Geri Dön

Aspergillus fumigatus HBF125 ekstraselüler α-amilazının üretimi, saflaştırılması ve karakterizasyonu

Production, purification and characterization of extracellular α-amylase from Aspergillus fumigatus HBF125

  1. Tez No: 405369
  2. Yazar: ÖZNUR KOÇ
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. KUBİLAY METİN
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biyoloji, Biyoteknoloji, Biochemistry, Biology, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2015
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Adnan Menderes Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 218

Özet

Çalışmamızda, 91 fungusun sıcaklık sınırları ve endüstriyel enzimlerinin taraması yapıldı. Termotolerant ve termofilik funguslardan en iyi amilaz aktivitesi gösteren Aspergillus fumigatus HBF 125 suşu seçildi. Bu fungusun kültür koşullarının optimizasyonu yapıldı. A. fumigatus HBF125 suşunun en yüksek enzim üretimi için 7 günlük sporulasyon ortamı, %5 inokulum oranı, sıcaklık 35 °C, başlangıç pH 5.0 ve karbon kaynağı %1.5 kepek olarak bulundu. Optimum büyüme ortamında A. fumigatus HBF125 tarafından üretilen ekstaselüler amilaz, nişasta affinite kromatografisi ile %4.7 verimle 54.4 kat saflaştırıldı. Enzimin molekül ağırlığı SDS-PAGE ile 160 kDa olduğu hesaplandı. Enzimin iki alt ünitesi olduğu molekül ağırlıklarının 86.2 ve 73.8 kDa olduğu hesaplandı. Optimum sıcaklığı 60 °C, optimum pH'sı 5.5 olarak bulundu. Enzimin geniş pH (pH 4.0-8.0) ve sıcaklık (25-60 °C) aralığında stabil olduğu saptandı. Amilazın Km değeri 1.43 mg/mL, Vmax değeri ise 909 U/mL bulundu. Ayrıca amilaz geniş bir substrat spesifitesine sahip olduğu saptandı. Enzim aktivitesinin NBS varlığında kuvvetli bir şekilde inhibe olduğu, bu nedenle katalitik işlemde triptofan kalıntılarının önemli rol oynadığı ileri sürüldü. Tween 20 gibi deterjanlardan enzim aktivitesinin etkilenmediği, ancak 1.4-dioksan ve n-propanol tarafından enzimin inhibe olduğu saptandı. Enzim Mn2+, Co2+, Ca2+ ve Ba2+ tarafından aktive edilirken, Hg2+ tarafından kuvvetli bir şekilde inhibe edildi. Enzimin tuz toleransının çok iyi olduğu belirlendi. Amilazın metalloenzim olduğu saptandı.

Özet (Çeviri)

In our study, screening of industrial enzymes and temperature limits of the 91 fungi was done. Aspergillus fumigatus HBF 125 strain was chosen as the best one showing amylase activity from thermotolerant and thermophilic fungi. Culture condition was optimized for this fungus.. The best enzyme production from A. fumigatus HBF125 strain were determined in medium including 7 days sporulation medium, 5% inoculum ratio, temperature 35 °C, starting pH 5.0 and 1.5% bran as carbon source. Extracellular amylase produce by A. fumigatus HBF125 in optimal growth medium purified 54.4 fold with a recovery of 4.7% using starch affinity chromatography. Molecular weight of enzyme was found to be about 160 kDa by SDS-PAGE method. Those two subunits of molecule weight of the enzyme was found to be 86.2 and 73.8 kDa. The temperature and pH for maximum activity of the enzyme were 60 oC and 5.5, respectively. In a wide range of pH and temperature of the enzyme was found to be stable. It was found that the Km and Vmax of amylase were 1.43 mg/mL and Vmax 909 U/mL. In addition, the amylase exhibited broad substrate specificity. The enzyme activity was markedly inhibited in the presence of NBS suggesting that tryptophan residues play an important role in the catalytic process. The enzyme activity was not affected from detergents as Tween 20, but it was found inhibited by 1.4-dioxan and n-propanol. The enzyme by Hg2+ was strongly inhibited while Mn2+, Co2+, Ca2+ and Ba2+ were activated. The salt tolerance of the enzyme was found to be very good. The amylase was found to be metalloenzyme.

Benzer Tezler

  1. Comparative molecular dynamics analysis of a fungal hydrophobin roda behavior at interfacial environment

    Arayüz ortamında mantar hidrofobin roda davranışının karşılaştırmalı moleküler dinamik analizi

    İREM KARA

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    BiyoistatistikAcıbadem Mehmet Ali Aydınlar Üniversitesi

    Biyoistatistik ve Biyoinformatik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. GÜNSELİ BAYRAM AKÇAPINAR

  2. Aspergillus fumigatus'un potansiyel alerjen proteinin tespiti

    Determination of potential allergen protein of Aspergillus fumigatus

    CEMİL AKIN ÜNAL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    BiyolojiGaziantep Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. İBRAHİM HALİL KILIÇ

  3. Aspergillus sp. tarafından üretilen amilaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Purification and characterization of amylase enzyme produced by Aspergillus sp.

    AHSEN UÇAR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    BiyokimyaAdnan Menderes Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. KUBİLAY METİN

  4. Development of a PCR-based specific method for the detedction of aspergillus fumigatus by random CDNA cloning

    Raslantısal CDNA klonlamasıyla aspergillus fumigatus için PCR-bazlı özgül bir tanı yönteminin geliştirilmesi

    ALPER SÖYLER

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2004

    Gıda MühendisliğiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. UFUK BAKIR

  5. Optimization of mannanase production from recombinant Aspergillus sojae and analysis of Galactomannan hydrolysis

    Rekombinant Aspergillus sojae de mannanaz üretiminin optimizasyonu ve Galaktomannan hidroliz analizi

    BENGÜ ÖZTÜRK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2008

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. UFUK BAKIR

    PROF. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL