olarak tespit edildi. Enzimin saflığını kontrol etmek ve alt birim molekül kütlelerini tespit etmek amacıyla SDS-poliakrilamid jel elektroforezi yapıldı ve tek bant gözlendi. Enzimin alt birim molekül kütlesi böbrek doku için 29.71 kDa, karaciğer doku için 29.50 kDa, solungaç doku için 32.00 kDa ve kas doku için 28.80 kDa olarak belirlendi. Tüm dokulardan saflaştırılan CA enzimi için optimum iyonik şiddet 1 M Tris-SO4 tamponu olarak belirlendi. Optimum ve stabil pH değerleri 4°C'de 1 M Tris-SO4 ve fosfat tamponları kullanılarak hesaplandı. CA enziminin optimum sıcaklık, aktivasyon enerjisi (Ea), aktivasyon entalpisi (∆H) ve Q10 değerleri Arrhenius grafiğinden elde edildi. Saflaştırılan enzimlerin KM ve Vmax değerleri Lineweaver-Burk grafiklerinden hesaplandı. Karadeniz alabalığının böbrek, karaciğer, solungaç ve kas dokuları CA enzimi kcat değerleri sırasıyla 688.05, 1505.62, 1824.29 ve 1222.78 s-1 olarak hesaplandı. Bununla birlikte, Karadeniz alabalığı dokularından saflaştırılan CA enzimi aktivitesi üzerine bazı ağır metal iyonlarının (Fe2+, Pb2+, Co2+, Ag+ ve Cu2+) inhibisyon etkileri esteraz metodu kullanılarak in vitro şartlarda incelendi. Enzim aktivitesinin %50'sinin inhibe edildiği metal konsantrasyonları (IC50) tüm dokulardan saflaştırılan CA enzimleri için belirlendi. Son olarak bu dokular için Ki değerleri ve inhibisyon tipleri Lineweaver-Burk grafiklerinden hesaplandı.

Özet (Çeviri)

In this thesis, carbonic anhydrase (CA) enzyme was purified from black sea trout (Salmo trutta Labrax) kidney, liver, gills and muscle tissues with a specific activity of 603.77, 561.79, 1395.35 and 297.03 EU/mg and a yield of 35.5%, 18.6, 71.1 and 75,0% using Sepharose-4B-L-tyrosine-sulphanilamide affinity column chromatography, respectively. The overall purifications from black sea trout kidney, liver, gills and muscle tissues CA enzymes were approximately 349.00, 362.45, 1116.28 and 471.47 fold purified respectively. For determination of enzyme purity and subunit molecular weights, SDS-gel electrophoresis was performed and single band was absorved for each tissue. The subunit molecular weight of enzymes were evaluated as 29.71 kDa for kidney, 29.50 kDa for liver, 32.00 kDa for gills and 28.80 kDa for muscle tissues. Optimum ionic strengths for CA enzymes from all tissues were obtained as 1 M Tris-SO4 buffer. Optimum and stable pHs were determined 1 M Tris-SO4 and phosphate buffers at 4°C. The optimum temperature, activation energy (Ea), activation enthalpy (∆H) and Q10 values were obtained from Arrhenius plot for CA enzymes. Then KM and Vmax values for p-nitrophenilacetate of the purified enzymes were calculated from Lineweaver-Burk graphs. Kcat values of the black sea trout's kidney, liver, gills and muscle tissues CA enzymes were calculated as 688.05, 1505.62, 1824.29 and 1222.78 s-1 respectively. Also, the inhibitory effects of different heavy metal ions (Fe2+, Pb2+, Co2+, Ag+ ve Cu2+) on black sea trout CA enzyme activities were investigated by using esterase method under in vitro conditions. The heavy metal concentrations inhibiting 50% of enzyme activity (IC50) were obtained for CA enzymes from all tissues. Finally, Ki values and inhibition types for these tissues were also calculated from Lineweaver-Burk graphs.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    470646

    Karadeniz alabalığı (Salmo trutta labrax) yeminde kanola ve aspir yağı kullanımının büyüme performansı ve yağ asidi kompozisyonu üzerine etkisi

    Effect of using canola and safflower oils in black sea trout (Salmo trutta labrax) diets on growth performance and fatty acid composition

    MURAT KERİM

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    Su ÜrünleriSinop Üniversitesi

    Su Ürünleri Yetiştiriciliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SERAP USTAOĞLU TIRIL

  2. Tez No

    424448

    Karadeniz alabalığı (Salmo trutta labrax Pallas,1811) ve kaynak alabalığı (Salvelinus fontinalis Mitchiil, 1814) hibridlerinde (kaplan alabalığı) mikrosatellit DNA analiz yöntemiyle ebeveynlerinden gen akışının belirlenmesi

    Identification of gene flow through microsatellite DNA analysis for black sea trout(Salmo trutta Labraxpallas,1811) and brook trout (Salvelinus Fontinalismitchiil, 1814) in their hybrids (tiger trout)

    DİLAN ARSLAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    Balıkçılık TeknolojisiKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Balıkçılık Teknolojisi Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. ŞEBNEM ATASARAL ŞAHİN

  3. Tez No

    571454

    Karadeniz alabalığı (Salmo trutta labrax, Pallas 1811) larvalarının beslenmesinde annelid ve nematod kullanımının büyüme performansı ve yaşama oranı üzerine etkisi

    Effects on growth performance and survival rate of black sea trout larvae (Salmo trutta labrax, Pallas 1811) fed with annelida and nematoda worms

    TALYA AKAR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    Su Ürünleriİstanbul Üniversitesi

    Su Ürünleri Yetiştiriciliği ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ DENİZ DEVRİM TOSUN

  4. Tez No

    302414

    Karadeniz alabalığı (Salmo trutta labrax Pallas, 1811) larvalarının düşük tuzluluklarda besin kesesi tüketimi

    Yolk sac absorption of Black Sea trout (Salmo trutta labrax Pallas, 1811) alevins in low salinities

    RASİM ONUR CİVELEK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    Balıkçılık TeknolojisiKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Balıkçılık Teknolojisi Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. NADİR BAŞÇINAR

  5. Tez No

    245844

    Karadeniz alabalığı (Salmo trutta labrax pallas, 1811)'nda ebeveynlerin döllenme oranı, kuluçka randımanı, larva ve yavru gelişimi üzerine etkileri

    Parental effects on fertilization rate, incubation efficiency, larvae and fry development in Black Sea trout (Salmo trutta labrax)

    FATMA DELİHASAN SONAY

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2008

    Su ÜrünleriRize Üniversitesi

    Su Ürünleri Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. İBRAHİM OKUMUŞ

Geri Dön