Geri Dön

Geobacillus stearothermophilus AH22 suşundan lipaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

Purification and characterization of lipase enzyme from Geobacillus stearothermophilus AH22 strain

  1. Tez No: 388276
  2. Yazar: ARİFE PINAR EKİNCİ
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. BARBAROS DİNÇER
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Kimya, Biochemistry, Chemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Geobacillus stearothermophilus AH22, Lipaz, Saflaştırma, Karekterizasyon, Geobacillus stearothermophilus AH22, Lipase, Purification, Characterization
  7. Yıl: 2015
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Recep Tayyip Erdoğan Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 140

Özet

Bu çalışmada, yeni izole edilmiş ve termofilik bir bakteri olan Geobacillus stearothermophilus AH22 suşundan endüstriyel bir enzim olan lipaz, iyon değişim kromatografisi ve jel filtrasyon kromatografisi kullanılarak kısmi olarak saflaştırıldı ve karakterize edildi. Lipaz enzimi %19.7 verimle 18.3 kat saflaştırılarak elde edildi. Kısmi saflaştırılmış lipaz enziminin moleküler ağırlığı SDS-PAGE kullanılarak yaklaşık 26 kDa olarak belirlendi. Enzim p-nitrofenil asetat, p-nitrofenil bütirat, p-nitrofenil oktaonat ve p-nitrofenil laurat substratları varlığında karakterize edildi. Enzimin Km ve Vmaks değerleri p-nitrofenil asetat, p-nitrofenil bütirat, p- nitrofenil oktaonat ve p- nitrofenil laurat substratları varlığında Lineweaver-Burk eğrisi yardımıyla belirlendi. Enzimin Km değerleri sırasıyla 0.16, 0.02, 0.19 ve 0.55 mM olarak, Vmaks değerleri ise sırasıyla 0.52 EU mg−1, 1.03 EU mg−1, 0.72 EU mg−1 ve 0.15 EU mg−1 olarak hesaplandı. Enzimin kullanılan substratlar varlığında en yüksek aktiviteyi 50 ile 60 oC' de ve pH 8 ile 9' da gösterdiği tespit edildi. Enzimin 50 ile 60 °C arasında termal kararlığının, +4 °C' de pH 8.0-10.0 aralığında ise pH karalılığının oldukça iyi olduğu gözlendi. Lipaz aktivitesine bazı metal tuzlarının ve bileşiklerin etkisi incelendi. Enzim aktivitesini en fazla Hg2+ iyonunun inhibe ettiği tespit edildi. Bununla birlikte orlistat, kateşin, propil paraben, p-kumarik asit ve 3,4- dihidroksi hidrosinamik asit inhibitörlerinin IC50 değerleri sırasıyla 0.0085, 0.06, 0.5, 1.25 ve 1.7 mM olarak belirlendi. Bu sonuçlar, Geobacillus stearothermophilus AH22 lipazının ısıl ve pH kararlılığı ve diğer özellikleri açısından endüstriyel uygulamalar için oldukça elverişli özelliklere sahip olduğunu göstermektedir.

Özet (Çeviri)

In this study, the lipase, as an industrial enzyme, was partially purified by ion exchange and gel filtration column chromatographies and was characterised from Geobacillus stearothermophilus AH22 strain. The lipase was purified 18.3-folds with 19.7% recovery. Protein samples obtained from the purification steps were migrated on SDS-PAGE and molecular weight of enzyme was found to be about 26 kDa. The lipase activity was determined by using p-nitrophenly acetate, p-nitrophenly butyrate, p-nitrophenly octaonate and p-nitrophenly laurate as substrates. The Km values of the enzyme for these substrates were found as 0.16, 0.02, 0.19 and 0.55 mM, respectively. Also Vmax values were found 0.52 EU mg−1, 1.03 EU mg−1, 0.72 EU mg−1and 0.15 EU mg−1. The enzyme showed maximum activity at 50 °C and pH ranging for in 8.0-9.0. It was observed that the enzyme was quite stable at pH range of 8.0-10.0 at +4 °C and thermal stability between 50 and 60 °C. The effect of some metal salts and compounds were investigated on the lipase activity. It was found that Hg2+ is the best inhibitor for this enzyme activity. The inhibitory effect of some chemicals including as orlistat, catechin, propyl paraben, p-coumaric acid, 3,4-dihydroxy hydro cinnamic acid, PMSF was examined and their IC50 values was calculated as 0.0085, 0.06, 0.5, 1.25, 1.7 and 1.6 mM, respectively. These results suggest that Geobacillus stearothermophilus AH22 lipase presents very suitable proporties for industrial applications.

Benzer Tezler

  1. Geobacillus stearothermophilus AH22 suşundan glukoz izomerazın karakterizasyonu

    Characterization of glucose isomerase from Geobacillus stearothermophilus AH22 strain

    MÜGE BOZ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    KimyaRecep Tayyip Erdoğan Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. ÖZLEM FAİZ

  2. Geobacillus stearothermophilus Ah22 bakterisi membranına bağlı lipazın karakterizasyonu

    Characterization of lipase bound to membrane of Geobacillus stearothermophilus Ah22 bacteria

    ENGİN İSKENDER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    BiyokimyaRecep Tayyip Erdoğan Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ BARBAROS DİNÇER

  3. Geobacillus stearothermophilus 12 suşundan iki farklı alfa-L-arabinofuranosidaz geninin klonlanması, ekspresyonu, saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Cloning, expresion, purification and characterization of two different alpha-L arabinofuranosidase genes from Geobacillus stearothermophilus 12 strain

    İCLAL ŞAHİN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    BiyolojiKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SABRİYE ÇANAKÇI

  4. Geobacillus stearothermophilus Ah6'dan proteaz üretimi ve optimizasyonu

    Production and optimization of protease from Geobacillus stearothermophilus

    YEŞİM DALİ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyoteknolojiAtatürk Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ORHAN ERDOĞAN

  5. Geobacillus stearothermophilus'tan ekstraselüler ?-amilaz enziminin izolasyonu, saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Isolation, purification and characterization of extracellular ?-amylase from Geobacillus stearothermophilus

    BARIŞ ENEZ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    BiyolojiDicle Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. SEMA AGÜLOĞLU FİNCAN