Geobacillus stearothermophilus AH22 suşundan lipaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of lipase enzyme from Geobacillus stearothermophilus AH22 strain
- Tez No: 388276
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. BARBAROS DİNÇER
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Kimya, Biochemistry, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Geobacillus stearothermophilus AH22, Lipaz, Saflaştırma, Karekterizasyon, Geobacillus stearothermophilus AH22, Lipase, Purification, Characterization
- Yıl: 2015
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Recep Tayyip Erdoğan Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 140
Özet
Bu çalışmada, yeni izole edilmiş ve termofilik bir bakteri olan Geobacillus stearothermophilus AH22 suşundan endüstriyel bir enzim olan lipaz, iyon değişim kromatografisi ve jel filtrasyon kromatografisi kullanılarak kısmi olarak saflaştırıldı ve karakterize edildi. Lipaz enzimi %19.7 verimle 18.3 kat saflaştırılarak elde edildi. Kısmi saflaştırılmış lipaz enziminin moleküler ağırlığı SDS-PAGE kullanılarak yaklaşık 26 kDa olarak belirlendi. Enzim p-nitrofenil asetat, p-nitrofenil bütirat, p-nitrofenil oktaonat ve p-nitrofenil laurat substratları varlığında karakterize edildi. Enzimin Km ve Vmaks değerleri p-nitrofenil asetat, p-nitrofenil bütirat, p- nitrofenil oktaonat ve p- nitrofenil laurat substratları varlığında Lineweaver-Burk eğrisi yardımıyla belirlendi. Enzimin Km değerleri sırasıyla 0.16, 0.02, 0.19 ve 0.55 mM olarak, Vmaks değerleri ise sırasıyla 0.52 EU mg−1, 1.03 EU mg−1, 0.72 EU mg−1 ve 0.15 EU mg−1 olarak hesaplandı. Enzimin kullanılan substratlar varlığında en yüksek aktiviteyi 50 ile 60 oC' de ve pH 8 ile 9' da gösterdiği tespit edildi. Enzimin 50 ile 60 °C arasında termal kararlığının, +4 °C' de pH 8.0-10.0 aralığında ise pH karalılığının oldukça iyi olduğu gözlendi. Lipaz aktivitesine bazı metal tuzlarının ve bileşiklerin etkisi incelendi. Enzim aktivitesini en fazla Hg2+ iyonunun inhibe ettiği tespit edildi. Bununla birlikte orlistat, kateşin, propil paraben, p-kumarik asit ve 3,4- dihidroksi hidrosinamik asit inhibitörlerinin IC50 değerleri sırasıyla 0.0085, 0.06, 0.5, 1.25 ve 1.7 mM olarak belirlendi. Bu sonuçlar, Geobacillus stearothermophilus AH22 lipazının ısıl ve pH kararlılığı ve diğer özellikleri açısından endüstriyel uygulamalar için oldukça elverişli özelliklere sahip olduğunu göstermektedir.
Özet (Çeviri)
In this study, the lipase, as an industrial enzyme, was partially purified by ion exchange and gel filtration column chromatographies and was characterised from Geobacillus stearothermophilus AH22 strain. The lipase was purified 18.3-folds with 19.7% recovery. Protein samples obtained from the purification steps were migrated on SDS-PAGE and molecular weight of enzyme was found to be about 26 kDa. The lipase activity was determined by using p-nitrophenly acetate, p-nitrophenly butyrate, p-nitrophenly octaonate and p-nitrophenly laurate as substrates. The Km values of the enzyme for these substrates were found as 0.16, 0.02, 0.19 and 0.55 mM, respectively. Also Vmax values were found 0.52 EU mg−1, 1.03 EU mg−1, 0.72 EU mg−1and 0.15 EU mg−1. The enzyme showed maximum activity at 50 °C and pH ranging for in 8.0-9.0. It was observed that the enzyme was quite stable at pH range of 8.0-10.0 at +4 °C and thermal stability between 50 and 60 °C. The effect of some metal salts and compounds were investigated on the lipase activity. It was found that Hg2+ is the best inhibitor for this enzyme activity. The inhibitory effect of some chemicals including as orlistat, catechin, propyl paraben, p-coumaric acid, 3,4-dihydroxy hydro cinnamic acid, PMSF was examined and their IC50 values was calculated as 0.0085, 0.06, 0.5, 1.25, 1.7 and 1.6 mM, respectively. These results suggest that Geobacillus stearothermophilus AH22 lipase presents very suitable proporties for industrial applications.
Benzer Tezler
- Geobacillus stearothermophilus AH22 suşundan glukoz izomerazın karakterizasyonu
Characterization of glucose isomerase from Geobacillus stearothermophilus AH22 strain
MÜGE BOZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
KimyaRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ÖZLEM FAİZ
- Geobacillus stearothermophilus Ah22 bakterisi membranına bağlı lipazın karakterizasyonu
Characterization of lipase bound to membrane of Geobacillus stearothermophilus Ah22 bacteria
ENGİN İSKENDER
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyokimyaRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ BARBAROS DİNÇER
- Geobacillus stearothermophilus 12 suşundan iki farklı alfa-L-arabinofuranosidaz geninin klonlanması, ekspresyonu, saflaştırılması ve karakterizasyonu
Cloning, expresion, purification and characterization of two different alpha-L arabinofuranosidase genes from Geobacillus stearothermophilus 12 strain
İCLAL ŞAHİN
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SABRİYE ÇANAKÇI
- Geobacillus stearothermophilus Ah6'dan proteaz üretimi ve optimizasyonu
Production and optimization of protease from Geobacillus stearothermophilus
YEŞİM DALİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyoteknolojiAtatürk ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ORHAN ERDOĞAN
- Geobacillus stearothermophilus'tan ekstraselüler ?-amilaz enziminin izolasyonu, saflaştırılması ve karakterizasyonu
Isolation, purification and characterization of extracellular ?-amylase from Geobacillus stearothermophilus
BARIŞ ENEZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
BiyolojiDicle ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. SEMA AGÜLOĞLU FİNCAN