Alkalen fosfataz enziminin saflaştırılması ve bazı ilaçlara karşı afinitesinin araştırılması
Purification of alkaline phosphatase enzyme and investigation of enzyme affinity against some drugs
- Tez No: 395599
- Danışmanlar: DOÇ. DR. NAHİT GENÇER
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Alkalen fosfataz, Enzim saflaştırması, Enzim-inhibisyon yöntemi, Patoloji-veteriner, İnek sütü, Alkaline phosphatase, Enzyme purification, Enzyme-inhibition method, Pathology-veterinary, Cow milk
- Yıl: 2015
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Balıkesir Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu çalışmada, fosfat metabolizmasında önemli role sahip olan Alkalen Fosfatazın (ALP), sütte pastörizasyon belirteci olarak kullanılması gerekçesiyle sütte bulunan izoformu biyokimyasal yöntemlerle saflaştırılmış ve bazı veteriner ilaçların enzim aktivitesi üzerine etkileri araştırılmıştır. Enzim, çeşitli organik çözücülerle muamele edilerek amonyum sülfat çöktürme aralıkları tespit edilmiştir. Sütü mayalama işlemi ile hazırlanan farklı enzim çözeltileri de dahil olmak üzere, Sephadex G-100 jel filtrasyon kromatografisi ile saflaştırılarak elde edilen enzim aktiviteleri ve saflaştırma dereceleri karşılaştırılmıştır. Sütün mayalanması ile elde edilen enzim çözeltileri SDS poliakrilamid jel elektroforezine uygulanarak yaklaşık 85 kDa ve 185-190 kDa molekül ağırlığına sahip bandlar elde edilirken doğal jel elektroforezinde yaklaşık 170-190 kDa aralığında tek band elde edilmiştir. Süt Alkalen Fosfatazın p-nitrofenil fosfat substratına karşı KM ve Vmax değerleri, Lineawear-Burk yöntemi ile sırasıyla 2,27 mM ve 555,56 EU/dk olarak bulunmuştur. Enzim, pastörizasyon sıcaklığına gelindiğinde inaktive olacağından enzim aktivitesinin gözlenmemesi sütün pastörize olduğunu gösterir. Fakat, veteriner ilaçlar tarafından enzimin inaktivasyonu söz konusu olduğunda, pastörizasyon sıcaklığına ulaşılmadan enzim inhibe olacağından doğru bir pastörizasyon gerçekleştirilemeyecektir. Bu sebeple çalışmamızda çoğunluğu antibakteriyel özelliğe sahip çeşitli veteriner ilaçların saflaştırılmış süt ALP enzim aktivitesi üzerine in vitro etkileri incelenmiş ve inhibisyon etkisi gösteren ilaçların IC50 değerleri hesaplanarak, ilaçlara ait sütte belirlenen maksimum kalıntı limitleriyle karşılaştırılmıştır. ALP'nin bilinen inhibitörü olan Levamisol ile karşılaştırıldığında, enzim aktivitesini azaltan ilaçların zayıf inhibitör etki gösterdiği belirlenmiştir.
Özet (Çeviri)
In this study, Alkaline Phosphatase (ALP) which has a critical role in phosphate metabolism was purified via biochemical methods and the effects of some veterinary drugs on purified milk ALP were determined on account of the fact that using as a pasteurization indicator in milk. Enzyme was homogenized with different organic solvents thereby ammonium sulfate precipitation intervals were determined. The all enzyme samples with different yeasting products were applied to Sephadex G-100 gel filtration column and then the enzyme activities and purification folds obtained from different stages were compared. The different yeasting enzyme products yielded bands, approximately 85 and 185-190 kDa on SDS-PAGE, while yielded a single band, approximately 170-190 kDa on Native-PAGE. The KM and Vmax values were determined by using Lineweaver-Burk plots and p-nitrophenyl phosphate as substrate, 2.27 mM and 555.56 EU/min, respectively. Heat treatment of milk at pasteurization temperature inactivates ALP, which is a good indicator of milk pasteurization. But, in case of decreasing ALP activity by veterinary drugs, inactivation occurs and inaccurate pasteurization performs. Therefore, the in vitro effects of some veterinary drugs, that most of them have antibacterial property, on purified ALP enzyme activity were investigated. The IC50 values of drugs which have inhibitory effect were determined and compared with maximum residue limits in milk belonging to drugs. When compared to Levamisol which is a potent inhibitor of the enzyme, the inhibitory effects of the drugs on the enzyme activity are weak.
Benzer Tezler
- Tatlı patatesten asit fosfataz enziminin kısmi saflaştırması ve kinetik özelliklerinin incelenmesi
The Purification and the study of the kinetic properties of acid phosphatase enzyme obtained from sweet potatoes
ENGİN AYKANAT
Yüksek Lisans
Türkçe
2001
Kimya Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiDOÇ.DR. YÜKSEL AVCIBAŞI GÜVENİLİR
- Sığır karaciğer alkali fosfatazının saflaştırılması fizikokimyasal ve kinetik özelliklerinin araştırılması
Başlık çevirisi yok
YUSUF TÜRKÖZ
- İnsan plasental alkali fosfatazının kısmen saflaştırılması fizikokimyasal ve kinetik özelliklerinin incelenmesi
Physicochemical and kinetic properties of partially purified human placental alkaline phosphatase
AYTAÇ KESKİEĞE
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1997
BiyokimyaAnkara ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. KADİRHAN SUNGUROĞLU
- Antik insan ve Kuzeydoğu Anadolu step filinin (elephas trogontherii-mamut) kemiklerinde alkalen fosfataz enziminin aranması ve tanımlanması
The Purification and characterization of alkalene phosphatase enzyme in ancient human and Northern Anatolia steppe elephant (elephas trogontherii-mammoth) bones
SAFİNUR YILDIRIM
- Biyoaktif alkalen fosfataz taklidi nano yapıların geliştirilmesi
Development of bioactive alkalene phosphatase mimetic nano structutres
DİLARA YENİTERZİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyoteknolojiKonya Gıda ve Tarım ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ GÜLCİHAN GÜLSEREN