Geri Dön

Geobacillus stearothermophilus 12 suşundan iki farklı alfa-L-arabinofuranosidaz geninin klonlanması, ekspresyonu, saflaştırılması ve karakterizasyonu

Cloning, expresion, purification and characterization of two different alpha-L arabinofuranosidase genes from Geobacillus stearothermophilus 12 strain

PDF İndir

  1. Tez No: 343439
  2. Yazar: İCLAL ŞAHİN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. SABRİYE ÇANAKÇI
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Geobacillus stearothermophilus 12, α-L arabinofuranosidaz, enzim saflaştırılması, enzim karakterizasyonu, Geobacillus stearothermophilus 12, α-L arabinofuranosidase, enzyme purification, enzyme characterization
  7. Yıl: 2014
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Gerçekleştirilen bu çalışmada, daha önce yapılan çalışmalarla iki adet arabinofuranosidaz enzimine sahip olduğu belirlenen Geobacillus stearothermophilus 12 bakterisinin bu her iki enzimine ait olan gen dizileri öncelikle ortaya çıkarıldı. Her bir gen bir E. coli ekspresyon vektörü olan pET28a'ya klonlanarak E. coli BL21 pLys hücresi içinde ekspres edildi. Ekspres edilen proteinler sahip oldukları histidin kuyruktan faydalanılarak afinite kromotografisi yardımıyla saflaştırıldı. Saflaştırılan proteinlerin karakterizasyonları gerçekleştirildi. Her iki enzimin de 56-57 kDa civarında olduğu, optimum çalışma sıcaklıklarının birbirlerinden farklı olup Abf1'in optimum olarak 65°C'de, Abf2'nin ise 50°C'de aktivite gösterdiği, optimum çalışma pH'larının ise Abf1'in 6,5; Abf2'nin ise 5,5 olduğu belirlendi. Abf 1'in 6,0'nın üzerindeki pH'larda uzun süre kararlı olduğu, buna karşı Abf2'nin pH kararlılığının iyi olmadığı tespit edildi. Her iki enzimin de subtrat olarak p-NP α-L arabinofuranosidden başka bir substratı kullanmadığı görüldü.

Özet (Çeviri)

This study, firstly, finds out the gene sequence of two arabinofuranosidase enzymes belonging to the bacteria called Geobacillus stearothermophilus 12 which has been found out to have these two enzymes in former studies. On the basis of these sequences, each gene is expressed in the cell of E. coli BL21 plys by cloning them to pET28 which is an E.coli expression vector. The proteins expressed were purified via affinity chromatography and by making use of their Histidine Tag. The characterization of these purified proteins was done. In this study, it is shown that both enzymes are about 57 kDa and that they have different optimum activation temperature. The optimum activation temperature of Abf1 is 65°C whereas it is 50°C for Abf2. Moreover, it is found out that the optimum PH activation of Abf1 is 6,5 and it is 5,5 for Abf2. It is also identified that Abf1 is stable a long time at pH over 6,0 but the pH stability of Abf2 is not good. It is also observed that both enzymes do not use any substrate other than pNP a-L arabinofuranosidase.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    170895

    Cloning, expression and purification of the recombinant DNA polymerase I from the hyperthermophilic bacteria Geobacillus anatolicus

    Hipertermofilik Geobacillus anatolicus bakterilerinde rekombinant DNA polimeraz I'in klonlanması, ekspresyonu ve saflaştırılması

    MELİKE ÇAĞLAYAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2005

    Tıbbi BiyolojiBoğaziçi Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. NEŞE BİLGİN

  2. Tez No

    177738

    Meyve suyu üretiminde kullanım amaçlı, pektin liyaz üreten yeni mikroorganizmaların aranması ve bulunan türlerde enzimin saflaştırılıp karakterize edilmesi

    In order to use in fruit juice industry, investigation of new microorganizms producing pectin lyase enzyme and purification and characterization of these enzymes

    SAFİNUR YILDIRIM ÇELİK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    BiyokimyaAtatürk Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. NAZAN DEMİR

  3. Tez No

    181238

    Cloning, expression and purification of recombinant elongation factor ts from hyperthermophilic bacteria geobacillus anatolicus

    Hipertermofilik geobacillus anatolicus bakterilerinden rekombinant elongasyon faktörü Ts'nin klonlanması, ekspresyonu ve saflaştırılması

    TOROS ŞAHİN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2006

    BiyomühendislikBoğaziçi Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NEŞE BİLGİN

  4. Tez No

    181199

    Cloning, expression and purification of recombinant elongation factor tu from hyperthermophilic bacteria geobacillus anatolicus

    Hipertermofilik geobacillus anatolicus bakterilerinden rekombinant elongasyon faktörü tu'nun klonlanması, ekspresyonu ve saflaştırılması

    BARIŞ AKALIN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2006

    BiyolojiBoğaziçi Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NEŞE BİLGİN

  5. Tez No

    198447

    Sıcak su kaynaklarından termofilik bakteri izolasyonu ve identifikasyonu

    Isolation and identification of thermophilic bacteria species from hot springs

    SEDA ERCAN AKKAYA

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2005

    BiyolojiAnadolu Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. MERİH KIVANÇ

  6. Tez No

    212027

    Termofilik Geobacillus caldoxylosilyticus TK4 suşundan DNA polimeraz I'in klonlanması ve karakterizasyonu

    Cloning and characterization of the dna polymerase I from thermophilic Geobacillus caldoxylosilyticus TK4

    CEMAL SANDALLI

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    BiyoteknolojiKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ

Geri Dön